霞妃睡莲的组织培养及快繁技术研究

文章以霞妃睡莲(Nymphaea cv.Sunshine Princess)的根状茎为外植体,通过全面系统研究其初代培养、增殖、生根及移栽等不同阶段的培养条件,首次成功建立了睡莲的组培快繁技术体系。研究结果显示:固体培养基更适合霞妃睡莲的组织培养,且有利于提高睡莲的增殖率和人工操作效率;噻二唑苯基脲(TDZ)对睡莲不定芽的增殖诱导效果优于苄基腺嘌呤(BA),且两者一起使用具有协同效应,增殖率达到3.44且保持较好的生长状态;吲哚丁酸(IBA)对睡莲的生根诱导效果优于相同浓度的萘乙酸(NAA),活性炭的添加也有利于睡莲的生根诱导;适量的多菌灵能够提高睡莲组培苗的移栽成活率。该研究为睡莲种质资源的无菌保存及新品种的快速推广提供了有力的技术支持,对于加速睡莲种苗的规模化生产和推动国内外睡莲产业发展具有重要的现实意义。

中国小麦花叶病毒(CWMV)外壳蛋白(CP)特异性抗体的制备与应用

中国小麦花叶病毒(CWMV)是浙江省农业科学院发现并鉴定的一种土传病毒,其RNA2编码的外壳蛋白(CP)在病毒侵染过程中发挥重要功能。为了检测该蛋白表达并分析其生物学功能,该研究采用RT-PCR方法从感染CWMV小麦病叶中扩增获得CP基因,并通过In-Fusion技术构建了CWMV CP重组表达载体,将其导入BL21(DE3)菌株诱导表达;原核表达的重组CP蛋白经镍柱亲和层析纯化后注射免疫家兔,收集抗血清经亲和层析纯化获得CP多克隆抗体。Dot-ELISA、ID-ELISA、Western blot显示,该抗体不仅对CWMV具有高度的特异性,而且其效价高达1∶2.048×10^(7)、灵敏度达6.25×10^(-2)ng。应用该抗体采用Dot-ELISA、Western blot方法检测田间小麦样品显示其可用于CWMV的准确诊断,这为CWMV病毒病检测、CP定量分析及其功能研究奠定了基础。

水稻白叶枯病常态化预防控制技术应用

水稻白叶枯病是水稻生产过程中重要的病害,尽管对该病害的防治做了大量工作,但2015年以来,该病害又有上升趋势,特别是2019年后,衢江区水稻白叶枯病发生面积呈多点式、暴发式增长,尤其是单季晚稻与连作晚稻,对该区水稻生产构成严重威胁。借鉴“中医治未病”理论,探索采用“3+X”模式防控水稻白叶枯病。结果表明,与常规防治方法相比,在水稻种植关键环节,用20%噻唑锌提早进行预防处理,不仅能有效降低病害的发生程度,延缓田间病害扩展速度,对水稻植株生长功能也有一定的改善作用,作物安全性好。利用此模式防控效果达到85%以上,产量比常规防治区增加10%以上。

鸭新城疫病毒和流感病毒多重RT-PCR鉴别诊断技术的建立和应用

对同样以引起鸭产蛋下降为主要特征的鸭流感病毒(AIV)分离株和鸭新城疫病毒(NDV)YH99V分离株,通过设计特异性引物和优化体系反应条件,建立了一种早期快速鉴别诊断鸭AIV和鸭NDV的单项RT-PCR方法和多重RT-PCR方法,AIV的扩增片段大小为483bp,NDV的扩增片段为310bp,电泳快速,易于区分。敏感性试验表明,该方法比HA敏感100倍以上;对AIV、YH99V、IBV、IBDV及正常鸡胚尿囊液的混合液检测显示,多重RT-PCR法具有很强的特异性。对鸭病毒性产蛋下降征侯群送检病料的检测证明,该方法能有效鉴别AIV和/或NDV单独感染或混合感染,阳性检出率明显高于HA方法。

