脂质体VEGFR2胞外区基因肿瘤疫苗的制备及其免疫激活体外抗肿瘤活性研究

目的:制备脂质体(LP)携带VEGFR2胞外区(exVEGFR2)肿瘤抗原pCMV质粒复合物基因疫苗,为肿瘤免疫治疗提供新的主动免疫疗法。方法:RT-PCR扩增含2个KpnⅠ和XbaⅠ限制性酶切位点的exVEGFR2序列,将其与pCMV质粒连接,构建pCMV/exVEGFR2质粒。Western blot检测exVEGFR2体外表达水平。用制备好的脂质体pCMV/exVEGFR2复合物(LP-pCMV/exVEGFR2)免疫C57BL/6小鼠,ELISA法检测其免疫激活活性。利用51 Cr释放实验分析CTLs介导的细胞毒活性。结果:成功扩增到exVEGFR2序列,并构建pCMV/exVEGFR2质粒;只有在pCMV/exVEGFR2转染COS-7细胞中,检测到与目的蛋白序列大小一致的相对分子质量为90000的VEGFR2特异性条带。LP-pCMV/exVEGFR2免疫小鼠6周后,ELISA法检测到强烈的特异性抗VEGFR2免疫激活效应;其免疫T细胞能够有效地介导体外VEGFR2阳性的CT-26结肠癌细胞毒性。结论:LP-pCMV/exVEGFR2能够有效地激活小鼠产生特异性抗VEGFR2免疫应答效应,并产生体外抗肿瘤细胞免疫毒性,为后期研究主动免疫治疗VEGFR2阳性肿瘤奠定实验基础。

血红素加氧酶1基因启动子多态性与食管鳞状细胞癌的关系

目的 分析人血红素加氧酶1（HO-1）基因启动子区（GT）n微卫星多态性与汉族人群患食管鳞状细胞癌的风险及相关临床病理学特征的关联性,探讨（GT）n多态性与食管癌的关系.方法 选取2011年1月至2013年12月年龄为40～ 79岁的126例食管鳞状细胞癌患者为病例组,其中男性83例,女性43例,平均年龄（6l＆#177;8）岁;选择同期健康体检人群134名为对照组.对两组的血液标本应用PCR技术扩增（GT）n特定片段,并进行基因测序,根据（GT）n的重复次数把其分为S（n＜25）、M（25≤n＜30）、L（n≥30）3类等位基因,统计其频率分布情况,x2检验评价多态性与食管鳞状细胞癌及临床病理特征的关系.构建相应的启动子荧光素酶报告质粒,转染食管鳞状细胞癌细胞株Ecal09,检测相对荧光素酶活性比值,方差分析评价不同长度的（GT）n其启动子活性情况.结果 病例组L型等位基因频率（25.8％比14.9％,x2=9.520,P=0.002）、L型等位基因携带率高于对照组（41.3％比27.6％,x2=5.381,P=0.020）.L型等位基因携带患者较非L型等位基因携带患者有较高的淋巴结转移率（63.5％比41.8％,x2=5.685,P=0.017）和低分化鳞状细胞癌细胞检出率（53.8％比28.4％,x2=8.335,P=0.004）.H202处理组中,转染携带（GT）16重组报告质粒的Ecal09细胞株相对荧光素酶活性较双蒸水处理组增加（F=23.615,P=0.008）;在双蒸水处理组中,转染携带（GT）16重组报告质粒的细胞相对荧光素酶活性较（GT）26和（GT）36增加（F =41.376,P=0.003：F=50.761,P=0.002）.结论 携带HO-1基因启动子长（GT）n重复序列（n≥30）可能增加食管鳞状细胞癌的易感性并加大淋巴结转移的风险.