生物技术药物临床前安全性评价中的免疫毒性问题

生物技术药物是指用重组DNA技术、杂交瘤技术、原代细胞与细胞株培养或其它生物新技术研制的，供诊断、治疗或免疫为目的合成类蛋白质、抗体和核酸类医药产品。自1982年人胰岛素上市以来，全球该类药物已上市的有100多个，正在研究的达上千种。

碘化油Beagle犬肝动脉注射的安全性研究

目的 :研究碘化油Beagle犬肝动脉注射的安全性。方法 :Beagle犬肝动脉内单次注射碘化油0 .38、0 .75和 1.5 0ml·kg-1剂量 ,观察给药后 1mon内动物一般症状、血液学、血液生化学、心电图、眼科、尿常规的改变及重要组织器官病理学变化。结果 :碘化油对肝、脾、肺、肾等多个脏器有毒性反应 ,中毒剂量小于 0 .38ml·kg-1,1.5ml·kg-1剂量可导致动物在 2 4h内死亡。结论 :碘化油肝动脉内栓塞可导致多个重要脏器 (肝、脾、肺、肾 )的毒性反应。

鱼腥草注射液Ⅰ型过敏反应试验

目的观察鱼腥草注射液经静脉注射给药后是否出现全身主动过敏反应和被动皮肤过敏反应。方法豚鼠分别腹腔注射鱼腥草注射液5 ml/kg,0.9%NaCl注射液5 ml/kg及牛血清白蛋白生理盐水注射液5 ml(60 mg)/kg,隔日1次,连续3次进行致敏。末次致敏后12 d各组静脉单次注射2倍剂量的以上相应受试物进行激发,观察30 min内是否出现过敏反应;SD大鼠皮内注射相应抗血清0.1 ml被动致敏48 h后,分别静脉注射鱼腥草注射液10 ml/kg,0.9%NaCl注射液10 ml/kg和牛血清白蛋白生理盐水溶液10 ml(100 mg)/kg,及1%伊文思蓝溶液1 ml进行激发,30 min后处死动物,观察注射点皮肤蓝斑直径。结果鱼腥草注射液致敏期间豚鼠未出现任何异常反应,给予激发剂量后亦未出现明显异常反应,未引起豚鼠死亡;鱼腥草注射液组和0.9%NaCl注射液组大鼠背部皮肤内层均未出现蓝斑。结论在该试验剂量条件下,鱼腥草注射液豚鼠全身过敏反应、大鼠被动皮肤过敏均为阴性。

腺病毒载体疫苗在恒河猴体内的长期毒性试验

目的探讨以5型腺病毒为载体的人用疫苗Ad5-LMP2在恒河猴体内的药效学作用和安全性。方法恒河猴经im给予4.5×1011、1.5×1011和0.5×1011v.p·(kg·次)-1的Ad5-LMP2和等体积的磷酸盐缓冲液(对照组),每5d给药1次,共给药6次。在停药次日和停药15d时进行尿常规、血液、眼科、心电图、脏器重量和系数、大体观和病理组织学检查;给药前后定期采取猴血清并从剖检猴的脾脏分离淋巴细胞,用ELISA、病毒中和试验和ELISPOT检测腺病毒载体和目的基因蛋白产物LMP2诱导的体液和细胞免疫应答;通过PCR扩增各器官总DNA中的lmp2基因来检测Ad5-LMP2在体内的生物分布。结果在整个试验期间试验猴均未出现任何异常反应,也无动物死亡;给药组动物在整个给药期间的摄食、饮水和体重增长及上述各项常规毒理学检测中均未出现明显异常。受试物在试验猴体内诱发了较高水平的抗腺病毒中和抗体,但目的蛋白LMP2诱导的特异性细胞免疫应答未受抗腺病毒中和抗体的明显抑制;在猴的心、肝、脾、肺、肾、脑、睾丸(或卵巢)及给药部位均可检测到Ad5-LMP2并维持到停药后15d。结论在保证受试物药理学作用的前提下,恒河猴连续1mon肌肉注射相当人临床拟用剂量37.5倍的Ad5-LMP2,未见明显不良反应,中毒靶器官和中毒剂量未明显显示,其安全剂量大于4.5×1011v.p·(kg·次)-1。

