浙江省金华市柑橘黄龙病检测及柑橘木虱分布情况调查

为了解浙江省金华市柑橘主要种植区内柑橘黄龙病及媒介昆虫柑橘木虱的发生情况,本研究在金华市5个县市区16个乡镇街道进行柑橘黄龙病和柑橘木虱发生情况调查与采样,调查研究结果如下,采集的210份样品中检测出13份样品携带黄龙病菌,黄龙病菌检出率达6.2%,其中永康市唐先镇样品检出率最高,达20.0%,此外武义县白洋街道,婺城区洋埠镇、罗埠镇,永康市花街镇样品检出率均超过10.0%;通过对黄龙病菌16S rDNA进行特异性扩增,发现克隆后的测序结果与已报道的亚洲柑橘黄龙病菌(Candidatus Liberibacter asiaticus)相似性均在99.5%以上。金华市下辖的兰溪市、婺城区、金东区、武义县及永康市均有柑橘木虱的发生,其中永康市柑橘木虱发生率最高,达到83.3%,兰溪市柑橘木虱发生密度最高,成虫虫口密度为21.0头·株^(-1),有虫株率为41.9%。综合黄龙病检测结果与柑橘木虱发生情况表明,金华市下辖的兰溪市、婺城区、武义县和永康市属于黄龙病和柑橘木虱发生重叠区。

柑橘黄脉病毒一步法RT-PCR快速检测技术探究

本研究通过对柑橘黄脉病毒(citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)的三基因盒基因、病毒外壳蛋白基因及23 K基因序列分析并设计出7对引物,对引物特异性和灵敏度进行比较,筛选出能够应用于实验室一步法RT-PCR快速检测CYVCV的引物,由此建立起针对CYVCV一步法RT-PCR快速检测体系。结果表明:引物对TGB1-F/R能从柑橘总RNA稀释160000倍(0.004 ng·μL^(-1))的稀释液中检测出CYVCV,利用该体系对607份田间随机样品进行检测,CYVCV的感染率为10.05%,说明该体系可靠稳定,适用于实验室里的大量检测;一步法RT-PCR获得CYVCV的TGB1、TGB2、TGB3、CP和23 K的特异性片段,片段序列长度分别为678、327、183、978和669 bp,通过克隆和测序结果比对显示,各片段与已报道的CYVCV病毒序列具有较高的同源性,同源性均在99%以上。

胡颓子科叶绿体基因组系统发育分析与演化趋势推断

[目的]探索胡颓子科叶绿体基因组演化趋势,为胡颓子科植物物种鉴定以及资源开发利用提供理论依据。[方法]该研究从头组装并注释了沙棘属和野牛果属共4个类群的叶绿体基因组,结合已发表的叶绿体基因组序列,比较了胡颓子科各类群叶绿体基因组的基因构成、重复序列和结构特征,建立了系统发育树,并通过高分化区定位了该科叶绿体基因组的潜在DNA条形码区域。[结果]胡颓子科各属叶绿体基因组在四分体结构、基因数量和排列上高度相似;沙棘属和野牛果属的反向重复区(IR)和整个基因组重复序列数目较胡颓子属有扩张和增加的趋势。胡颓子科18个类群的叶绿体全基因组序列的系统发育树中,胡颓子属个体聚为一支,最先分化出来,沙棘属和野牛果属各自聚为一支,具有最近的共同祖先;从长单拷贝区(LSC)和短单拷贝区(SSC)筛选出3个DNA条形码候选区,其中ycf1基因的鉴定效果最佳。[结论]胡颓子科的叶绿体基因组结构保守,但其非编码区序列在各属间存在明显差异,且IR区序列与重复序列在演化过程中分别有扩张和增多的趋势。研究选定的DNA条形码序列能很好区分胡颓子科各属之间以及胡颓子属内物种间关系。

