白花丹醌对白血病细胞DNA甲基转移酶的作用

目的探讨中草药提取物白花丹醌对人白血病细胞系HL-60甲基化的影响机制。方法MTS法确定不影响细胞生长的白花丹醌研究浓度;白花丹醌研究浓度作用于HL-60细胞不同时间,ELISA法测定其甲基化水平和DNA甲基转移酶(DNMT)活性;实时荧光定量PCR评估DNMT酶类基因mRNA表达水平。结果选定白花丹醌0.8μmol/L作为研究浓度,作用18h,HL-60细胞甲基化水平显著下降[(1.63±0.27)ng比(2.42±0.41)ng,P<0.05],这种去甲基化作用能被活性氧(ROS)阻滞剂所逆转,使得预处理组与对照组甲基化水平无显著差异[(2.11±0.16)ng比(2.27±0.21)ng,P>0.05];白花丹醌作用12h后,与对照组比较出现DNMT总体活性的下降[(0.91±0.09)OD·h^(-1)·μg^(-1)比(1.24±0.19)OD·h^(-1)·μg^(-1),P<0.05],作用24h后活性下降更明显[(0.69±0.08)OD·h^(-1)·μg^(-1)比(1.24±0.19)OD·h^(-1)·μg^(-1),P<0.01];白花丹醌对DNMT1、DNMT3b基因的表达具有明显抑制作用(P<0.05),对DNMT3a基因的表达作用不明显。结论低浓度白花丹醌以ROS为重要介质,能够诱导白血病细胞去甲基化,这种作用与抑制DNMT活性,抑制DNMT1和DNMT3b基因的表达有关。