Bobs技术在胎儿染色体异常产前诊断中的应用

目的:探讨将细菌人工染色体微球(Bobs)检测技术应用于胎儿染色体异常产前诊断的可行性。方法:选取7864例单胎中期妊娠孕妇(指征包括高龄、唐氏血清学筛查高风险、胎儿无创DNA检测高风险、不良生育史、胎儿超声结构或软指标异常、染色体病家族史等),用Bobs技术快速检测13、18、21、X、Y染色体的数目异常及9种微缺失综合征,并与常规羊水细胞染色体的G显带分析结果及基因芯片检测结果进行比较。结果:共检出302例各类异常,包括256例染色体非整倍体数目异常(含3例嵌合体及2例47,XXY合并Yq11.223、Yq11.23微重复),46例微缺失及微重复异常(含1例等臂X染色体),染色体非整倍体数目异常检测结果同G显带核型分析结果一致,有39例微缺失、微重复进行基因芯片检测,结果与Bobs一致。Bobs在检测数目异常+嵌合体及结构异常的灵敏度、特异性和准确性均为100.0%。结论:Bobs技术检测胎儿染色体非整倍体异常和9种微缺失综合征,是具有快速、可靠等特点的产前诊断方法。

母血清筛查21三体、18三体阳性病例的产前诊断

目的探讨孕中期母血清筛查21-三体,18-三体阳性病例的染色体异常情况。方法AFP和Free-hcGβ用美国PE公司的时间分辨免疫荧光分析系统测定,风险值计算21-三体以1/270,18-三体以1/350为切割值。阳性病例进行羊膜腔穿刺羊水细胞培养。结果在54580例产前筛中有2615例为21-三体或18-三体阳性病例,占总筛查人数的4.79%。其中对1161例阳性病例进行了染色体分析(占总阳性数的44.4%)。结果发现29例异常核型,其中21-三体14例,18-三体5例,性染色体异常3例,其他异常核型7例,异常发生率2.49%。结论母血清产前筛查结合羊水诊断能够有效的避免胎儿染色体异常的发生。

嘉兴地区2436例遗传咨询者外周血淋巴细胞染色体分析

目的研究染色体异常与临床疾病发生之间的关系。方法采用人外周血淋巴细胞培养,常规G显带技术进行核型分析。结果2436例检查者中,染色体异常167例,异常检出率为6.86%。染色体异常疾病主要发生于有不良孕产史、不孕不育、性分化异常、原发闭经及智力低下。结论染色体异常会导致临床疾病的发生,遗传咨询和产前诊断在临床治疗及指导优生中具有重要意义。

应用大规模平行基因组测序技术无创产前诊断胎儿常见染色体非整倍体异常

目的：探讨大规模平行基因组测序技术检测孕妇外周血浆中游离DNA，行胎儿染色体非整倍体的无创产前诊断，在检测胎儿染色体拷贝数的可行性。方法选择2012年2月至2013年7月在浙江省嘉兴市妇幼保健院产前诊断中心就诊，孕龄在13～33周，唐氏血清学筛查高风险、高龄孕妇或超声显示有异常的孕妇1264例，行无创产前诊断。抽取孕妇外周静脉血，提取血浆DNA，制备测序文库，采用Illumina HiSeq2000测序平台对孕妇外周血中游离胎儿DNA进行测序分析，对检测结果阳性者行介入性穿刺及胎儿染色体分析；对检测结果阴性者随访。结果1264例孕妇中，检测结果阳性者共20例。与介入性诊断染色体核型分析的结果相对照，13例21-三体检测阳性者，诊断符合率100％。6例18-三体检测阳性者中，有5例进行了羊膜腔穿刺（1例发生死胎除外），其中4例为18-三体，1例为正常核型，经检测为胎盘18-三体嵌合。13-三体1例，与核型分析相符。结论大规模平行基因组测序技术行无创产前诊断胎儿染色体非整倍体，可以作为血清学筛查高风险孕妇及其他有产前诊断指征孕妇的进一步筛选方法，可大大减少介入性产前诊断的数量。其敏感性、特异性与染色体核型分析技术具有较高的一致性。

