益气养阴方联合化疗抑制Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长的疗效与机制

目的:观察益气养阴方联合化疗对Lewis肺癌荷瘤小鼠的抑瘤作用,并从CD+4CD+25Treg细胞及Foxp3m RNA表达、IL-2等变化探讨其抗肿瘤机制;方法:近交系雄性C57BL/6纯系小鼠,64只,随机分为对照组、联合组、益气养阴组、化疗组4组,对照组只行造模观察,联合组以化疗联合益气养阴方治疗,益气养阴组只行中药治疗,化疗组只行化疗,观察各组肿瘤体积及抑瘤率,并以ELISA法测定各组血浆IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ浓度,以流式细胞术检测脾脏CD+4CD+25Treg细胞数量,以RT-PCR法测定各组小鼠脾脏Foxp3 m RNA表达;结果:联合组肿瘤体积缩小最明显,抑瘤率最高,DDP组、肺积方组体积缩小、抑瘤率相当;在给药第10、21天,DDP组、肺积方组、联合组血浆IL-2、INF-γ水平均较对照组有差异(P<0.05),其中DDP组较对照组降低(P<0.05),而联合组较对照组升高(P<0.05),DDP组较益气养阴组、联合组均降低明显(P<0.05),联合组较益气养阴组升高(P<0.05);在给药第10天,DDP组、肺积方组、联合组血浆IL-4、IL-10水平均较对照组有差异(P<0.05),其中联合组降低较DDP组、益气养阴组降低有差异(P<0.05),益气养阴组较DDP组降低有统计学差异(P<0.05);第21天DDP组、肺积方组、联合组血浆IL-4、IL-10水平均较对照组降低,降低有差异(P<0.05),但益气养阴组与DDP组比较无差异(P>0.05);在脾脏CD+4CD+25调节性T细胞比例比较中,在第10天,联合组CD+4CD+25调节性T细胞比例较对照组、DDP组、益气养阴组低下(P<0.05),而DDP组与益气养阴组CD+4CD+25调节性T细胞比例无统计学差异(P>0.05),在第21天,联合组CD+4CD+25调节性T细胞比例仍较DDP组、对照组、益气养阴组降低(P<0.05),益气养阴组较DDP组降低(P<0.05);益气养阴组、联合组组内比较,CD+4CD+25调节性T细胞比例无统计学差异(P>0.05),DDP组组内比较,CD+4CD+25调节性T细胞比例第21天较第10天升高(P<0.05);小鼠脾脏中Foxp3 m RNA表达情况:在第10、21天,联合组、DDP组、益气养阴组Foxp3m RNA表达较对照组均降低(P<0.05),联合组较其他3组降低有统计学差异(P<0.05),DDP组、益气养阴组Foxp3 mR NA表达无统计学差异(P>0.05),联合组、益气养阴组组内比较Foxp3 mR NA降低有统计学差异(P<0.05),而DDP组组内比较Foxp3 mR NA表达无差异(P>0.05);结论:益气养阴方联合化疗较单纯化疗、单纯益气养阴治疗有更好的抑制肺癌生长作用,其可能的机制是调节Foxp3 mR NA表达,进而调控T细胞分化,抑制CD+4CD+25调节性T细胞有关。

