人乳头瘤病毒16型治疗性疫苗联合免疫效果研究

目的:探索联合免疫策略对人乳头瘤病毒16型(HPV16)治疗疫苗L2E7E6和rAdE7E6的免疫效果的影响。方法:用L2E7E6融合蛋白和重组腺病毒rAd5E7E6以不同的联合免疫程序分别免疫C57BL/6小鼠,通过检测其诱发的体液免疫和细胞免疫反应,以及观察其在HPV16小鼠治疗模型中的抑瘤效果,比较分析联合免疫对小鼠免疫反应及治疗肿瘤效果的影响。结果:异源性联合免疫组均可检测到较高水平的体液免疫,该2组针对E6、E7特异性的T细胞免疫反应与同源性联合免疫2组相比明显提高,并在小鼠肿瘤治疗模型中能抑制肿瘤生长。结论:异源性联合免疫策略可明显提高HPV16 L2E7E6及rAd5E7E6疫苗的T细胞免疫反应,且有效治疗HPV16相关肿瘤,为HPV16L2E7E6及rAd5E7E6疫苗的应用提供了实验基础。

广西莱姆病的初步调查研究

莱姆病是一种人兽共患病，因该病1975年首先发现于美国康涅狄格州的莱姆地区而被命名为莱姆病。莱姆病的病原体已证实为伯氏疏螺旋体，其有多种动物宿主，主要通过硬蜱叮咬传播。

CXCL12（SDF-1）／CXCR4信号传导通路及其肿瘤相关性研究进展

细胞因子是一组分子量为8～30kD的小分子信号蛋白，多为水溶性蛋白和糖蛋白，在免疫系统中起核心作用，参与免疫和炎症反应。趋化因子是细胞因子中的一个亚家族，

柯萨奇病毒A16型感染性模型的建立及其相关免疫学指标和应用的评价

目的建立简便和可靠的对柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A16,CVA16)敏感的小型啮齿类实验动物模型。方法选取不同日龄长爪沙鼠,腹腔接种CVA16后连续观察14 d,筛选出对病毒敏感的最适接种日龄段;然后比较接种剂量与效应关系,测定其50%致死剂量(LD50);并测定感染3 d后其血液和主要组织器官中CVA16病毒滴度;最后用CVA16灭活疫苗在1日龄和11日龄免疫2针沙鼠后,在14日龄时用LD50剂量病毒攻毒,观察并记录沙鼠体重、症状及死亡率,2周后眼球采血,应用微量中和试验和ELISA分别检测中和抗体效价和总抗体水平。结果长爪沙鼠感染CVA16后出现活动减少、后肢无力、麻痹瘫痪、死亡等临床症状,不同日龄沙鼠对CVA16感染的易感能力和感染后发病程度不同,7日龄和14日龄沙鼠易感,28日龄沙鼠不易感染,最敏感和最合适接种日龄为14日龄,其LD50为1×104.5 CCID50,感染3 d后其血液和主要组织器官中均可检测到高滴度的CVA16病毒,免疫两针灭活疫苗的14日龄沙鼠用LD50剂量攻毒,存活率87.5%,疫苗免疫诱导沙鼠产生的CVA16中和抗体几何平均值(GMT)为28.14,抗体阳性率为87.5%。结论长爪沙鼠对CVA16敏感并且病毒能在其体内进行有效的复制和繁殖,可作为CVA16致病机制研究、疫苗研发及药物评价的可靠小动物模型。

肿瘤细胞致死性人α-乳清蛋白的抗肿瘤作用及其机制的研究进展

肿瘤细胞致死性人α-乳清蛋白(humanα-lactalbumin made lethal to tumor cells,HAMLET)是人α-乳清蛋白与油酸结合后改变自身三级结构而形成的脂蛋白复合物,能够选择性杀伤肿瘤细胞,而对正常细胞几乎无影响。HAMLET杀伤肿瘤细胞的机制目前还未完全明确。早期研究显示,HAMLET通过细胞凋亡机制杀伤肿瘤细胞;进一步研究发现,HAMLET并不主要依赖凋亡,而是通过细胞自噬、内质网应激、蛋白酶体、溶酶体、组蛋白和DAN等多种途径杀伤肿瘤细胞。HAMLET对皮肤乳头状瘤、膀胱癌局部用药的抗肿瘤临床试验已取得良好的效果,它很可能成为具有良好应用前景的绿色抗肿瘤新药。