应用单核苷酸多态性-微阵列技术产前诊断胎儿标记染色体确诊Pallister-Killian综合征一例

目的应用单核苷酸多态性一微阵列技术（single nueleotide polymorphism array, SNP-array）鉴别来源不明的胎儿标记染色体，明确其遗传物质的来源，并探讨此技术在产前诊断中的应用价值。方法对1例染色体核型分析提示携带来源不明的额外小标记染色体（supernumerary small marker chromosome,sSMC） 胎儿进行SNP—array全基因组扫描分析，并用荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization,FISH）进行验证。结果胎儿染色体核型为47，XX，＋mar，基因芯片检测确定sSMC为12p13．33p11．1区存在34．6Mb片段拷贝数增加，FISH结果证实sSMC来源于12号染色体短臂。结论明确该胎儿核型为47，xX，＋i（12）（p10），查阅文献得知12p四体会引起Pallister-Killian综合征，导致多发畸形。SNP—array基因芯片技术可一次性检测到23对染色体存在的微重复和微缺失，明确标记染色体的遗传物质来源，适用于疑难病例的鉴别和微缺失微重复综合征的诊断。

2023例遗传咨询者染色体核型遗传效应分析

目的探讨遗传咨询者外周血染色体核型异常出现的类型、发生率与发育异常、不孕不育、不良孕产史等临床疾病的关系。方法选取2017年3月至2019年6月浙江省嘉兴市妇幼保健院诊治的2 023例遗传咨询者作为研究对象。抽取外周静脉血并对外周血淋巴细胞进行培养,而后利用G显带染色体核型技术进行遗传学分析。结果 45例发育异常就诊儿童中,异常检出率为20.00%(9/45);1 978例不孕不育、不良孕产史就诊病例中,异常检出率8.09%(160/1 978),其中常染色体数目异常1例、性染色体数目异常8例、罗伯逊易位7例、常染色体平衡易位21例、臂间倒位23例、性染色体结构异常2例、染色体多态性98例。结论染色体异常在遗传咨询者中比例较高,是导致发育异常、不孕不育、不良孕产史等临床疾病的重要原因,临床中应推荐此类人群做遗传学核型分析。

4035例高危妊娠孕妇羊水细胞染色体核型分析与产前诊断

目的对高危孕妇进行羊水细胞染色体核型分析,以阻止染色体异常胎儿的出生。方法对妊娠中期母血清筛查高危、孕妇年龄>35岁、超声检查异常或具有不良孕产史等指征的4 035例孕妇进行羊水穿刺,通过羊水细胞培养、制片及G显带技术进行染色体核型分析。结果成功培养羊水细胞4 020例,共发现异常核型224例,异常检出率5.57%,其中三体型84例,部分三体型3例,性染色体异常19例,染色体结构异常43例,标记染色体1例,染色体多态性变异63例,嵌合体11例。结论对具有产前诊断指征的孕妇进行羊膜腔穿刺,行羊水细胞染色体核型分析安全可靠,对预防出生缺陷具有重要作用。

优化荧光原位杂交技术产前诊断常见染色体异常

目的优化荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术,探讨FISH在快速诊断羊水间期细胞常见染色体异常的临床应用。方法改良FISH操作方法与探针用量,对510例孕妇羊水样本同时进行FISH快速产前诊断和常规细胞培养核型分析。结果 510例羊水样本中,FISH检测出了10例异常,其中7例21-三体、1例18-三体、1例45,X、1例47,XXX,与染色体核型分析结果相一致。结论改良后的FISH技术准确性与特异性与原方法相当,且节约成本。FISH技术可应用于临床快速产前诊断常见染色体非整倍体异常。

孕中期母血清筛查胎儿出生缺陷的研究

目的 研究孕妇血清标记物产前筛查胎儿染色体异常及神经管缺陷。方法 应用时间分辩免疫荧光法检测12 97例孕中期母血清AFP和F -HCG并与B超、羊水、新生儿检查结果对照。结果 筛查出高风险孕妇 10 9例 ,确诊神经管畸形 4例 ,染色体异常 3例 ,无筛查漏检病例发现。

血清中IgG抗A(B)抗体的测定在反复自然流产中的应用

目的探讨反复自然流产患者血清中IgG抗A(B)抗体效价情况。方法对反复自然流产夫妇进行ABO血型测定,对血型不合的夫妇IgG抗体效价进行测定。结果118例反复自然流产中有71例抗体效价≥1:64占60.2%。结论ABO血型不合引起的反复自然流产对其进行抗体效价的测定及对其跟踪检测具有重要临床意义。

