循证医学中的生物信息学应用及教学初步探讨

循证医学和生物信息学是两个新兴的独立学科。随着大数据技术和精准医学的发展,循证医学与生物信息学的交叉融合将会产生"新医科"或者"新理工科"。同时,生物信息学在循证医学中的应用使得其研究范式也有了很大转变。本文对生物信息学在循证医学研究中应用现状进行了总结,并做出了展望。根据调研结果,我们对循证医学中的生物信息学教学进行了初步探讨。

自身抗体分子在肺癌早期诊断中的应用

肺癌居癌症病死率首位，早期无明显临床症状，80％的肺癌患者就诊时已属中晚期，其中约75％的患者发现有转移灶的存在，治疗预后较差。总的5年生存率不超过15％。美国国立癌症研究所统计资料显示，

橘络活性成分小分子果胶治疗非小细胞肺癌作用及机制研究

本文观察橘络活性成分小分子果胶在离体细胞水平及整体动物模型中对非小细胞肺癌的治疗作用并初步探索其作用机制。小分子果胶处理人非小细胞肺癌PC-9细胞72 h后,MTS法检测细胞活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率;以PC-9细胞裸小鼠皮下移植瘤模型观察小分子果胶体内对肿瘤生长的抑制作用,免疫组化法检测肿瘤组织Ki67表达水平,TUNEL法检测组织中肿瘤细胞凋亡程度。结果表明小分子果胶(1.5~3 mg/m L)可显著抑制PC-9细胞增殖,与对照组相比细胞凋亡率显著升高,且具有浓度依赖性;小分子果胶(56.25 mg/kg)可显著抑制非小细胞肺癌小鼠体内肿瘤生长,肿瘤组织中细胞凋亡率显著升高。研究证明小分子果胶可显著抑制非小细胞肺癌小鼠体内肿瘤生长,该作用可能与小分子果胶抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡有关。

宫颈癌HeLa细胞内SKP2结合蛋白的筛选和功能预测

目的:通过免疫共沉淀与质谱分析技术从宫颈癌HeLa细胞中获取与S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,SKP2)结合的蛋白质群体并预测其生物功能。方法:以免疫共沉淀与Western blotting技术建立SKP2免疫共沉淀体系,以SDS-PAGE和银染技术获得SKP2结合蛋白的特异条带,通过质谱分析技术获得可能与SKP2结合的蛋白群体,应用生物信息学技术对筛选得到的蛋白进行GO分析与KEGG分析。结果:HeLa细胞内存在一定水平的SKP2蛋白表达,可进行免疫共沉淀反应;成功建立了SKP2免疫共沉淀体系,并获得SKP2结合蛋白样品;针对差异的凝胶条带进行质谱分析,共鉴定出SKP2结合蛋白563个;设定筛选条件后,获得可信度较高的SKP2蛋白270个,进行GO分析与KEGG分析后初步预测了结合蛋白参与的细胞功能和信号通路。结论:从宫颈癌HeLa细胞中成功筛选获取SKP2结合蛋白,为后续筛选靶标结合蛋白和寻找细胞靶向药物奠定了基础。

罗仙子提取物对S180荷瘤小鼠体内抗肿瘤作用研究

目的:观察中药罗仙子提取物在S180荷瘤小鼠体内的抗肿瘤作用。方法:构建S180荷瘤小鼠模型,按体重随机分为荷瘤模型组以及腹腔注射2.5、1.0、0.4 g/kg罗仙子提取物组,观察罗仙子提取物对荷瘤小鼠皮下肿瘤生长的抑制作用、对荷瘤小鼠免疫系统的调节作用,以及体内与抗肿瘤药物联合给药的增效减毒作用。结果:不同浓度罗仙子提取物可显著抑制S180荷瘤小鼠皮下肿瘤生长,显著增加S180荷瘤小鼠脾脏湿重及脾脏指数,显著增加S180荷瘤小鼠血清抗体积数,对二硝基氯苯诱导的S180荷瘤小鼠耳肿胀无显著影响,与环磷酰胺(CTX)联合给药,并不能显著增强CTX的体内抗肿瘤作用,但可显著升高注射CTX导致的胸腺、脾脏指数以及白细胞数下降,并恢复至正常水平。结论:罗仙子提取物可显著抑制S180肉瘤小鼠体内的肿瘤生长、增强机体体液免疫功能、逆转环磷酰胺引起的荷瘤小鼠免疫抑制和骨髓抑制毒性。