不同佐剂对人乳头瘤病毒16型L2E7E6蛋白免疫效果的影响

目的:研究CpG佐剂、弗氏佐剂、聚肌胞苷酸佐剂及左旋咪唑、西米替丁作为佐剂对人乳头瘤病毒16型L2E7E6融合蛋白在小鼠体内产生的免疫效果的影响。方法:以单独蛋白组、蛋白加各佐剂组分别肌肉注射免疫C57BL/6小鼠,检测不同佐剂诱发小鼠产生的体液免疫和细胞免疫应答水平,并观察其对小鼠肿瘤生长的抑制作用。结果:各免疫组均能检测到高滴度的抗L2、E7、E6蛋白IgG抗体(以IgG1为主),其中弗氏佐剂能显著提高E6蛋白的IgG和IgG1抗体水平和E7蛋白的IgG1抗体水平(P<0.05),CpG佐剂明显提高了E7蛋白的IgG2a抗体水平(P<0.01);而西米替丁佐剂则降低了E7抗原的IgG抗体水平(P<0.05);同时可以检测到CpG佐剂组能诱发小鼠产生针对E7、E6较强的细胞免疫反应,且能抑制70%的荷瘤小鼠肿瘤生长;此外弗氏佐剂与聚肌胞苷酸佐剂可产生较弱的针对E7肽的细胞免疫反应,能延缓荷瘤小鼠肿瘤形成时间,与单纯蛋白组相比差异显著(P<0.05)。结论:CpG佐剂、弗氏佐剂和聚肌胞苷酸佐剂都能提高人乳头瘤病毒16型L2E7E6融合蛋白的细胞免疫反应水平和抑制肿瘤生长能力,其中CpG佐剂效果较好,为促进该蛋白作为疫苗的研发提供了实验依据。

传染性海绵样脑病病原的研究进展

传染性海绵样脑病因疯牛病的爆发和新型克雅氏病的出现而引起人们的关注。研究发现，疯牛病的流行可能是由羊痒病的病原引起的，这种病原被Prusiner命名为“Prion”（1982）。从80年代开始研究以来，越来越多的关于Prion的特性被人们所了解，比如Prion蛋白和PrP基因。本文综述了近几年来研究者们用不同手段从各个角度对病原进行研究的新进展。

RT-RCR产物固相杂交-酶联显色方法检测甲肝减毒活疫苗病毒滴度

目的应用RT-PCR-EIJSA方法检测甲肝减毒活疫苗病毒滴度。方法应用固相杂交一酶联显色方法，将标记有生物素的寡核苷酸引物所扩增的疫苗病毒基因产物，与微孔反应板上的特异性探针进行快速杂交，通过辣根过氧化物酶标记的链亲和素进行酶联显色，读取光密度值(OD值)，判断结果。应用此法检测了11批甲肝活疫苗滴度。并与常规细胞培养法(CCID50)比较。结果证明本方法与细胞培养法(CCID50)的敏感性相仿，具有简便、快速、特异的优点。结论RT-PCR-EIJSA法有望代替常规细胞培养法应用于甲肝减毒活疫苗病毒滴度的检测。

甲型肝炎疫苗研究的重大突破

本文论述了我国甲型肝炎严重流行的基本原因，指出发展疫苗以预防甲肝应是主要措施，报道了H2减毒株的培育及首批人体接,12中接种者在接种后长达20周的临床及血清酶反应中未发现任何不良反应，全部接种者均产生抗HAV抗原，抗体阳性时间平均为接种后第3周。

甲型肝炎减毒活疫苗的研究

病毒性甲型肝炎是由甲型肝炎病毒引起的急性病毒性传染病.甲型肝炎病毒一般通过粪-口途径传播,潜伏期4-6周,引起的甲型肝炎是一种自限性急性病毒性传染病,基本上不引起慢性化,病死率很低.

哮喘豚鼠肺气管LPO含量变化的研究

探讨自由基引发支气管哮喘的作用机制。采用卵蛋白致敏和吸入激发复制哮喘豚鼠模型 ,检测血清、肺组织、气管条中的过氧化脂质 (LPO)的含量变化 ,发现哮喘豚鼠血清、肺组织、气管条中LPO明显高于对照组 ,且气管条前 1/ 6区域LPO含量高于其他区域。提示自由基是导致哮喘气道高反应的重要病理机制之一。

传统方法研究甲肝疫苗的近况

传统方法研究甲肝疫苗的近况浙江省医学科学院病毒病研究所（杭州３１００１３）茅涵文，罗永能１９７９年，Ｐｒｉｖｏｓｔ与Ｈｉｌｌｅｍａｎ首次报道了甲肝病毒（ＨＡＶ）可以在体外细胞中分离增殖（１）。此后，世界各地实验室又陆续发现了多种株型ＨＡＶ。许多学者对...

艾滋病的研究近况

艾滋病(AIDS,获得性免疫缺陷综合征)严重威胁着当今人类的健康,并导致一系列社会问题.正如WHO前总干事马勒博士所说.“艾滋病不仅是一种疾病,而且是一种健康状况,一个卫生问题,它对社会、经济发展、家庭生活以及儿童健康带来很大的影响.”尽管近年来对艾滋病的研究进展很快,并取得一些突破,但至今对该病仍无有效的防治措施.专家预测,在今后的50年内艾滋病仍是危害人类健康的最严重疾病.因此,开展有效的预防是当务之急.本文简要地介绍艾滋病的研究近况.

