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IS200/IS605转座子家族编码的核酸酶OgeuIscB基因编辑体系的优化
1
作者
顾秋茜
王无可
张军
《临床检验杂志》
CAS
2024年第5期370-376,383,共8页
目的提升来源于IS200/IS605转座子家族的RNA引导的核酸内切酶OgeuIscB的基因编辑效率。方法利用OgeuIscB蛋白已解析的晶体结构,计算氨基酸与核酸之间的原子距离,将距离小于10的非正电荷氨基酸残基突变为精氨酸(arginine,R)以提高OgeuIsc...
目的提升来源于IS200/IS605转座子家族的RNA引导的核酸内切酶OgeuIscB的基因编辑效率。方法利用OgeuIscB蛋白已解析的晶体结构,计算氨基酸与核酸之间的原子距离,将距离小于10的非正电荷氨基酸残基突变为精氨酸(arginine,R)以提高OgeuIscB与核酸的亲和力,通过人胚肾293T细胞内源性位点验证不同突变体的基因编辑效率。结果经过两轮迭代突变,发现Q376R-S456R和A401R-S456R这2个双突变体在不同细胞系的多个内源性位点上均能显著提升OgeuIscB的基因编辑效率。结论基于结构对OgeuIscB蛋白进行理性蛋白质工程化改造,能够提升OgeuIscB核酸内切酶活性,为将其作为一种有效的基因编辑工具提供了实验依据。
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关键词
基因编辑
核酸内切酶
IS200/IS605转座子
蛋白质工程
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职称材料
题名
IS200/IS605转座子家族编码的核酸酶OgeuIscB基因编辑体系的优化
1
作者
顾秋茜
王无可
张军
机构
南京医科大学生殖医学与子代健康全国重点
实验室
浙江省之江实验室
出处
《临床检验杂志》
CAS
2024年第5期370-376,383,共8页
基金
国家重点研发计划(2022YFC2702705)。
文摘
目的提升来源于IS200/IS605转座子家族的RNA引导的核酸内切酶OgeuIscB的基因编辑效率。方法利用OgeuIscB蛋白已解析的晶体结构,计算氨基酸与核酸之间的原子距离,将距离小于10的非正电荷氨基酸残基突变为精氨酸(arginine,R)以提高OgeuIscB与核酸的亲和力,通过人胚肾293T细胞内源性位点验证不同突变体的基因编辑效率。结果经过两轮迭代突变,发现Q376R-S456R和A401R-S456R这2个双突变体在不同细胞系的多个内源性位点上均能显著提升OgeuIscB的基因编辑效率。结论基于结构对OgeuIscB蛋白进行理性蛋白质工程化改造,能够提升OgeuIscB核酸内切酶活性,为将其作为一种有效的基因编辑工具提供了实验依据。
关键词
基因编辑
核酸内切酶
IS200/IS605转座子
蛋白质工程
Keywords
gene editing
endonuclease
IS200/IS605 transposon
protein engineering
分类号
R446 [医药卫生—诊断学]
R394 [医药卫生—医学遗传学]
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作者
出处
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1
IS200/IS605转座子家族编码的核酸酶OgeuIscB基因编辑体系的优化
顾秋茜
王无可
张军
《临床检验杂志》
CAS
2024
0
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