miR-21-5p对川崎病内皮细胞焦亡的作用及其机制研究

目的探究miR-21-5p对川崎病(KD)内皮细胞焦亡的作用及其机制。方法采用随机数字表法将16只C57BL/6小鼠分为KD组和PBS组,每组8只。利用干酪乳杆菌细胞壁提取物(LCWE)腹腔注射小鼠,构建KD模型。利用LCWE处理小鼠冠状动脉内皮细胞(MCAECs),构建KD体外细胞模型。在使用LCWE处理的基础上,根据转染miR-21-5p抑制剂(miR-21-5p inhibitor)或inhibitor阴性对照物(inhibitor-NC)、miR-21-5p模拟物(miR-21-5p mimics)或mimics阴性对照物(miR-NC)、用或不用含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)抑制剂MCC950,将MCAECs分组为:(1)LCWE组和对照组;(2)LCWE+inhibitor-NC组和LCWE+miR-21-5p inhibitor组;(3)LCWE组、LCWE+MCC950组、LCWE+MCC950+miR-NC组和LCWE+MCC950+miR-21-5p mimics组。采用HE染色观察小鼠冠状动脉组织病理学变化;采用qRT-PCR法检测miR-21-5p表达变化;采用Western blot检测焦亡相关蛋白NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(caspase-1)、caspase-1前体(pro-caspase-1)、消皮素D蛋白(GSDMD)p30、IL-1β、IL-18的蛋白表达;采用细胞计数盒法检测细胞活力;采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH活性。结果与PBS组相比,KD组小鼠冠状动脉组织病变明显,冠状动脉组织中NLRP3介导的细胞焦亡、miR-21-5p表达水平均升高(均P<0.01)。与对照组相比,LCWE组MCAECs细胞活力明显降低并且miR-21-5p表达水平明显升高(均P<0.01)。与LCWE+inhibitor-NC组相比,LCWE+miR-21-5p inhibitor组细胞miR-21-5p表达水平、NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD p30、IL-1β、IL-18的蛋白表达以及LDH活性均明显降低(均P<0.01),而细胞活力明显升高(P<0.05)。与LCWE组相比,LCWE+MCC950组NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD p30、IL-1β、IL-18的蛋白表达以及LDH活性均明显降低(均P<0.01),且细胞活力明显升高(P<0.01),而进一步转染miR-21-5p mimics明显逆转了以上变化(均P<0.01)。结论在KD中,miR-21-5p通过激活NLRP3炎症小体调节血管内皮细胞焦亡,从而加剧血管内皮细胞损伤。提示抑制miR-21-5p可以部分改善KD期间的血管内皮细胞损伤,miR-21-5p可以作为治疗KD的潜在干预靶点。

木犀草素对癫痫持续状态幼鼠海马组织神经细胞保护作用的机制研究

目的探讨木犀草素对癫痫持续状态(SE)幼年大鼠(下称幼鼠)海马组织神经细胞保护作用的机制。方法将156只21日龄雄性SD幼鼠按随机数字表法分为对照组12只、模型组48只、木犀草素1组(低剂量20 mg/kg)48只和木犀草素2组(高剂量50 mg/kg)48只,其中模型组、木犀草素1组和木犀草素2组在癫痫发作后的1、2、3和7 d分别处死12只幼鼠。采用氯化锂-匹罗卡品法制作幼鼠SE模型,木犀草素1组和木犀草素2组在造模成功后,腹腔注射相应剂量的木犀草素,此后每天重复注射1次,直至处死。采用qRT-PCR法检测幼鼠海马组织中NF-κB、Toll样受体4(TLR4)、半胱氨酸门冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)、TNF-αmRNA表达水平,Western blot法检测幼鼠海马组织中TLR4蛋白表达水平,TUNEL法观察幼鼠海马CA1区神经细胞凋亡情况。结果与对照组比较,癫痫发作后1、2、3和7 d模型组幼鼠海马组织中TLR4、NF-κB、Caspase-3、TNF-αmRNA及TLR4蛋白表达水平均升高(均P<0.01);与模型组比较,癫痫发作后1、2、3和7 d木犀草素2组幼鼠海马组织中TLR4、NF-κB、Caspase-3、TNF-αmRNA及TLR4蛋白表达水平均降低(均P<0.05),癫痫发作后3和7 d木犀草素1组幼鼠海马组织中TLR4 mRNA表达水平均降低(均P<0.05),癫痫发作后1和3 d木犀草素1组幼鼠海马组织中Caspase-3 mRNA表达水平均降低(均P<0.05),癫痫发作后3 d木犀草素1组幼鼠海马组织中TNF-αmRNA表达水平降低(P<0.01),癫痫发作后7 d木犀草素1组幼鼠海马组织中TLR4蛋白表达水平降低(P<0.05)。与对照组比较,癫痫发作后1、2、3和7 d模型组大鼠海马组织中神经细胞凋亡率均升高(均P<0.01);与模型组比较,癫痫发作后1、2、3和7 d木犀草素2组幼鼠海马组织神经细胞凋亡率均降低(均P<0.01),癫痫发作后2、3和7 d木犀草素1组幼鼠海马组织神经细胞凋亡率均降低(均P<0.05)。结论木犀草素可减轻SE幼鼠海马组织的炎症反应和细胞凋亡,其机制可能是通过调控TLR4/NF-κB通路来达到神经保护作用。