酵母双杂交系统在植物病毒学中的应用

酵母双杂交系统应用有效的酵母遗传学方法分析蛋白质间相互作用,已成为鉴定蛋白质相互作用强有力的方法之一。文章从植物病毒编码的蛋白质间、植物病毒蛋白与植物蛋白间、植物病毒蛋白与介体蛋白间等3个方面阐述了酵母双杂交系统在植物病毒学中的应用现状,并对其应用前景进行了展望。

几种血清学技术在浙贝母花叶病毒(Thunberg fritillary mosaic virus)检测中的应用

通过12%SDS-PAGE和5%～20%梯度SDS-PAGE二次制备电泳纯化浙贝母花叶病毒(Thunberg fritillary mosaic virus,TFMV)的外壳蛋白,4次免疫小鼠,获高纯度的抗血清。分别用Western blot、间接ELI SA、免疫扩散、火箭免疫电泳和对流免疫电泳5种免疫检测技术对TFMV样品进行了检测。结果表明,间接ELISA方法不能灵敏地检测新鲜病汁液中的病毒粒子,免疫扩散不能用于未变性病毒粒子的检测。Western blot灵敏度高,但操作复杂。火箭免疫电泳和对流免疫电泳均具有操作简单、灵敏度高、检测周期短的优点,但前者需抗血清的量大。5种免疫检测技术中,对流免疫电泳最适合浙贝母病样中TFMV的快速检测。

中国小麦花叶病毒(CWMV)生物学特性初探

<Abstrcat>

基因工程创制油菜种子基生物燃油的关键技术

生物基燃料的开发研究对保证我国能源安全、改善生态环境都有重要意义。通过系统的基因工程改良创制“能源油菜”,作为生物柴油主要原料,是我国可再生能源战略推进的明智选择。分析了油菜作为生物柴油原料的优势及尚需解决的问题,根据相关领域研究趋势和我国现有基础,提出了油菜种子基生物能源发展的战略构想和重点研究方向:1.进一步提高产量、含油量以提高单位面积产油量。2.利用油菜种子作为口服疫苗等高值蛋白产物生物反应器,提高油菜种子蛋白质部分价值,降低综合生产成本。3.基因工程提高油菜抗逆性和生态适应性,利用海涂、荒坡等非农业用地,解决大规模发展油菜种子质基生物柴油原料种植所需土地问题。4.通过特种脂肪酸组分定向基因调控技术,培育高品位生物柴油专用油菜品种。

草莓根尖脱毒组培及无病毒苗繁育技术研究

针对传统的草莓茎尖脱毒组培技术所存在的操作繁琐、效率低、消毒难彻底、组培苗污染率高等问题,课题组根据多年试验研究成果,提出了一种操作简便、效率高、消毒易彻底、组培苗污染率低、繁殖速度快,苗质好的草莓根尖脱病毒组培及其病毒快速检测技术,摸索出一套草莓根尖脱病毒组培快繁及规模化生产技术。

践行“绿水青山就是金山银山”理念建设美丽田园中农业技术集成作用分析

时任浙江省委书记习近平于2005年8月15日在安吉余村考察时提出“绿水青山就是金山银山”的重大论断,浙江正忠诚践行“八八战略”,深入实施乡村振兴战略,积极推进美丽田园和大花园建设,努力建设诗画浙江。作者所在团队是安吉余村美丽田园建设的农业技术指导团队,作为农业技术支撑团队,将浙江省农业科学院长期积累的单项科技成果进行配套、集成和转化,指导余村的工业用地复耕、田园作物布局、农作物生态种植、绿色优质农产品生产等工作,推动余村美丽田园转化为美丽经济。在2020年8月15日全国“绿水青山就是金山银山”理念十五周年会议期间,余村美丽田园惊艳亮相,成为美好农业的新样板。

草莓无病毒原原种苗生产技术研究

草莓通常用匍匐茎繁殖育苗,生长期间易受病毒病危害,且病毒病种类多、防治效果差。根据草莓脱毒组培快繁的理论依据,我们经过多年研究,在分析试验结果基础上,总结了草莓无病毒苗组培快繁及无病毒原原种苗栽植和培育的关键技术,以期为草莓脱毒生产提供技术支持。