罗仙子提取物对肝癌的体内外抑制作用研究

本文观察中药罗仙子提取物在离体细胞水平以及整体动物模型中对肝癌的治疗作用。在罗仙子提取物干预人肝癌SMMC-7721细胞24 h后,采用MTT法检测细胞活率;采用光学显微镜、荧光显微镜、透射电镜观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率;以Heps肝癌小鼠模型观察罗仙子提取物体内对肿瘤生长的抑制作用。研究发现不同浓度罗仙子提取物可抑制SMMC-7721细胞增殖同时诱导典型的细胞凋亡形态学变化,与对照组相比细胞凋亡率显著升高,且具有浓度依赖性;不同浓度罗仙子提取物可显著抑制Heps肝癌小鼠体内肿瘤生长。实验证明罗仙子提取物可显著抑制Heps肝癌小鼠体内肿瘤生长,该作用可能与罗仙子提取物抑制肝癌细胞增殖、诱导细胞凋亡有关。

罗仙子提取物诱导白血病细胞凋亡作用研究

目的:观察中药罗仙子提取物体外对白血病细胞的凋亡诱导作用。方法:罗仙子提取物处理人白血病HL-60细胞24 h后,MTT法检测细胞活率;采用光学显微镜、荧光显微镜、透射电镜观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:不同浓度罗仙子提取物可抑制HL-60细胞增殖同时诱导典型的细胞凋亡形态学变化,与对照组相比细胞凋亡率显著升高。结论:罗仙子提取可显著抑制白血病细胞增殖、诱导细胞凋亡。

圆锥铁线莲对慢性非细菌性前列腺炎的治疗作用及机制研究

本文研究圆锥铁线莲水提取物对实验性慢性非细菌性前列腺炎的治疗作用,并对其抗炎的作用机制进行初步探讨。采用苯甲酸雌二醇致去势大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型,研究圆锥铁线莲对慢性非细菌性前列腺炎的治疗作用。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,Western Blot和免疫组化法检测前列腺组织环氧酶2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的变化,探讨圆锥铁线莲发挥抗炎作用的可能机制。研究发现苯甲酸雌二醇致去势大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型中,圆锥铁线莲2 g/kg组可见前列腺液中白细胞数明显降低,卵磷脂小体数量明显增加;病理切片可见炎症细胞浸润和成纤维细胞增生的情况有所改善。圆锥铁线莲能明显降低苯甲酸雌二醇致去势大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型血清中IL-1β及TNF-α的含量,减少前列腺组织中COX-2和i NOS的表达。表明圆锥铁线莲水提取物对慢性非细菌性前列腺炎具有良好的抑制作用,其作用机制可能是通过调节炎症细胞因子水平、抑制COX-2以及i NOS的表达,从而避免局部产生过量的前列腺素(PG)和一氧化氮(NO),减轻局部炎性损伤实现的。

乳腺癌耐药机制研究进展和应对策略

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其分型的多样性与临床治疗密切相关。近年来随着分子生物学的快速发展,乳腺癌的治疗进展迅速,效果显著,但治疗方案产生的耐药仍是临床一线治疗最常遇到的问题。本文就不同类型的乳腺癌及其临床特征进行了分类分析,针对不同分型的治疗方案和耐药机制进行了总结和探讨,旨在通过研究治疗的分子机制和可能存在的耐药机制,对临床治疗起到引导作用。

Rspo1在雌性脊椎动物性别分化中的功能

长期以来雌性脊椎动物的性别分化被认为是一个"默认"的程序.但是近些年研究发现,Rspo1基因的突变或缺失可导致哺乳动物XX型个体性反转为雄性.Rspo1在鱼类、两栖爬行类、鸟类和哺乳类动物性腺发育的不同阶段表达,其表达在雌雄个体性别分化时期有差异,是潜在的性别调控基因.Rspo1在性别发育早期可通过Wnt/β-catenin信号通路调控性腺分化相关因子的表达,影响原始生殖细胞分裂增殖、细胞周期和生长发育,参与调控性腺中体细胞的分化.本文总结了近年来Rspo1在脊椎动物中的表达调控及其在雌性性别决定方面功能的研究进展.