儿童呼吸道感染的临床特征、预后及其影响因素分析

目的探讨儿童呼吸道感染的临床特征和主要致病菌,分析患儿预后情况及预后不良的相关因素。方法便利抽样法选择2018年1月—2019年12月在浙江省人民医院住院治疗的1 246例呼吸道感染患儿为研究对象,回顾性分析其呼吸道感染致病菌类型,统计儿童呼吸道感染的预后情况,采用多因素logistic回归分析统计儿童呼吸道感染预后不良的相关因素。结果 1 246例呼吸道感染患儿中有387例呼吸道病毒检出阳性,检出率为31.1%;检出病毒中以呼吸道合胞病毒(RSV)检出阳性例数最多,检出率为62.8%(243/387),其次为A型流感病毒(Flu A),检出率为22.5%(87/387);经治疗后95.2%(1 186/1 246)的患儿好转,4.8%(60/1 246)的患儿预后不良。单因素分析显示:父母有过敏史、吸二手烟、无户外活动、春冬季和年龄在1岁以下的呼吸道感染患儿预后不良(P<0.001);多因素logistic分析结果显示:无户外活动、春冬季和年龄在1岁以下是患儿预后不良的危险因素(均P<0.05)。结论儿童呼吸道感染主要致病菌为RSV,预后不良的患儿比例较高,且以冬春季为主,1岁以下患儿为易感人群,应在日常生活中增加户外活动、保障均衡饮食、提高患儿免疫功能。

儿童及青少年甲状腺乳头状癌滤泡亚型超声特征分析

目的对儿童及青少年甲状腺乳头状癌滤泡亚型(follicular variant papillary thyroid carcinoma,FVPTC)和经典亚型(conventional papillary thyroid carcinoma,CPTC)进行临床病理和超声特征分析。方法选取纳入浙江省肿瘤医院和浙江省人民医院2006年1月至2017年12月的26例FVPTC和82例CPTC,两组间进行临床病理特征和超声征象的比较。根据超声征象把FVPTC和CPTC分为FN-like和PTC-like。结果FVPTC组的平均长径稍大于CPTC组。甲状腺包膜侵犯(P=0.449)、多发结节(P=0.000)、颈部淋巴结转移(P=0.492)和远处肺转移(P=0.024),FVPTC组低于CPTC组,其中多发结节和远处肺转移差异具有统计学意义(P<0.05)。边缘不光整(P=0.000)和钙化(P=0.003),FVPTC组明显低于CPTC组,差异具有统计学意义。细针针吸细胞学(fine needle aspiration cytology,FNAC)结果的Ⅴ+Ⅵ占比,FVPTC组低于CPTC组,差异具有统计学意义(P=0.014)。FVPTC的甲状腺包膜侵犯、多个结节和淋巴结转移,FN-like组和PTC-like组的差异具有统计学意义(P=0.000)。结论与CPTC相比,儿童及青少年FVPTC的肿瘤偏大,且具有较多的良性超声征象,但FNAC对FVPTC的诊断率偏低。

儿童及青少年分化型甲状腺癌分子生物学的研究

儿童及青少年甲状腺癌少见,生物学行为表现为较强的侵袭性,但总体预后良好。乳头状癌是人群中最常见的甲状腺癌病理类型。随着甲状腺癌研究在基因水平上的不断深入,已发现多种基因与其发生、发展、预后相关,为甲状腺癌的诊断、预后判断和治疗都提供了全新的方向。RET/PTC基因重排、PAX8/PPARγ重排等基因重排在儿童甲状腺癌的发生中有着非常重要的作用,而RAS基因、BRAFV600E基因的突变作用相对成人,在儿童及青少年甲状腺癌的发生发展上作用较小。