雷帕霉素对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道重塑中血管内皮生长因子表达作用的研究

目的探讨雷帕霉素对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道重塑中血管内皮生长因子(VEGF)表达的作用。方法 2015年6月—2016年3月,采用随机数字表法将30只SPF级健康雄性Wistar大鼠分为正常组、模型组、雷帕霉素组,每组10只。模型组与雷帕霉素组采用气道内滴入脂多糖(LPS)加烟熏双重刺激法建立COPD气道重塑大鼠模型,正常组不予任何干预。雷帕霉素组给予雷帕霉素治疗,模型组、正常组给予等量的0.9%氯化钠溶液。干预治疗14 d后,收集各组大鼠血清、肺泡灌洗液(BALF)、肺组织标本;取部分右侧肺组织行HE染色,剩余右侧肺组织行Masson染色与免疫组化染色,分别计算小气道基底膜单位长度的胶原厚度(WAc/Pbm)、细支气管VEGF阳性表达面积占气管管壁总面积的百分比(Aim/WAt);采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清、BALF及肺组织中VEGF水平。结果 HE染色结果显示,与模型组比较,雷帕霉素组大鼠细支气管、肌性动脉形态及肺组织病理改变有所改善;Masson染色结果显示,模型组、雷帕霉素组大鼠WAc/Pbm大于正常组,雷帕霉素组大鼠WAc/Pbm小于模型组(P<0.05)。免疫组化染色结果显示,模型组、雷帕霉素组大鼠Aim/WAt大于正常组,雷帕霉素组大鼠Aim/WAt小于模型组(P<0.05)。ELISA法检测结果显示,模型组、雷帕霉素组大鼠血清、BALF、肺组织中VEGF水平高于正常组,雷帕霉素组大鼠血清、BALF、肺组织中VEGF水平低于模型组(P<0.05)。结论雷帕霉素可以改善COPD大鼠气道重塑,这可能与雷帕霉素干预治疗减少了COPD大鼠气道重塑中VEGF水平,进而抑制血管新生有关。

胡柚皮黄酮对非酒精性脂肪性肝炎小鼠Th17/Treg平衡的调节作用

主要通过观察胡柚皮黄酮(PTFC)对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠Th17/Treg平衡的调节作用,探讨其干预NASH进展的免疫机制。以高脂饮食16周建立C57BL/6小鼠NASH模型,在造模第7周起分别预以25,50,100 mg·kg-1·d-1的PTFC灌胃干预10周,生化法检测血清TG,CHOL,ALT,AST水平,HE染色观察肝组织病理学变化;Real-time PCR检测肝组织RORγt和Foxp3 mRNA表达;流式CBA法检测血清IL-17,IL-6,IL-10,IL-4水平。研究发现,模型组小鼠血清CHOL,ALT,AST水平较正常组升高,TG水平下降;肝组织RORγt mRNA表达增强,Foxp3 mRNA表达下降,RORγt/Foxp3比值下降;血清IL-17,IL-6水平升高,IL-10,IL-4水平降低;PTFC干预后能明显减轻NASH小鼠肝组织炎症程度,改善肝功能,同时能够促进肝组织Foxp3 mRNA的表达而抑制RORγt mRNA表达,有效降低促炎因子IL-17和IL-6的水平而提高抑制性细胞因子IL-10和IL-4的水平。研究表明,高脂饮食诱导的NASH小鼠存在着Th17/Treg的免疫失衡,PTFC能通过调节Th17/Treg的平衡而缓解NASH的炎症反应,防止其进展。

维生素E对非酒精性脂肪性肝病小鼠肝脏SIRT1、PGC-1α表达的影响

目的观察维生素E(Vit E)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠肝脏SIRT1和PGC-1α表达的影响,探讨Vit E在NAFLD小鼠中抗氧化应激的作用机制。方法采用高脂饮食24周建立C57BL/6小鼠NAFLD模型,于造模第7周起以50 mg·kg^(-1)·d^(-1)Vit E灌胃干预18周,HE和Masson染色观察肝组织病理学变化;生化法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,黄嘌呤氧化酶法检测肝脏总超氧化物歧化酶(SOD)、MnSOD水平,硫代巴比妥酸法检测肝脏丙二醛(MDA)含量;Real-time PCR和免疫组化法检测肝组织沉默信息调节蛋白1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)mRNA和蛋白的表达。结果长期高脂饮食可诱导小鼠肝组织脂肪变、炎症及纤维化,形成NAFLD,NAFLD模型组小鼠血清ALT、AST水平较正常组显著增高(P<0.05),肝组织SIRT、PGC-1α基因mRNA和蛋白表达均较正常组明显减少(P<0.01);肝组织总SOD、MnSOD水平较正常组明显降低(P<0.01),MDA含量较正常组明显增多(P<0.05);应用Vit E干预后能一定程度减轻肝组织炎症程度和纤维化程度;Vit E组小鼠血清ALT、AST水平较模型组显著下降(P<0.01、P<0.05),肝组织SIRT1、PGC-1α基因mRNA和蛋白表达均较模型组显著增强(P<0.05),肝组织总SOD和MnSOD水平也较模型组明显增高(P<0.05),MDA含量则较模型组明显下降(P<0.05)。结论 Vit E通过调节SIRT1/PGC-1α信号通路关键因子的表达,纠正高脂饮食诱导的NAFLD小鼠氧化与抗氧化体系的失衡,减轻肝脏炎症损伤,防止NAFLD的进展。