肺炎克雷伯菌的检出率及其耐药

目的了解新华医院近两年来肺炎克雷伯菌的检出率、分布和耐药状况。方法用ATB Expression鉴定仪鉴定菌株,K-B法做体外药敏试验,用双纸片扩散确诊法判定产ESBLs菌株。结果该院肺炎克雷伯菌的检出率较高,在痰液和气道分泌物中多见,对常用抗生素耐药率较高,产ESBLs菌株检出率高达41.4%,对除亚胺培南/西司他丁外其它抗生素与非产ESBLs菌株的比较耐药率差异有显著性(P<0.01)。结论该院肺炎克雷伯菌中产ESBLs菌株的阳性率较高,对常用杭生素的耐药率亦高,应引起临床的广泛重视。

临床常见产AmpC β-内酰胺酶菌株中染色质ampC共同序列的研究

目的分析临床常见AmpC β-内酰胺酶(简称AmpC酶)产酶菌株中染色质ampC的基因序列,从而为AmpC酶的分子生物学检测以及其调控机制研究提供理论依据。方法 57株临床常见AmpC酶产酶菌株分离自医院感染患者样本,抽提细菌染色质DNA,聚合酶链反应(PCR)扩增ampC基因并连接入pMD19-T载体,双链测序后比对同种细菌之间和不同种细菌之间染色质ampC基因的同源性和共同序列。根据共同序列设计引物,进一步利用该引物检测染色质ampC。结果 57株细菌的基因组中,使用PCR扩增出染色质ampC基因41株,并成功测定了其ampC基因的序列。比对后发现大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌和产气肠杆菌的染色质ampC菌种内有很高的同源性,但细菌之间的同源性较低。根据共同序列设计出菌种特异性PCR引物,能够有效的鉴定出染色质ampC基因。结论大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌和产气肠杆菌各自染色质ampC具有高度同源性,其菌种特异性的ampC引物可用来检测其染色质ampC的存在。

急性冠状动脉综合征患者外周血单核细胞核因子-κB活性变化的临床探讨

目的探讨急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者外周血单核细胞核因子-κB(nuclear fac-tor-kappa B,NF-κB)活性的变化及其临床意见。方法分别采用免疫组织化学染色法和夹心酶联免疫吸附法测定54例ACS,42例稳定型冠心病(SCHD)患者及36例对照组的外周血单核细胞NF-κB活性和血浆可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)水平,并分析NF-κB活性与sICAM-1浓度相关性。结果ASC组NF-κB活性和sICAM-1水平显著高于稳定型冠心病组和对照组(P<0.01),而且ACS血NF-κB活性与sICAM-1水平显著正相关。但SCHD组NF-κB活性和sICAM-1水平与对照组比较,差异无显著性意义。结论急性冠状动脉综合征外周血单核细胞核因子-κB活性明显升高,NF-κB是动脉粥样斑块不稳定的标志,并可能通过上调sICAM-1表达而促发ACS。

核糖核苷酸还原酶小亚基M2在多发性骨髓瘤患者中的表达及抑制肿瘤细胞增殖的相关机制

目的:探讨核糖核苷酸还原酶小亚基M2(ribonucleotide reductase M2,RRM2)在多发性骨髓瘤细胞中的表达及抑制肿瘤细胞增殖的相关机制。方法:选取2016年7月至2018年9月在本院初诊的多发性骨髓瘤患者36例为MM组,选取同期纯缺铁性贫血的患者16例作为对照组。应用RT-qPCR、Western blot检测所收集病例中骨髓单个核细胞内RRM2的表达。用siRNAs转染多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226建立RRM2表达缺失的细胞模型,并用CCK8检测细胞的增殖,流式细胞术分析敲低RRM2表达对细胞周期的影响,并应用Western blot分析周期相关调控蛋白的变化。结果:RT-qPCR及Western blot结果显示,多发性骨髓瘤患者样品中的RRM2相对表达水平比对照组明显升高(P<0.05)。进一步分析证明,多发性骨髓瘤患者单个核细胞中RRM2的表达量与临床肿瘤分期、骨质破坏及髓外浸润等关系密切(P<0.05)。在多发性骨髓瘤细胞株内,利用siRNA干扰下调RPMI8226细胞内RRM2蛋白表达,可以明显抑制RPMI8226细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞周期的结果发现,RRM2干扰组细胞周期阻滞于S期(P<0.05);进一步的研究证明,RRM2干扰可以影响细胞周期调控相关蛋白的表达。结论:RRM2在多发性骨髓瘤单个核细胞内呈高表达,且与患者肿瘤恶性程度密切相关。干扰细胞内RRM2表达可通过阻滞细胞周期抑制细胞增殖。RRM2可能成为评估多发性骨髓瘤进展的新指标及药物开发的新靶点。