益气养阴方影响Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长与调节Notch信号表达的关系

目的:通过不同剂量益气养阴方对Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长及肿瘤组织中Notch信号表达影响的观察,从调节Notch信号表达角度,探讨益气养阴方抑制肺癌生长的机制。方法:将60只荷瘤(Lewis肺癌细胞)近交系C57BL/6纯系小鼠随机分为4组:模型组、益气养阴方等效剂量组、益气养阴大剂量组、CTX化疗组,每组15只,模型组只行造模,益气养阴等效剂量组以小鼠体质量每克0.435 m L/g生药灌胃给药,3次/d,大剂量组按小鼠体质量1.36 m L/g生药灌胃给药,3次/d;CTX组按照20 mg/kg溶于0.2 m L生理盐水中腹腔注射,每周1次;各组均常规喂食;干预30 d后,观察记录各组肿瘤及Notch信号表达变化。结果:(1)肿瘤相对体积(RTV)及肿瘤相对抑制率:模型组肿瘤相对体积(RTV)为15.00±1.72,CTX组肿瘤相对体积(RTV)及相对肿瘤体积抑制率分别为8.86±0.91、40.92%,益气养阴等效剂量组肿瘤相对体积(RTV)及相对肿瘤体积抑制率分别为11.33±2.34、24.47%,益气养阴大剂量组为5.89±1.56、60.74%,上述3组较模型组RTV值均缩小(P<0.01),大剂量组RTV均低于其他3组(P<0.01),而CTX组肿瘤相对体积低于等效剂量组(P<0.05);肿瘤抑制率大剂量组较等效剂量组及CTX组高(P<0.05)。(2)肿瘤组织中Notch信号通路表达:模型组Notch1mRNA表达为1.03±0.27,Notch3mRNA表达为1.06±0.33,Jagged1mRNA表达为1.07±0.04,HeslmRNA表达为1.01±0.07;CTX组Notch1mRNA表达为0.24±0.05,Notch3mRNA表达为0.43±0.22,Jagged1mRNA表达为0.29±0.07,HeslmRNA表达为0.40±0.10;益气养阴等效剂量组Notch1mRNA表达为0.57±0.12,Notch3mRNA表达为0.62±0.12,Jagged1mRNA表达为0.43±0.06,HeslmRNA表达为0.60±0.14;益气养阴高剂量组Notch1mRNA表达为0.07±0.05,Notch3mRNA表达为0.05±0.02,Jagged1mRNA表达为0.18±0.07,HeslmRNA表达为0.17±0.04;药物干预组Notch1mRNA表达均较模型组低(P<0.05),等效剂量组Notch1mRNA表达高于CTX组(P<0.05);高剂量组较等效剂量组及CTX组Notch1mRNA表达量低(P<0.05);等效剂量组、高剂量组、CTX组Notch3mRNA表达均较模型组降低(P<0.05),等效剂量组Notch3mRNA表达与CTX组比较无统计学差异(P>0.05);高剂量组较等效剂量组及CTX组Notch3mRNA表达量降低(P<0.05);等效剂量组、高剂量组、CTX组Jagged1mRNA及HeslmRNA表达均较模型组降低(P<0.05),等效剂量组与CTX组Jagged1mRNA及HeslmRNA表达量降低,(P>0.05);高剂量组较等效剂量组及CTX组Jagged1mRNA及HeslmRNA表达量降低(P<0.05)。结论:益气养阴方剂有抑制Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长的作用,且较大剂量的益气养阴方用量更有利于抑制Lewis肺癌细胞生长,而这种抑制作用与益气养阴方剂调控肿瘤组织中Notch1信号通路有关。

