R-脊椎蛋白1对肝星状细胞活化的作用及其机制

目的 探讨R-脊椎蛋白1（R-Spondin1）在小鼠肝纤维化模型及肝星状细胞（HSC）中的动态表达情况及其对HSC活化的影响. 方法 体内实验：健康雄性昆明种小鼠24只,随机分为2组.模型组（16只）：用20％四氯化碳（CCl4）橄榄油5ml/kg皮下注射,2次/周;对照组小鼠（8只）不作任何处理.10周后处死小鼠,留取肝组织,Western blot检测R-Spondin1、α-平滑肌肌动蛋白（c-SMA）、胶原蛋白Ⅰ（collagen Ⅰ）的蛋白水平,Real-time PCR检测R-Spondinl、α-SMA、collagenⅠ的mRNA水平.体外实验：分离小鼠HSC,检测R-Spondin1、α-SMA、核内β-catenin的蛋白表达情况,以及R-Spondin1的mRNA水平、T淋巴细胞转录因子（TCF）活性在HSC自发激活前后的变化,并比较小鼠HSC经R-Spondin1和抑癌蛋白刺激前后的活化差异.两组间均数比较采用t检验;多组资料采用单因素方差分析,进一步的两两比较采用Dunnett检验. 结果 与对照组相比,肝纤维化模型组R-Spondin1蛋白和mRNA表达水平明显增高,差异有统计学意义（蛋白相对表达量为3.16±0.18与0.99±0.16,t=13.31,P＜0.01;mRNA相对水平为4.36±0.26与0.98±0.12,t=21.46,P＜0.01）.在HSC的自发激活过程中,核内β-catenin的蛋白水平和TCF活性显著增强（核内β-catenin蛋白相对表达量为4.47±0.21与0.97±0.14,t=25.25,P＜0.01;TCF相对活性为5.33±0.34与1.03±0.09,t=20.93,P＜0.01）;R-Spondin1的蛋白和mRNA表达水平显著上调（蛋白相对表达量为4.54±0.18与1.04±0.12,t=31.17,P＜0.01;mRNA相对水平为5.13±0.15与1.01±0.16,t=38.06,P＜0.01）.α-SMA、核内β-catenin的蛋白表达及TCF活性在R-Spondin1刺激后显著上调;而在R-Spondin1和抑癌蛋白共同刺激后无显著变化. 结论 R-Spondin1可能通过增强β-catenin在细胞核内的积聚影响HSC的活化.