人造血淋巴系统小鼠在急性白血病模型构建中的应用进展

为了研究人类造血功能异常,学者们不断改进和发展白血病干细胞的异种移植模型。构建理想的异种移植模型,真实地模拟疾病,在研究人类白血病的分子机制及完善其治疗方案中尤为重要。人造血淋巴系统小鼠(humanized hematolymphoid system mice,HHLS)是异种移植了人源血细胞或组织的免疫缺陷鼠或者表达人类基因的人鼠嵌合体(mouse-human chimaeras)或称人源化小鼠(humanized mice)。理想的人源化小鼠即是人类移植物在空间和功能上完全替代小鼠的内源性造血和免疫系统。要实现这一目标,需要满足三个基本要求:首先,受体小鼠需要具有先天或者后天的免疫缺陷,以防止小鼠内源性免疫系统对人体移植物的异种移植排斥;第二,小鼠体内需要产生适合人类细胞生存的微环境;第三,人类细胞需要从小鼠体内获得支持性交叉反应信号。本文对HHLS模型的最新研究进展作一综述。

定量PCR分析人肺癌细胞NCI-H1299基因表达的内参基因选择

目的评价实时荧光定量PCR分析人肺癌细胞NCI-H1299中Merm1/Wbscr22基因表达时6个候选内参基因表达的稳定性,筛选最适的内参基因。方法选择ACTB、B2M、GAPD、HPRT1、RPL32及TBP作为候选内参基因,利用geNorm,NormFinder及RefFinder程序分析实时荧光定量PCR数据,评价6个候选内参基因在NCI-H1299细胞株中的表达稳定性,筛选最适内参基因,同时观察选用不同内参基因对目的基因相对表达量分析的影响。结果 6个候选内参基因在NCI-H1299细胞株中的表达稳定性由强至弱排序为:RPL32>HPRT1>GAPD>ACTB>TBP>B2M,选择不同内参基因影响目的基因Merm1/Wb-scr22的相对表达量。结论 RPL32+HPRT1是实时荧光定量PCR分析人肺癌细胞NCI-H1299中Merm1/Wbscr22基因表达的最适内参基因组合。

利用优化的显微技术观察和定位Merm1/Wbscr22在人肺癌细胞NCI-H1299中的表达

目的优化细胞免疫荧光染色技术结合激光扫描共聚焦显微镜技术的实验步骤,观察并定位Merm1/Wbscr22在人肺癌细胞NCI-H1299中的表达,以期对后续深入研究Merm1/Wbscr22的分子功能提供技术支持。方法采用Western blot及细胞免疫荧光染色结合激光扫描共聚焦显微镜技术观察Merm1/Wbscr22在NCI-H1299细胞的表达与定位,改进并优化免疫荧光染色实验步骤。结果 Merm1/Wbscr22蛋白在NCI-H1299细胞内过量表达,并定位于细胞核内。细胞免疫染色步骤显著地影响Texas Red-鬼笔环肽的非特异性染色及F-actin、Merm1/Wbscr22、细胞核DNA染色荧光的强度。结论 结合细胞免疫荧光染色技术与激光扫描共聚焦显微镜技术可以清楚地观察Merm1/Wbscr22在人肺癌细胞NCI-H1299的表达与定位,该技术的最优实验步骤是细胞固定、透膜、封闭、Texas Red-鬼笔环肽标记F-actin、一抗结合、二抗结合、DAPI标记细胞核DNA,最后共聚焦显微镜成像,这样既能减少Texas Red-鬼笔环肽的非特异性染色,各组分荧光强度又足够清晰利于观察。

结直肠癌肝转移微创射频消融术远期疗效影像评估

目的:探讨射频消融对结直肠癌肝转移患者的远期疗效影像评估。方法:本研究回顾性分析2010年6月至2015年10月在浙江大学医学院附属邵逸夫医院接受RFA治疗的CRLM患者临床及影像资料。对所有患者射频后生存期(射频OS)及无进展生存期(PFS)运用SPSS22.0统计分析软件,通过KaplainMeier方法描绘患者生存曲线,进行单因素分析筛选;并对单因素筛选后有统计学意义的指标采用Cox比例风险模型进行多因素分析。结果:影响射频OS结局的因素是肝脏肿瘤最大直径、肝脏病灶数目、RFA术后1个月肿瘤灭活情况。影响PFS结局的因素为肝脏肿瘤最大直径、RFA术后1个月肿瘤灭活情况。结论:结直肠癌肝转移患者通过射频消融治疗后可获得较好的远期生存,特别是针对直径≤3cm、单发的病灶来说是一种安全有效的治疗手段。