益气养阴方对Lewis肺癌移植模型小鼠免疫重塑相关因子表达的影响

目的观察益气养阴方对Lewis肺癌移植模型小鼠免疫重塑相关因子表达的影响。方法30只近交系C57BL/6纯系小鼠行Lewis肺癌细胞移植造模后随机分为三组:模型组、中药组及西药组,每组10只。模型组仅造模;中药组造模后予灌胃益气养阴方悬液(含生药2g/mL),1天1次,每次0.4mL;西药组将Nivolumab按照0.273mg/10g溶于0.2mL生理盐水中腹腔注射,每2周1次;各组均常规喂食。造模后第2天开始给药,给药3周。第7天开始观察记录各组小鼠瘤体大小(每3天测1次瘤体大小)。观察期满后各组小鼠断颈处死,留取各组小鼠肿瘤组织,ELISA法测定肿瘤组织匀浆白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)、转录因子p3(Foxp3)含量,流式细胞仪检测小鼠外周血CD4+CD25+Treg细胞比例。结果中药组及西药组肿瘤体积增长均减慢,两组抑瘤率比较(23.07%比37.55%),差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,中药组及西药组肿瘤组织IL-10含量(1915.79±114.13)pg/mL、(1712.71±157.25)pg/mL比(2257.78±63.00)pg/mL;TGF-β含量(99.59±18.64)pg/mL、(66.83±9.75)pg/mL比(142.33±8.16)pg/mL;Foxp3表达(0.83±0.11)、(0.35±0.09)比(0.98±0.08),均明显下降(P均<0.05);与中药组比较,西药组肿瘤组织IL-10含量(1712.71±157.25)pg/mL比(1915.79±114.13)pg/mL,TGF-β含量(66.83±9.75)pg/mL比(99.59±18.64)pg/mL,Foxp3表达(0.35±0.09)比(0.83±0.11),均明显降低(P均<0.05);与模型组比较,中药组及西药组小鼠外周血CD4+CD25+Treg细胞比例(1.07±0.12)%、(0.50±0.26)%比(1.17±0.38)%,明显降低(P<0.05),西药组小鼠外周血CD4+CD25+Treg细胞比例(0.50±0.26)%较中药组(1.07±0.12)%降低更明显(P<0.05)。结论益气养阴方可抑制Lewis肺癌移植模型小鼠肿瘤生长,其机制可能与降低肿瘤组织Foxp3表达,减少CD4+CD25+Treg细胞分化,降低IL-10、TGF-β表达,改善细胞免疫抑制状态相关。

益气活血汤通过miR-21/PTEN信号通路抑制肺癌细胞恶性生物学行为

目的:探讨益气活血汤(Yiqi Huoxue decoction)对肺癌细胞恶性生物学行为的抑制作用及其机制。方法:以不同浓度益气活血汤含药血清(5%、10%、15%)处理人肺癌A549细胞,CCK-8(Cell Counting Kit-8)法、Transwell小室实验、流式细胞术、Western blot法和定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)法研究益气活血汤含药血清对细胞增殖、迁移和侵袭能力、细胞凋亡、第10染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)蛋白和miR-21表达的影响。结果:与无药血清组相比较,不同剂量的益气活血汤含药血清处理后,A549细胞存活率降低、迁移和侵袭能力下降;细胞凋亡率上升、细胞内PTEN mRNA及其蛋白表达增加、miR-21表达下降,且10%含药血清组的效果最佳。转染miR-21 mimics后,A549细胞中miR-21表达上调,PTEN蛋白表达下调;10%含药血清处理后PTEN蛋白表达上调。结论:益气活血汤可有效抑制人肺癌A549细胞恶性细胞生物学行为,且可能与miR-21/PTEN信号通路的调控有关。

以血尿为首发表现的胰腺癌1例

1病案摘要 患者男性,45岁。因＂肉眼血尿3天＂于2010年1月5日就诊。患者2010年1月初无明显诱因下出现洗肉水样尿,伴有腰酸腰痛,无尿频、尿急、尿痛不适。

肺积方对Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长的抑制作用

目的:观察肺积方对Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法:30只近交系C57BL/6纯系小鼠行Lewis肺癌细胞移植造模后随机分为模型组、肺积方组及环磷酰胺(CTX)化疗组,每组10只。模型组只行造模,肺积方组予每日0.4 ml(含生药0.8 g)灌胃给药;CTX组按15 mg/kg溶于0.2 ml生理盐水中腹腔注射,每周1次;各组均常规喂食。30 d后观察记录各组小鼠瘤体大小;观察期满后各组小鼠断颈处死,留取肿瘤组织进行CD4^+CD25^+Treg流式细胞检测。结果:CTX组及肺积方组肿瘤相对体积(RTV)均较模型组缩小(P<0.05),肺积方组RTV低于CTX组(P<0.05);各组相对肿瘤体积抑制率比较,肺积方组高于CTX组(P<0.05);各组肿瘤组织中CD4^+CD25^+Treg比例比较,肺积方组及CTX组均较模型组降低(P<0.05),CTX组与肺积方组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:肺积方有抑制Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长的作用,其抑制作用可能与减少CD4^+CD25^+Treg细胞分化有关。