药源性循环免疫复合物检测方法的建立

目的通过重组人白介素1受体拮抗剂(rhIL-1Ra)的大鼠6mon重复给药毒性试验,建立临床前安全性评价中动物体内药源性循环免疫复合物(CIC)的检测方法,为临床CIC检测提供依据。方法从rhIL-1Ra免疫后的兔血清中纯化总IgG包被于酶标板上作为捕获抗体,SD大鼠抗rhIL-1Ra阳性血清与rhIL-1Ra以不同比例混和制成人工免疫复合物(AIC),通过双抗夹心ELISA检测AIC的效率来评价该方法有效性。定期采集连续26wk皮下注射rhIL-1Ra的大鼠血清并以上述方法检测CIC,同时用免疫组化法显示肾小球中的免疫复合物(IC)来验证该方法。结果双抗夹心ELISA法可显示AIC的数量差异,大鼠血清CIC显示出与给药时间一致的变化,并与肾小球中IC检测结果相印证。结论双抗夹心ELISA法可检测出动物因长期给予外源蛋白而产生的CIC,AIC则可作为该检测体系中的阳性对照。

对GLP的认识

[目的 ]介绍GLP的概念和意义。 [方法 ]总结本单位实践经验。 [结果 ]GLP国际统称英文名为“GoodLaboratoryPractice ,简称GLP” ,从词意可译成“实行标准 (或好的 )实验室”。GLP的性质是一个规范的管理性文件 ;它的作用是使实验室工作规范标准 ,使每一个记录、每一个数据有根有据有理 ,有据可查 ,保证其研究质量 ;它的目的是提高新药安全评价的水平和保证人们用药安全有效 ;它的适用范围不仅是药物的临床前研究 ,也包括其他化合物 (包括人类直接或间接用的一切物品 ,如食品、保健品、农药、医疗产品、日用品等 )的疗效、机制、毒性等研究 ;它的研究内容以常规临床前研究为主。要实施GLP ,做好GLP实验室的工作 ,首先必须对GLP要有一个全面、深入的、充分的认识 ,只有充分认识GLP的性质、作用和意义 ,才会知道GLP的重要性和必要性 ,才会去实施执行GLP。才能做好GLP工作。[结论 ]从提高对GLP的认识着手 ,严格执行GLP 。

一种腺病毒载体疫苗的体外生物活性和细胞毒性研究

目的探讨一个以腺病毒为载体的人用疫苗(代号LMP-Ad)在传代动物细胞株上的表达能力和细胞毒性,为动物试验提供依据。方法受试物LMP-Ad以不同感染复数(MOI=3000、1000、300、100和30)感染非洲绿猴肾细胞(Vero)、幼仓鼠肾细胞(BHK)、小鼠成纤维细胞(L929)和人胚肺二倍体细胞(KMB17)4种传代细胞株后,用免疫细胞化学染色法检测目的蛋白LMP在细胞膜上的表达情况;在MOI=3×105、3×104、3×103、3×102和30时,用MTT法和FCM检测细胞相对增殖率(RGR)和细胞死亡率。结果在4种细胞中均检测到目的蛋白的表达,其中BHK细胞呈弱阳性,而Vero和KMB17在MOI低至30时仍较好地表达目的蛋白;随着感染剂量的提高,4种细胞的RGR下降而死亡率上升,其中以Vero细胞的变化最为明显。结论受试物对上述细胞均具生物活性,并在高感染剂量时表现出对细胞的生长抑制和一定程度的损伤,4种细胞以Vero和KMB17对受试物最为敏感,更适于作为该类新药的体外研究模型。