浙江省马铃薯地方品种珍珠香薯

浙江省马铃薯地方品种珍珠香薯已有近百年的种植历史,其薯块为黄皮黄肉,口感细腻,品质优,烘干率为21.9%;单株结薯数可达20～30个,薯块小;生育期95 d,一般鲜薯产量22.5 t·hm-2左右。

五个抗稻瘟病基因在浙江省水稻品种中的分布和抗性评价

为了明确浙江省部分水稻主栽品种和中国稻瘟菌生理小种鉴别品种中稻瘟病抗性基因分布情况,本研究采用5个基于稻瘟病抗感等位基因序列设计的功能性分子标记,对40份浙江省水稻主栽品种和6份稻瘟菌鉴别品种中Pit、Pib、Pii/Pi3/Pi5、Pia、Pi1等5个稻瘟病抗性基因进行了分子检测。结果发现,这5个抗性基因在浙江省栽培品种中分布频率不同,其中Pib基因分布最广,占63.04%;其次是Pia,占58.70%;携带Pii/Pi3/Pi5和Pit抗性基因的材料较少,分别为21.74%和10.87%。同时用2015—2017年田间采集到的141个稻瘟菌菌株检测46个水稻品种苗瘟抗性水平,结果显示,其中仅15个品种的抗性频率在70%以上,大部分品种携带其中1~2个抗性基因。聚合了多个抗性基因的品种抗性水平相对较高。

兔出血症病毒浙江分离株核衣壳蛋白基因的克隆及遗传变异分析

【目的】探讨兔出血症病毒的遗传变异情况，为兔病毒性出血症的防治提供理论资料。【方法】对1989～2006年7株兔病毒性出血症病毒（RHDV）浙江分离株的核衣壳蛋白基因（VP60）进行了克隆与测序，同时利用分子生物学软件将其与国内外RHDV的基因组序列进行了比对和分析，并绘制了系统发生树。【结果】此7株RHDV的VP60基因均由1740个核苷酸组成，编码580个氨基酸，其与参考序列之间的氨基酸同源性为94．0％～99．8％；系统发生树分析显示，所选的RHDV分离株可分为2个基因群，每个基因群又可分为两个亚群，其中中国分离株主要位于C亚群，与欧洲分离株的遗传距离较近，基因群之间的遗传距离有逐渐加大的趋势。【结论】RHDV在长期流行与演化过程中存在一定的遗传变异趋势。

适于浙江省种植的镉低累积油菜品种筛选试验

在污染农田上种植重金属低累积作物品种,是确保农作物安全生产的首选技术。本研究选择镉(Cd)轻度污染农田,采用田间试验比较了26个油菜品种茎杆和籽粒对Cd富集差异。结果表明,26个供试品种中,单株油菜籽产量为13.1~28.7 g,含油量为38.77%~50.06%,单株产油量为5.1~14.4 g。茎杆富集系数为0.83~2.22,籽粒富集系数为0.14~1.39,茎杆—籽粒迁移系数为0.09~0.59。浙大系列油菜籽粒Cd含量低、茎杆Cd含量高、产量高,其中,浙大630品种最优,适合浙江省地区推广种植。

中国小麦花叶病毒富含半胱氨酸蛋白多克隆抗体的制备与应用

中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)是小麦花叶病的重要病原体之一,长期威胁小麦的产量和品质;CWMV富含半胱氨酸蛋白(cysteine-rich protein,CRP)在病毒侵染过程中具有重要而复杂的功能。为了深入研究CRP的功能和CWMV侵染机制,本研究采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)从CWMV侵染的小麦叶片中获得CRP基因编码区,将其克隆至原核表达载体pET-32a上,并将重组质粒pET-CRP转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达;通过镍柱亲和层析法纯化CRP重组蛋白,并用作抗原免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体。蛋白质印迹法、间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和斑点ELISA分析结果显示:纯化的CRP抗体不仅具有高度的特异性,而且效价高达1∶4096000,是未纯化抗体效价的4倍;该抗体能识别0.5 ng抗原,显示出较高的灵敏度;在1∶120000稀释条件下,该抗体能特异且灵敏地识别天然CRP。综上所述,本研究所制备的CRP抗体不但可用于田间CWMV病株样品的精准诊断,还可用于植物体内瞬时表达CRP的检测分析,为后续CRP检测、定量分析及其亚细胞定位等研究提供了依据。

