白三烯B4和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子与急性冠状动脉不稳定斑块关系的实验研究

目的研究白三烯B4（LTB4）及基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）与冠状动脉不稳定斑块的关系，以及LTB4对巨噬细胞EMMPRIN表达的影响，探讨它们在急性冠状动脉综合征（ACS）中的临床意义。方法采用免疫组织化学法检测11例人冠状动脉标本EMMPRIN的表达。细胞实验分为8组，第1组为THP-1细胞（THP-1组），2～8组为THP-1源性巨噬细胞（THP．1细胞经佛波酯诱导24h后形成巨噬细胞），第2～6组分别以0、10^-10、10^-9、10^-8和10^-7mol／L LTB4干预24h（分别为THP-1源性巨噬细胞组、LTB410^10mol／L组、LTB410^-9mol／L组、LTB410^-8mol／L组和LTB410^-7mol／L组），7、8组分别在10^-7mol／LLTB4干预24h前分别以10^-7、10^-6mol／LLTB4受体拮抗剂U75302干预2h（分别为U75302 10^-7mol／L组和U75302 10^-6mol／L组）。以Western blot法检测各组细胞内EMMPRIN蛋白的表达。结果免疫组化提示EMMPRIN在冠状动脉易损斑块巨噬细胞密集处及增生的平滑肌细胞中呈阳性表达。细胞实验发现，LTB4各浓度组EMMPRIN蛋白表达水平均明显高于THP-1组及THP-1源性巨噬细胞组（P均〈0．01），且LTB4浓度越高，EMMPRIN蛋白表达水平越高，以LTB10^-7mol／L组为最高，邻近浓度两组间比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）。U75302 10^-7 mol／L组及U7530210^-6mol／L组EMMPRIN蛋白表达水平均低于LTB4 10^-7mol／L组（P均〈0．05），且U75302 10^-6mol／L组低于U75302 10^-7mol／L组（P〈0．05）。结论ACS患者冠状动脉不稳定斑块中的巨噬细胞和平滑肌细胞表达EMMPRIN，册B4能刺激巨噬细胞表达EMMPRIN，其抑制剂U75302能阻断该作用，提示EMMPRIN与LTB4可能共同参与了ACS斑块不稳定过程，为ACS的诊疗提供了新的思路。

HepG2-hNTCP细胞模型的构建及在miRNA-548ah调控乙型肝炎病毒研究中的应用

目的构建并鉴定表达人钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(hNTCP)的HepG2-hNTCP细胞模型,探讨微小RNA-548ah(miR-548ah)对乙型肝炎病毒复制和表达的影响。方法扩增重组慢病毒pWPI-hNTCP-Puro质粒,pWPI-hNTCP-Puro慢病毒感染HepG2细胞,聚合酶链反应(PCR)检测hNTCPmRNA的表达水平,共聚焦显微镜检测hNTCP蛋白定位。Lipofectamine转染miR-548ah激动剂、miR-548ah抑制剂及阴性对照至细胞系。酶联免疫吸附测定检测HBsAg和HBeAg的表达水平,荧光定量PCR检测HBVDNA的表达,应用SPSS 17.0对数据进行分析。结果hNTCP mRNA在HepG2hNTCP呈高水平表达。共聚焦荧光显微镜观察HepG2hNTCP中的hNTCP蛋白正常表达且主要定位在细胞膜上。与HepG2细胞比较,HBsAg和HBeAg在感染后HepG2-hNTCP细胞5天和7天后的表达水平存在差异,随培养天数呈上升趋势,具有统计学意义(P<0.01)。与转染阴性对照比较,HBsAg在转染miR-548ah激动剂组的表达水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05);而HBeAg和HBVDNA的表达水平无明显变化,差异均无统计学意义。结论成功构建了表达hNTCP的HepG2-hNTCP细胞模型,对乙型肝炎病毒感染具有良好的易感性;miR-548ah可促进HBV感染HepG2-hNTCP细胞模型中HBsAg的表达。