温州蜜柑裂果的形态结构特征研究

研究温州蜜柑裂果的形态结构特征,可为有效防治裂果提供基础数据。以温州蜜柑为研究对象,采用田间调查与试验分析相结合的方式,对正常果和裂果的形态结构、田间表现以及果形指数等进行了分析。结果表明,裂果果皮和果肉的细胞均出现了结构改变、排列松散、间隙增大等现象,细胞之间出现了不可逆转的变化,与果实细胞的衰老密切相关;裂果一般发生在树体的中部及以下部位;果形指数越小,果实越容易裂果。裂果的发生可能与多种因素有关,在防治时要进行综合考虑。

海洋放线菌A3202在不同培养基中的培养特征比较

为明确海洋放线菌A3202发酵培养所需的最佳条件,促进对其活性代谢产物抑菌活性研究的深入开展,测定了菌株A3202在不同固体和液体培养基中的形态特征。结果表明:菌株A3202在不同琼脂含量高氏1号培养基上的培养特征存在明显差异,琼脂含量2.0%以下的培养基不利于菌株A3202的气生菌丝生长及孢子形成;该菌株在相同配方但不同黄豆粉来源的黄豆粉培养基上的形态特征也表现出明显差异,现磨生黄豆粉制备的培养基更利于菌株菌丝生长和产孢。

乙基多杀菌素在杨梅果实和土壤中的残留消解特征及其安全性评价

为明确乙基多杀菌素在杨梅园中使用后的环境安全性,建立了杨梅和土壤中乙基多杀菌素的残留分析方法,并在浙江和福建2地进行了为期2年的乙基多杀菌素在杨梅果实和土壤中的残留消解规律研究。植物样品采用乙腈作为提取剂,N-丙基乙二胺和无水硫酸镁作为分散净化剂;土壤样品用水和乙腈作为提取剂,用N-丙基乙二胺进行净化,利用超高效液相色谱-串联质谱法检测,通过外标法定量。结果表明:乙基多杀菌素在0.001~0.5 mg/L范围内的质量浓度和峰面积之间具有良好的线性关系(R^(2)>0.999);在0.005~0.5 mg/kg添加水平下,乙基多杀菌素在杨梅果实中的平均回收率为89.40%~101.85%,相对标准偏差为3.63%~7.25%;其在土壤中的平均回收率为95.09%~102.66%,相对标准偏差为3.05%~3.61%;在杨梅果实和土壤中其定量限均为5.0×10^(-3)mg/kg,检测限均为5.2×10^(-5)mg/kg。消解动态试验结果表明:按1.5倍的最高推荐剂量(60 mg/L)于杨梅刚开始转色时喷施1次,乙基多杀菌素在杨梅果实和土壤中的消解动态均符合一级动力学方程,其半衰期分别为4.4~5.2和1.2~1.9 d,属于易降解性农药。田间最终残留试验结果显示,7 d后,乙基多杀菌素在杨梅果实中的残留量为0.073~0.353 mg/kg,在土壤中的残留量为低于定量限~0.094 mg/kg。综上所述,采用该方法能够实现杨梅和土壤中乙基多杀菌素的残留检测,简便、准确、灵敏度高;按照田间试验推荐的使用浓度和次数后,乙基多杀菌素的降解半衰期短,其最终残留量远低于国标规定的在杨梅中的最大临时限量标准(1 mg/kg),说明乙基多杀菌素在安全间隔期内用于杨梅树上害虫防治是安全的。

庆元甜橘柚黄龙病菌的Real-time PCR检测与分析

为了解庆元县甜橘柚柑橘黄龙病的发生分布情况,为该病害的有效防控提供依据,通过Real-time PCR方法检测了庆元不同地区甜橘柚样品中黄龙病菌的存在情况。结果显示:在所检测的69个样品中,有13个样品表现为柑橘黄龙病阳性,阳性率达18.8%;其中松源街道和屏都街道样品的黄龙病菌检出率最高,可达33.3%。此检测结果表明,柑橘黄龙病已在庆元甜橘柚果园中普遍存在,应加强对该病害的防控。