荧光原位杂交技术在产前诊断及遗传咨询中的应用

荧光原位杂交（FISH）是近年发展起来的一种分子生物学、细胞遗传学及免疫学技术相结合的全新技术，其在基础生物学领域和临床研究中得到广泛应用。FISH作为一种非放射原性杂交法，它利用特殊的荧光素标记DNA探针，与DNA进行杂交，经免疫荧光显色，可检测细胞内DNA或RNA的存在与否，这既可显示染色体中期分裂相，又能显示未培养的间期核。因此，FISH通常被用于性别鉴定、染色体非整倍体诊断、染色体结构异常诊断、基因定位、间期细胞遗传学及肿瘤遗传学研究。

应用BACs-on-Beads^TM和SNP-array技术产前诊断18p四体综合征一例

目的应用产前BACs—on-Beads^TM（BoBs）和单核苷酸多态性微阵列技术（single nucleotide polymorphism array，SNP—array）鉴定1例胎儿标记染色体。方法对1例产前BoBs检测提示存在18号染色体部分重复、羊水核型分析证实其携带额外标记染色体的胎儿进行SNP—array分析。结果BoBs检测提示胎儿染色体18p11．32和18p11．21区存在扩增，染色体分析证实其核型为47，XX，＋mar。SNP—array检测提示其在18p11．32q11．1区存在18．3Mb的拷贝数增加。结论明确该胎儿核型为47，XX，＋der18（18p11．32→18q11．1：：18q11．1→18p11.32），其4倍重复涉及SMCHD1、LPIN2、TGIF1等重要基因，可能导致严重的胎儿畸形。

嘉兴地区1100例自然流产患者的细胞遗传学分析

自然流产是妇科常见病，病因复杂，解剖因素、免疫因素、内分泌因素和遗传因素均是导致自然流产的原因。其中染色体异常与流产的关系一直为人们所重视。我们对1100例自然流产患者进行了细胞遗传学检查，现报告如下。

单核苷酸多态微阵列技术诊断Williams-Beuren综合征一例

目的探讨1例智力低下、生长发育迟缓并伴有多系统紊乱的患儿的遗传学原因，分析患儿基因组拷贝数变异（copy number variations，CNVs）及其所含基因与临床表型的关系。方法用常规G显带技术分析患儿及其父母外周血染色体核型，之后应用单核苷酸多态微阵列技术（single nucleotide polymorphisms array，SNP—array）对患儿进行全基因组扫描分析，进而采用荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization，FISH）进行实验验证。结果患儿及其父母的外周血常规染色体核型分析未见异常。SNP-array分析结果显示7q11．23区域杂合性缺失，长度为1673kb，其缺失与Williams—Beuren综合征相关。FISH实验结果验证了此微缺失的存在，并通过检测其父母FISH结果，证实为一种新发的缺失。结论用SNP—array结合FISH技术确诊了1例Williams—Beuren综合征，患儿的临床表型与其染色体微缺失的片段7q11．23相关。与传统的细胞遗传学分析方法相比，SNP-array在临床检测不明原因智力低下、发育迟缓患者中具有显著优势。

血清学产前筛查中期与早中孕期整合筛查胎儿染色体非整倍体异常的效果分析

目的探讨血清学产前筛查中期与早中孕期整合筛查胎儿染色体非整倍体异常的效果分析,提供高效率胎儿染色体非整倍体异常的筛查方案。方法选择筛查的231176例孕妇,其中中孕筛查201113例,早中孕整合筛查30063例;中孕筛查予采用DELFIA测定孕妇血清Free-HCGβ,甲胎蛋白(AFP),早中孕整合筛查分别予早孕采用时间分辨免疫荧光法(DELFIA)测定孕妇血清绒毛膜促性腺激素(Free-βh CG),妊娠相关蛋白A(PAPP-A),B超测定胎儿颈部透明带厚度(NT)值,中孕采用DELFIA测定孕妇血清Free-HCGβ,甲胎蛋白(AFP),然后运用软件分析唐氏综合征风险;高风险的孕妇进行羊水穿刺和脐静脉穿刺诊断,出生结局通过电话、电子网络跟踪随访。结果早中孕整合筛查比中孕筛查阳性率降低2.93%细胞学诊断率提升40.58%、检出异常率增加2.1%,侵入性穿刺减少55.42%,低风险的漏诊率0.10‰。结论早中孕整合筛查要比中孕筛查优越,高风险的阳性率低,细胞学诊断率、检出异常率明显高于中孕筛查,低风险的漏诊率与中孕接近,但是能有效减少孕妇侵入性穿刺数,减轻了孕妇从产前筛查到诊断的恐惧心理,也有效减少了缺陷儿的发生。