治疗性人乳头瘤病毒16型疫苗的人参皂苷单体佐剂筛选研究

目的研究不同人参皂苷单体佐剂对治疗性人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus type 16,HPV16)重组疫苗免疫效果的影响,筛选合适的人参皂苷单体作为候选佐剂。方法选择5种人参皂苷单体Rb1、Rh1-1、Rh1-2、Rg1、Rg3,分别与治疗性HPV16重组疫苗联合免疫C57BL/6小鼠,用酶联免疫斑点试验比较各组小鼠的特异性细胞免疫应答水平,同时比较这5种人参皂苷单体对治疗性HPV16重组疫苗抑制小鼠肿瘤生长的影响。结果人参皂苷单体Rg1、Rb1可以显著提高治疗性HPV16重组疫苗特异性细胞免疫应答(HPV+Rg1组vs HPV组:t=3.729,P=0.006;HPV+Rb1组vs HPV组:t=3.204,P=0.013),同时可以在小鼠特异性肿瘤模型建立4周时,有效抑制肿瘤的生长水平(HPV+Rg1组vs HPV组:t=2.318,P=0.032;HPV+Rb1组vs HPV组:t=2.258,P=0.037)。结论人参皂苷单体Rg1、Rb1能在C57BL/6小鼠中提高治疗性HPV16重组疫苗的特异性免疫效果,有望成为候选佐剂。

柯萨奇病毒A16型YY157株在Vero细胞中培养与增殖特性的研究

目的 探索柯萨奇病毒A16型（CVA16） YY157株在非洲绿猴肾（Vero）细胞中培养与增殖的合适条件.方法 把CVA16 YY157株接种于Vero细胞适应性传代,挑斑纯化后,在不同条件下培养并比较其对病毒滴度的影响.结果 CVA16 YY157株在Vero细胞中培养能导致细胞病变（CPE）,可形成蚀斑.将此CVA16病毒以0.01 ～0.1MOI接种于Vero细胞,并在低于2％牛血清浓度的培养基,35℃培养60 h,CPE可达90％以上;此条件下收获培养液上清,可得到较高滴度的病毒.结论 初步建立了CVA16 YY157株在Vero细胞中培养与增殖的方法,为其下一步的大规模培养及疫苗制备奠定了基础.

HMGB1对HPV16型重组腺病毒载体疫苗免疫效果的影响及机制研究

目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)分子与人乳头瘤病毒(HPV)16型E6E7重组腺病毒载体疫苗免疫效果的关系及机制。方法通过TC-1细胞移植诱导建立小鼠肿瘤模型,在接种HPV重组腺病毒载体疫苗的同时,给予注射HMGB1特异性拮抗剂HMGB1 A box,开展肿瘤抑制试验、小鼠免疫状态观察、肿瘤相关信号检测等研究。结果 A box蛋白与疫苗联用,可显著降低模型小鼠HMGB1血清水平,抑制肿瘤组织中NF-?B的m RNA高表达,提高疫苗的抗肿瘤活性。同时,它还可减少IL-4、促进IFN-?产生,使体内免疫平衡由Th2向Th1偏移。和肿瘤模型对照组相比,在接种疫苗并注射A box蛋白后,由肿瘤引起的NF-?B、Bcl-2、c-IAP2、VEGF、MMP-9的表达提高、Bax表达降低均得到显著扭转。结论 HMGB1分子可以削弱HPV重组腺病毒载体疫苗的免疫效果,其机制可能是HMGB1在调节免疫平衡状态及控制肿瘤细胞的凋亡、浸润、转移等多层面均能参与并发挥重要作用。

RT-PCR-ELISA方法检测甲肝减毒活疫苗病毒滴度的初步研究

目的 应用核酸扩增产物测定的固相杂交酶联显色法 (RT PCR ELISA)检测甲肝减毒活疫苗病毒滴度。方法 应用RT PCR ELISA ,将标记有生物素的寡核苷酸引物所扩增的疫苗病毒基因产物 ,与微孔反应板上的特异性探针进行快速杂交 ,通过辣根过氧化物酶标记的链亲和素进行酶联显色 ,读取吸光度 (A值 ) ,判断结果。应用此法检测了 11批甲肝活疫苗滴度 ,并与常规细胞培养法(CCID50 )比较。结果 本方法与细胞培养法的敏感性相仿 ,具有简便、快速、特异的优点。结论 RT PCR ELISA法有望代替常规细胞培养法应用于甲肝减毒活疫苗病毒滴度的检测。