致麻鸭产蛋下降的副粘病毒的分离和鉴定

从浙江省某麻鸭养殖基地产蛋锐减的病鸭生殖器官分离到1株致产蛋下降、不致鸭死亡的病毒株(YH99V)。该病毒易感蛋鸭,经SPF鸡胚传至第9代时致病性突然增强,第11代出现对鸡红细胞的血凝特性,通常在42～80h致死SPF鸡胚,EF15EID50为10-4.8。经磷钨酸负染电镜观察,YH99V粒子呈现圆形、杆状形、葫芦状形等多形态,直径70～400nm不等,病毒外表有囊膜,囊膜外层有排列整齐的纤突。病毒粒子和包涵体位于细胞浆内。病毒抵抗力由弱到强依次为0.2%甲醛、24h→56℃、45min→紫外线、1h→乙醚≈氯仿≈37℃、16h→pH9→pH5→1%Try。对人眼结膜易感,鸭眼结膜不易感。接种传代细胞BHK-21、IBRS-2均能引起细胞病变。YH99V株与同样引起鸭产蛋下降的AIV、鸭源EDSV无抗原相关性,而能被禽副粘病毒型阳性血清中和。根据试验结果,初步将YH99V判定为鸭副粘病毒。

甜糯玉米籽粒不同发育时期基因表达谱和生理生化特性分析

利用快中子诱变糯玉米自交系通系5,获得在同一籽粒上表现甜质与糯质特性的玉米突变材料,命名为甜糯玉米。以甜糯玉米和通系5为研究对象,利用生理生化测定和转录组学技术,揭示甜糯玉米在籽粒发育不同时期的代谢及基因表达差异。结果表明,在胚乳发育的各个时间点上甜糯玉米中的淀粉含量均极显著低于通系5玉米,可溶性总糖、蔗糖含量均极显著高于通系5玉米。甜糯玉米胚乳的糊化特征参数均极显著低于通系5,在授粉后20 d开始呈剧烈增加趋势。差异转录组学分析发现,与通系5相比,甜糯玉米中有154个基因在胚乳中的表达显著下调。籽粒发育不同时期的转录组差异表达分析发现,4 914个基因仅在通系5的籽粒发育过程中存在差异表达,富集到生物体发育、RNA修饰等生物过程;1 829个基因仅在甜糯玉米中差异表达,富集到响应化学物质、响应非生物刺激等生物过程。共同差异表达基因在2种玉米中存在动态表达趋势差异。本研究结果为优良甜糯玉米品种的培育与改良提供了种质材料和遗传信息。

侵染广西罗汉果的小西葫芦黄花叶病毒的鉴定及抗血清制备

在广西临桂罗汉果花叶畸形病株上获得了一个线状病毒分离物LGL-1,寄主范围、蚜传能力测定、病毒粒子形态和细胞病理特征研究表明,它是马铃薯Y病毒科成员。采用马铃薯Y病毒科特异性简并引物做PCR扩增,并测定了分离物LGL-1的基因组3′-末端序列,序列分析表明它是小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)。系统进化树分析揭示,世界范围内的ZYMV分离物主要可分为3大群体,分离物LGL-1为中国特有群体Group III成员。原核表达制备了分离物LGL-1的外壳蛋白抗血清,明确了ZYMV是引起广西罗汉果病害的主要病毒,并且比较了原核表达法和提纯病毒法制备的抗血清,在病样的间接ELISA法检测中结果的差异。

大蒜E病毒外壳蛋白基因的原核表达及抗血清制备

设计特异性引物PCR扩增了余杭大蒜病样中的大蒜E病毒 (GarV E)的全长CP基因 ,构建原核表达载体并在大肠杆菌中过量表达 ,纯化表达产物后免疫家兔制备抗血清。Westernblot检测结果表明 ,抗血清与GarV E的CP起强的特异性反应。 7个大蒜样品中 ,内蒙古赤峰市、宁夏银川和甘肃天水等 4个样品受到GarV E的侵染。试验也证明了田间GarV E编码的CP分子量为 35kD ,不同于已报道的其他葱X病毒属成员的 2