孕妇尿液cfDNA产前检测胎儿21-三体可行性研究

目的本文旨在探讨利用大规模平行测序(MPS)技术对孕妇尿液中的游离DNA(cf DNA)进行胎儿21-三体(T21)无创产前检测的可行性。方法本研究选取10个胎儿羊膜穿刺核型分析结果正常和9个分析结果为T21的孕妇晨尿,对19个孕妇的尿液采用磁珠法提取cf DNA,构建文库,Hisq2000测序,测序结果用BWA软件比对序列,计算每个样本的21号染色体所的比对上的唯一读长(Read)比率,最后进行Mann-Whitney U-test检测分析两组样本是否有显著差异。结果胎儿21-三体的孕妇尿液cf DNA中21号染色体的百分含量与胎儿正常孕妇的有显著差异(P=0.04122)。结论对孕妇尿液中的游离DNA进行大规模平行测序可用于无创产前检测21-三体。

早、中孕期整合筛查唐氏综合征

目的 评估早、中孕整合筛查唐氏综合征的效果,提供高效率唐氏综合征筛查方案.方法 4237例孕妇,年龄≥18周岁,平均为25.98岁,分别于早孕（11～13周＋6d）采用时间分辨免疫荧光法（DELFIA）测定孕妇血清游离β人绒毛膜促性腺激素（Free-βhCG）,妊娠相关蛋白A（PAPPA）,B超测定胎儿颈部透明带厚度（NT）值,中孕（15～20周＋6d）采用 DELFIA测定孕妇血清βhCG,甲胎蛋白（AFP）,利用风险计算软件,分别计算同一患者早孕期风险、中孕期风险、整合风险;高风险？照 （＞1/270）患者进行羊水穿刺和脐静脉穿刺诊断;出生结局进行电子网络跟踪随访.结果 4237例孕妇中筛查高风险者为早孕期98例、中孕期241例、早中孕期整合101例,以上3者筛查出的唐氏综合征分别是2、3、4例,检出率分别为 50%、75%、100%,检出效率分别为1∶50、1∶80、1∶25.结论 整合筛查比早孕期筛查、中孕期筛查要优越,在较低的假阳性情况下有较高的检测率,并可减少孕妇侵入性穿刺;提高早孕筛查效率需要高水平的B超诊断技术和发展多种B超联合诊断方法.

1540例羊水细胞染色体核型分析

1对象与方法 1．1 对象 1540例高危孕妇均来自我院2002年7月至2007年12月产前咨询门诊筛出的母血清筛查高风险，高龄孕妇，产前诊断B超显示胎儿畸形，曾有过不良孕产史，夫妇一方为染色体平衡易位携带者。年龄为（20～42）岁，检测孕周范围为（17～24）周。

单核苷酸多态微阵列技术确诊Wolf-Hirschhorn综合征一例

目的探讨1例多发畸形伴癫痫患儿的遗传学病因，分析该患儿基因组拷贝数变异（copynumbervariations，CNVs）与临床表型的关系。方法对患儿及其父母行外周血淋巴细胞G显带染色体核型分析，对患儿应用单核苷酸多态性微阵列芯片技术（singlenucleotidepolymorphismsarray，SNP—array）检测其染色体结构改变，之后用荧光原位杂交技术（fluorescenceinsituhybridization，FISH）进行验证。结果患儿染色体核型为46，XX，del（4）（p15），其父母外周血核型分析未见异常。SNP—array分析结果显示患儿4p16．3p15．33区域存在13．3Mb的杂合性缺失，该缺失与Wolf-Hirschhorn综合征相关。FISH结果证实了此缺失的存在，结合父母的核型与临床表型确认为新发缺失。结论根据患儿的临床表型及染色体缺失的片段明确诊断Wolf-Hirschhorn综合征一例。SNP—array技术可以进一步明确缺失的具体区域及所包含的基因，与传统的细胞遗传学分析方法相比，具有高分辨、高准确度的优点，可为遗传学检测提供更为详细的信息。