益气养阴方影响Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长的实验研究

目的通过对Lewis肺癌移植鼠肿瘤生长及肿瘤组织中Notch信号表达、CD4^+CD25^+Treg细胞变化的观察,探讨益气养阴方干预肺癌的量效关系及机制。方法将肺癌移植小鼠随机分为4组,模型组只行造模;中药组按小鼠体重按不同剂量灌胃给药分为等效剂量组、大剂量组;化疗组以CTX腹腔注射化疗。记录各组小鼠瘤体大小,观察期满后留取标本行Notch信号表达检测。结果 1肿瘤相对体积(RTV)及肿瘤相对抑制率:大剂量组RTV低于其他3组(P<0.01),化疗组RTV低于等效剂量组(P<0.05);大剂量组肿瘤抑制率较其他3组高(P<0.05)。2肿瘤组织中Notch信号通路表达及CD4^+CD25^+Treg细胞:等效剂量组Notch1 mRNA表达及CD4^+CD25^+Treg细胞高于化疗组(P<0.05);高剂量组较等效剂量组及化疗组低(P<0.05);等效剂量组Notch3 mRNA表达与化疗组比较差异无统计学意义(P>0.05);高剂量组较等效剂量组及化疗组Notch3 mRNA表达量降低(P<0.05);等效剂量组、高剂量组、化疗组Jagged1 mRNA及Hesl mRNA表达均较模型组降低(P<0.05),等效剂量组与化疗组Jagged1 mRNA及Hesl mRNA表达量降低(P>0.05);高剂量组较等效剂量组及化疗组Jagged1 mRNA及Hesl mRNA表达量降低(P<0.05)。结论益气养阴方剂有抑制Lewis肺癌移植小鼠肿瘤生长的作用,此种作用与益气养阴方剂的药物用量之间存在量效关系,且此种关系提示较大剂量的益气养阴方用量可能更有利于抑制Lewis肺癌细胞生长,而这种抑制作用与益气养阴方剂调控肿瘤组织中Notch1信号通路及CD4^+CD25^+Treg细胞有关。

益气养阴方对肺癌小鼠肠道微生态的影响及可能的调控机制分析

目的 研究益气养阴方（SQNY）对肺癌小鼠经顺铂处理后肠道微生态的影响及可能的调控机制。方法 建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型;分别给予生理盐水（NC组）、顺铂（DDP组）、CAP方案（CAP组）、DDP＋SQNY;观察各组动物肿瘤体积、体重以及肠道粪便菌群比例、血清白细胞介素（IL）-6、IL^-10、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量;采用流式细胞术法检测各组动物脾脏组织中树突状细胞（DC）和巨噬细胞的含量。结果 自给药3 d后,DDP组、CAP组、DDP＋SQNY组小鼠肿瘤体积明显小于NC组,且DDP＋SQNY组小鼠肿瘤体积和最终瘤重最小（P〈0.05）。NC组和DDP＋SQNY组动物体重变化率基本一致,均高于DDP组和CAP组小鼠（P〈0.05）。经ELISA检测,DDP＋SQNY组小鼠血清IL-6、IL^-10及TNF-α含量明显低于NC组、DDP组和CAP组小鼠（P〈0.05）。DDP＋SQNY组小鼠粪便菌群丰度明显低于其他3组,且在门水平,厚壁菌门比例较其他3组明显升高,拟杆菌门比例明显减低;在属水平,乳酸杆菌比例明显升高（P〈0.05）。DDP＋SQNY组小鼠脾脏内DC数量以及巨噬细胞M1/M2比值明显高于其他3组（P〈0.05）。结论 SQNY可提高DDP治疗后肺癌小鼠抗肿瘤免疫功能,改变肠道菌群的组成,从而降低机体炎症水平,配合化疗药物减毒增效。