双硫仑/铜诱导肝癌细胞铁死亡的作用机制

目的 探讨双硫仑/铜(DSF/Cu)诱导肝癌细胞铁死亡的作用机制。方法 采用DSF/Cu 0、0.5、1.0、1.5、2.0和4.0μmol/L处理人肝癌细胞株Huh7,CCK-8法检测细胞活力,激光共聚焦显微镜观察细胞内脂质过氧化物和谷胱甘肽(GSH)水平的变化,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平,Western blot和实时荧光定量PCR检测铁死亡相关基因谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的蛋白和mRNA表达。结果 随着DSF/Cu浓度的升高,细胞活力逐渐降低(P<0.05)。与DSF/Cu 0μmol/L比较,DSF/Cu处理细胞后,脂质过氧化物积累,细胞内ROS水平升高。与DSF/Cu 0μmol/L比较,DSF/Cu 2.0μmol/L能够下调细胞GPX4蛋白和mRNA的表达(P<0.05),降低细胞GSH水平(P<0.05)。铁死亡抑制剂去铁胺能够部分恢复DSF/Cu抑制的细胞活力(P<0.05)。结论 DSF/Cu可抑制肝癌细胞活力,并通过抑制GPX4表达来诱导肝癌细胞发生铁死亡。

耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶编码基因及KPC-ISKpn6连锁检测

目的研究和分析18株耐药肺炎克雷伯菌产β-内酰胺酶基因表达及KPC型阳性菌株与插入序列ISKpn6的关联。方法采用微生物鉴定仪鉴定并通过gyrA、parC基因测序和比对确认了18株肺炎克雷伯菌,对抗菌药物的药敏试验采用K-B纸片扩散法;40种β-内酰胺酶基因和KPC型β-内酰胺酶编码基因与插入序列(KPCISKpn6)连锁检测均采用PCR法,β-内酰胺酶编码基因的亚型通过测序和比对进行确认。结果 18株耐药肺炎克雷伯菌除对四环素、米诺环素的敏感率>83.3%外,对其余抗菌药物的敏感率均<50.0%,有的甚至100.0%耐药;40种β-内酰胺酶基因中共检出TEM-1 17株、CTX-M-3 4株、LAP-2 1株、KPC-2 14株、IMP-4 2株、DHA-1 4株、OXA-1 1株共7种耐药基因亚型,且基因检出与其细菌耐药表型相符合;14株KPC-2型阳性菌株KPC-ISKpn6连锁检测均为阳性。结论耐药肺炎克雷伯菌每一株均有阳性基因检出,且检出的7种耐药基因亚型分布于β-内酰胺酶4个类别中,显示耐药株携带的β-内酰胺酶编码基因多种性;14株携带KPC-2型基因的阳性株其KPC-ISKpn6连锁检测均为阳性,提示KPC-2型β-内酰胺酶编码基因与插入序列ISKpn6高度关联。

葫芦素B对脂多糖诱导小鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的影响

目的了解葫芦素B(CuB)对脂多糖(LPS)诱导小鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的影响及其分子机制。方法将小鼠肺泡巨噬细胞分为对照组、LPS组和LPS+不同浓度CuB组,对照组不作任何处理,LPS组用1μg/m L LPS诱导,另外3组加入不同浓度CuB使浓度分别为1、2.5和5μM,培养2 h后用1μg/m L LPS诱导。采用CCK-8法检测细胞活性,ELISA法检测细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2)水平,Griess Reagent法检测NO浓度,WB法检测i NOS、COX-2、Nrf2和HO-1的蛋白表达水平。结果分组培养24 h后各组细胞活性差异无统计学意义(P>0.05),本实验浓度下的LPS和CuB对细胞无明显毒性。LPS组细胞上清液中细胞因子和NO水平均高于对照组(P<0.05);经CuB处理的LPS组细胞上清液中炎症因子浓度较LPS组明显降低(均P<0.05),并呈剂量依赖性。LPS刺激后,细胞中i NOS、COX-2、Nrf-2和HO-1表达量均增加,CuB可抑制i NOS和COX-2的表达,促进Nrf-2和HO-1的表达。结论 CuB能抑制LPS诱导后巨噬细胞炎症因子的释放,作用机制可能是抑制i NOS和COX-2表达,促进Nrf-2和HO-1表达。