大蒜X病毒逆转录环介导等温扩增检测方法的建立

采用逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),建立一种便捷、灵敏的大蒜X病毒(Garlic virus X,GarVX)的快速检测方法。根据GarVX ORF4序列的保守区设计6条特异性引物,分别识别该保守区的8个位点,在反转录酶和Bst DNA聚合酶的作用下对靶序列进行扩增反应。通过条件优化,在65℃恒温条件下温浴60 min可成功检测GarVX。特异性检测结果表明,该方法可特异性检出GarVX,对大蒜A病毒(Garlic virus A,GarVA)、大蒜D病毒(Garlic virus D,GarVD)、大蒜E病毒(Garlic virus E,GarVE)等的检测均为阴性,且检测灵敏度高,最低检出限为5 pg·μL-1,是RT-PCR方法的10倍。试验结果表明,RT-LAMP检测方法可快速、特异、灵敏地检测GarVX,并适合现场快速检测。