新型抗真菌抗生素发酵工艺及动力学研究

从浙江省东海土壤中筛选到1株具有抑制白色念珠菌ATCC 64548生长的解淀粉芽孢杆菌091,发现其能产生一种相对分子质量为410的大环内酯类抗真菌物质。在250 mL摇瓶中进行了抗生素发酵的单因素优化实验,实验结果:28℃,pH值6.5,摇床转速200 r/min,接种量(体积分数)8%,装液量40 mL,发酵时间36 h。优化后发酵液抗真菌效价比初始培养条件下提高了2.49倍,达7 026.79 U/mL。进一步采用Logistic,Luedeking-Piret和Lu-edeking-Piret-like方程建立了抗生素产生的动力学模型,并根据5 L发酵罐中的实验数据拟合得到了模型参数。结果表明:该数学模型能反映解淀粉芽胞杆菌091的细胞生长、底物消耗和抗生素合成的动力学机制,可为该抗真菌抗生素的中试生产提供理论指导。

壳聚糖对嘧啶核苷类新型抗真菌抗生素发酵液絮凝除菌作用的研究

利用天然高分子聚合物壳聚糖为絮凝剂去除抗生素发酵液中的菌体,结果表明:发酵液pH值、絮凝剂用量是影响絮凝效果的主要因素。最佳絮凝条件为pH7.0,絮凝剂用量0.4g/L,温度30℃,此时菌体絮凝率(FR%)可达70%以上。经絮凝预处理后,滤速为处理前的2.5倍,发酵液的效价由700 U/mL提高到860 U/mL。

新型抗真菌代谢产物发酵条件的响应面优化

从浙江东海土壤中筛选获得1株菌株(ZS09-33)能产生抑制白色念珠菌的代谢产物,经16SrRNA序列测定和Genbank数据库搜索,确定其属于Bacillus amyloliquefaciens.Plackett-Burman实验发现,影响抗真菌效价的主要因素为:黄豆饼粉、可溶性淀粉以及(NH4)2SO4.最陡爬坡实验和Box-Behnken实验得到响应面(RSM)优化的最佳培养基质量浓度为:黄豆饼粉2.72g/L,可溶性淀粉26.67g/L,(NH4)2SO43.95g/L,K2HPO41.8g/L,NaCl 2g/L,MgSO40.5g/L,CaCO30.72g/L,CuSO40.02g/L,FeSO40.02g/L,MnSO40.02g/L,初始pH 6.5.在此条件下发酵液抗真菌效价达16 806.48U/mL,与模型值相符.与单因素优化结果相比,效价提高了239%.产物经ESI/MS、1 H-NMR及13 C-NMR确定为相对分子质量为402的大环内脂类物质.

新型抗真菌抗生素分离与纯化

对1株不吸水链霉菌(Streptomyces ahygroscopicus ZJUIB001)产生的新型抗真菌抗生素进行分离纯化研究.通过发酵液经离心去沉淀后,采用氯仿和石油醚萃取.萃取后的水相调节至pH 2并采用Dowex 50×16阳离子交换树脂和XAD7HP大孔吸附树脂分离其中的抗真菌代谢物,对分离样品进行反相高效液相色谱分析.Dowex50×16层析条件优化如下:pH=2的萃取浓缩液以2倍床层体积/h的流速上柱,在去离子水冲洗后,用0.6mol/L氨水以1倍床层体积/h流速洗脱;Amberlite XAD7HP大孔吸附树脂层析条件为:体积分数为10%和70%的乙醇水溶液阶跃洗脱.将纯化得到的样品用高效液相色谱(HPLC)系统检测,色谱柱为YMC-C18(5μm,Φ4.6mm×250mm)氰基柱,流动相为0.01mol/L的乙酸铵缓冲液(pH=4.3),流速为1mL/min,检测波长为220nm.HPLC检测结果显示,分离的抗生素纯度和效价分别达到93.0%和21 632U/mg.

SPEC 70 SLS阳离子树脂分离牛乳中乳铁蛋白

建立了乳铁蛋白和乳过氧化物酶的反相液相色谱检测法;并采用SPEC 70 SLS离子交换树脂,研究了一步法分离脱脂牛乳中乳铁蛋白和乳过氧化物酶的工艺条件。高效液相条件:波长220 nm,流速1 mL/min,乙腈体积分数在20 min内从25%增加到75%。SPEC 70 SLS树脂静态吸附条件优化:温度15℃,pH7.0,时间3 h。在此条件下,乳铁蛋白标准品的吸附量(质量比)为22.0 mg/g。乳铁蛋白吸附过程符合Langmuir吸附等温线模型,最大吸附量为21.73 mg/g。在静态脱脂牛乳吸附过程中,乳铁蛋白和乳过氧化物酶的吸附量分别为7.64,6.89 mg/g,优于CM Sepharose FF和SP Sepharose FF。

基因工程技术改造木糖醇生产菌株的研究进展

木糖醇是一种低热量的五碳糖醇,广泛应用于医药、食品和化工等领域。生物合成法相对于化学合成法具有工艺条件温和、能耗低、环境污染小等特点,已成为研究的热点。但由于野生微生物体内具有不同的木糖代谢途径,且木糖还原酶的专一性不强以及转化过程需要辅酶参与等原因,影响了该技术的产业化应用。对生物转化法生产木糖醇的现状及存在的问题进行了分析,展望了采用基因工程技术改造微生物的代谢途径,提高生物催化转化木糖醇的产率的新技术和方法。

植物多糖分离提取技术的研究进展

植物多糖具有提高免疫、抑制肿瘤、延缓衰老和保护肝脏等重要生理作用,多糖的高纯度分离提取是多糖产业中极其关键的环节。本文对植物多糖的分离提取技术研究进展进行了概述,以期为植物多糖的产业化开发提供更有益的指导。对植物多糖的分离纯化工艺的发展趋势进行了展望。