靶向抑制CDK4/6的肿瘤治疗基础研究与临床应用进展

周期蛋白依赖性激酶4/6(cyclin-dependent kinase 4/6,CDK4/6)是一类丝氨酸/苏氨酸激酶,通过与细胞周期蛋白D(cyclin D)结合,调节视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)的磷酸化状态,Rb磷酸化后与E2F转录因子分离,释放的E2F可以自由激活一系列基因表达,参与DNA复制和细胞分裂,从而介导细胞G 1/S期转换,影响细胞周期的进程。近年研究发现CDK4/6在多种肿瘤发生和发展过程中起着核心作用,已成为临床多种肿瘤治疗的重要分子靶点。本文将对CDK4/6与肿瘤的关系以及CDK4/6抑制剂临床应用的最新研究进展做一综述。

肿瘤睾丸抗原BORIS研究进展

在世界卫生组织疾病统计中,肿瘤的发生率和病死率均很高,肿瘤的诊断和治疗已成为当今医学研究的热点和难点。肿瘤细胞中特异和异常表达的因子是肿瘤诊疗的潜在靶标。肿瘤睾丸抗原(cancer-testis antigen,CTA)印记位点调节物兄弟因子(the brother of the regulator of imprinted sites,BORIS)在多种肿瘤组织中特异性高表达,与肿瘤发生、发展以及恶性程度密切相关。BORIS通过调节启动子区域的甲基化水平影响原癌基因c MYC、乳腺癌基因BRCA1等下游靶基因的表达,改变肿瘤细胞生物学活性和分化干性,促进肿瘤细胞的增殖、转移、侵袭。本文综述了BORIS在癌症发生、发展中的作用,阐述了BORIS在癌症诊疗中的研究价值和应用前景。

睾丸中BORIS的表达和功能研究进展

印记位点调节物兄弟因子BORIS,在脊椎动物的进化过程中从羊膜动物开始出现。人正常生理状态下,该蛋白仅在男性睾丸中高表达。雄性小鼠中BORIS的表达时序与精子发生时序高度一致,BORIS基因敲除小鼠雄性不育,而雌性生长发育正常。BORIS诱导生殖细胞中特定基因的表达,在精子发生中起重要作用。BORIS在正常生理条件下特异性地调控精子发生。本文在综述近年来BORIS转基因小鼠、BORIS基因敲除小鼠、睾丸中BORIS的表达和机制研究的基础上,总结了BORIS的表达定位、BORIS对精子发生的作用机制、BORIS功能研究和靶向药物研究,为针对BORIS的分子靶向治疗提供新的参考依据。

前列腺癌细胞内TMPRSS2-ERG融合基因产物转录调控机制研究进展

前列腺癌在欧美国家男性中是最常见的恶性肿瘤,但前列腺癌的发生发展机制还未完全明确。在前列腺癌中,TMPRSS2-ERG融合基因具有较高的发生率,其促进ERG过表达,引起相应的靶基因和信号通路改变,如雄激素受体、斑点型锌指结构蛋白、Notch通路等。深入了解前列腺癌细胞中TMPRSS2-ERG融合基因产物转录调控机制,可以为前列腺癌的治疗提供新的药物作用靶点。

抗肿瘤活性肽及其应用研究进展

目前对肿瘤治疗的主要方法有手术、化疗和放疗;但这3种方法均存在局限性,特别对恶性肿瘤无法获得理想效果。抗肿瘤活性肽可特异性结合并作用于肿瘤组织,与肿瘤生长转移相关的信号转导分子相互作用,从而抑制肿瘤生长或促进肿瘤细胞发生凋亡。多肽具有良好的靶向性,还有分子量小、免疫原性低、代谢产物易清除及来源广泛等优点。本文将就抗肿瘤多肽的作用机制、合成方法以及修饰等进行概述。

MicroRNA在肺癌中的表达及其临床意义

肺癌是一种发病率高、死亡率高和对化疗不敏感的常见恶性肿瘤,基于基因水平对肺癌的个性化治疗已有了很大的进步,但仍无明显改变高死亡率,亟需为肺癌的早期诊断,靶向治疗和预后判断寻找特异性的靶分子。microRNA是一种单链非编码小分子RNA,通过转录后水平调控基因的表达,涉及到肿瘤细胞的分化、增殖、死亡等多种生物进程。本文对microRNA在肺癌早期诊断,治疗和预后方面的研究现状作综述。