丹参多糖促进自噬抑制脂多糖诱导心肌细胞凋亡的实验研究

目的探讨丹参多糖(SMP)调控脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞凋亡的作用机制。方法不同浓度(0、0.5、1、2mg/mL)SMP预处理SD大鼠心肌细胞12h后,1μg/mL LPS刺激大鼠心肌细胞24h,以LPS单独处理构建心肌细胞损伤模型,对照组加入等量生理盐水,四唑盐比色法(MTT)观察心肌细胞存活率,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,免疫印迹(Western blot)检测各组心肌细胞自噬相关蛋白LC3、Beclin1及凋亡相关蛋白Bax、Caspase3表达量;SMP联合自噬抑制剂氯喹(CQ)或自噬激活剂雷帕霉素靶蛋白抑制剂(Torin1)处理LPS处理的大鼠心肌细胞24h,MTT观察细胞存活率,流式细胞仪(FACS)检测细胞凋亡率,Western blot检测各组细胞自噬相关蛋白LC3、Beclin1及凋亡相关蛋白Bax、Caspase3表达量。结果与对照组比较,LPS处理24h后,心肌细胞活力显著下降[(43.57±1.07)%比(100.03±2.12)%,P<0.01],凋亡细胞率升高[(30.34±3.13)%比(4.02±0.13)%,P<0.01],凋亡相关蛋白Bax、cleaved-Caspase3表达量增多,自噬相关蛋白Beclin1和LC3II表达量增多。与LPS组比较,1、2mg/mL SMP预处理组心肌细胞存活率显著增加[(69.72±2.15)%、(89.65±3.23)%比(43.57±1.07)%,P<0.05,P<0.01],凋亡率显著降低[(19.18±1.34)%、(12.28±1.05)%比(30.34±3.13)%,P<0.05,P<0.01],凋亡相关蛋白Bax和Cleaved-Caspase3表达量减少,自噬相关蛋白Beclin1和LC3II蛋白表达增加。与SMP处理组比较,CQ抑制细胞活力[(60.01±1.99)%比(79.42±4.23)%,P<0.05],增加细胞凋亡率[(35.63±2.45)%比(20.13±1.65)%,P<0.05],促进Bax、Cleaved-Caspase3和LC3II蛋白表达,抑制Beclin1蛋白表达;Torin1上调细胞活力[(85.63±1.08)%比(79.42±4.23)%,P<0.05],减少细胞凋亡率[(9.78±0.74)%比(20.13±1.65)%,P<0.05],促进LC3-II、Beclin1蛋白表达,抑制Bax、cleaved-Caspase3蛋白表达。结论SMP能促进自噬抑制LPS诱导的心肌细胞凋亡。