二氢杨梅素增强阿霉素对肝癌细胞的抑制作用

目的研究二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)对阿霉素(adriamycin,DOX)在肝癌化疗中的增效作用并研究其可能作用机制。方法不同浓度DMY作用肝癌细胞系MHCC97H后,CCK-8法筛选无毒剂量的DMY,用无毒剂量的DMY联合不同浓度DOX作用MHCC97H细胞,CCK-8法检测细胞活力;Hoschest染色法测定细胞凋亡情况;通过蛋白质印迹法测定PTEN、p-AKT、Bcl-2、Cyt-c、P-gp、裂解的caspase-3和裂解的caspase-9;合成特异性靶向PTEN基因的shRNA慢病毒表达载体,建立稳定沉默PTEN基因的MHCC97H细胞,检测沉默PTEN后是否影响DMY联合DOX对肝癌细胞凋亡的诱导作用;通过裸鼠皮下肿瘤细胞注射法建立MHCC97H裸鼠异种移植模型,观察DMY联合DOX给药对体内肝癌生长的影响,Tunel法测定体内肝癌细胞凋亡,Ki-67和PTEN在移植瘤组织中的表达通过免疫组织化学法测定。结果无毒剂量的DMY与DOX联合应用能显著提高DOX对体外MHCC97H细胞的生长抑制和凋亡诱导作用;DMY联合DOX可上调体外肝癌MHCC97H细胞中PTEN、Cyt-c、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9含量,并下调p-AKT、Bcl-2和P-gp的表达;成功构建沉默PTEN基因的稳定细胞系,沉默PTEN基因可明显抑制DMY对DOX的辅助治疗效果,同时DMY联合DOX对MHCC97H细胞的凋亡诱导途径受到明显抑制。DMY联合DOX给药可抑制体内肝癌生长,有效诱导体内细胞凋亡,同时肿瘤组织中的Ki-67和PTEN表达受到DMY联合DOX的显著下调和上调作用。结论DMY可能通过PTEN/PI3K/AKT途径增强DOX对肝癌细胞的体外杀伤活性。