振荡频率对曼氏无针乌贼成体死亡率及生存状态的影响

为提高曼氏无针乌贼增殖放流运输过程的存活率,在实验室条件下研究了0、60、100、120、140和160 r/min振荡频率对成体曼氏无针乌贼死亡率、乳酸、糖原含量及酶活性的影响。结果显示,除160 r/min死亡率略有下降外,其他组随着频率的增高死亡率升高,频率120、140 r/min时死亡率最高为91.7%,显著高于0、60、100 r/min处理组。死亡时间主要分布在振荡后的4~8 h,频率越低乌贼出现死亡的时间越晚,160 r/min率先在2 h出现死亡个体。除个别组出现波动外,随着频率的增大,两种组织(肌肉、肝脏)的糖原含量降低,而乳酸含量增大,140 r/min处理组糖原、乳酸含量与对照组间差异显著。除60 r/min处理组外,随着频率的增加,肝脏组织中的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(GOT)活性降低,超氧化物歧化酶(SOD)活性增加,且120、140、160 r/min处理组3种酶活性与其他组间差异显著。碱性磷酸酶(ALP)活性随着频率的增加而升高,140和160r/min处理组与其他组间差异显著。乌贼死亡率与SOD、肌肉乳酸含量、ALP之间极显著正相关,与肌肉糖原含量、GOT和ALT活性、消化腺糖原含量之间极显著负相关。研究表明,频率显著影响乌贼的存活率,能量耗尽和肝脏损伤可能是乌贼运输过程高死亡率的主要原因,运输过程建议振荡频率小于100 r/min且运输时间小于3 h,尽量避免较大程度的晃动。本研究可为曼氏无针乌贼成体的增殖放流运输过程提供技术支撑。

应用PCR方法检测患“黄水病”锯缘青蟹中的血卵涡鞭虫

"黄水病"是目前锯缘青蟹养殖过程中的主要疾病之一,病蟹主要症状表现为肌肉白浊,体液呈土黄色或浊白色牛奶状。因该病流行范围广、发病率和死亡率高,给青蟹养殖业主造成巨大经济损失,严重地影响了青蟹养殖的健康发展。本研究从病蟹体液中发现大量疑似血卵涡鞭虫的寄生原虫,应用已建立的梭子蟹血卵涡鞭虫病的PCR检测方法对患"黄水病"青蟹进行检测。结果从患病青蟹组织的DNA中扩增出产物大小为585bp的特异性目的片段,经序列分析比较,与三疣梭子蟹上发现的血卵涡鞭虫的序列同源,同源性达99.7%。综合病原流行病学调查、组织病理学、电镜观察等分析结果,初步确定血卵涡鞭虫是引起养殖青蟹"黄水病"的重要病原。

三疣梭子蟹感染血卵涡鞭虫PCR检测方法的建立

血卵涡鞭虫病是近年来三疣梭子蟹养殖过程中发生的一种危害较大的流行性疾病，患病蟹的体液和肌肉组织中有大量的血卵涡鞭虫寄生。该病多发生于每年9～11月份的夏秋季节，会在短时间内出现死亡高峰。因该病流行范围广、死亡率高、危害严重，对三疣梭子蟹养殖业发展影响很大。本文根据GenBank中登陆的血卵涡鞭虫18S rDNA和ITS1基因序列设计了1对特异性引物，建立了血卵涡鞭虫病的PCR检测方法，从感染血卵涡鞭虫的三疣梭子蟹组织DNA中扩增出产物大小为585bp的DNA片段。本方法可快速、特异地检测出三疣梭子蟹感染和携带血卵涡鞭虫的状况，为三疣梭子蟹的健康养殖和血卵涡鞭虫病的流行病学调查提供了快速、简便的手段。

引起三疣梭子蟹“牛奶病”的酵母菌18S rRNA序列测定与分析

"牛奶病"是近年来秋、冬季三疣梭子蟹暂养过程中发生的一种危害较大的流行性疾病,患病蟹的体液和肌肉组织中有大量的酵母菌。根据GenBank中的假丝酵母菌的18S rRNA基因序列设计合成引物,用PCR扩增患"牛奶病"三疣梭子蟹上分离到的酵母菌的部分18S rRNA基因,PCR产物经纯化回收后克隆入pUCm-T载体,筛选出阳性克隆进行测序,测序结果与已发表的序列进行同源性比较,同时以蟹源弧菌和寄生虫的DNA样本为对照。结果,所测序列与GenBank中假丝酵母菌的18S rRNA基因的同源性为84.4%～100%。同时,仅从试验用酵母菌DNA样本中扩增出了532bp左右的特异性片段,其他对照样本均未出现扩增反应。说明本实验建立的检测酵母菌的PCR方法有效。

环介导恒温扩增技术检测血卵涡鞭虫

血卵涡鞭虫病是海水甲壳类的重要寄生虫病,其流行范围广、死亡率高、危害非常严重。本研究根据GenBank中已登录的血卵涡鞭虫(Hematodinium sp.)ITS1序列设计了1套引物,该引物可识别目标基因中6个不同区段。以此套引物建立了一种基于环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的血卵涡鞕虫病诊断方法。特异性试验结果表明,该套引物对血卵涡鞕虫检测具有较高的特异性,能有效检出血卵涡鞕虫。敏感度试验结果表明,该LAMP技术的灵敏度比常规PCR技术高4个数量级。分别运用LAMP和常规PCR技术对25份临床疑似病例进行检测,LAMP方法共检出感染病例25份,常规PCR检出感染病例23份。该技术能在65℃恒温条件下45～60min完成目的DNA的扩增,可直接通过肉眼观察反应产物中是否产生白色沉淀或经SYBRGreenI染色后通过颜色变化、扩增产物的琼脂糖凝胶电泳来定性判断结果,这将为血卵涡鞕虫病的临床诊断提供一种更加简便、快速、实用的方法。

锯缘青蟹黄水病病原研究及综合防控初报

锯缘青蟹简称青蟹，是我国浙江、福建和广东等东南沿海省份的主要养殖品种．因其肉质鲜美，营养丰富，经济价值高而得到持续快速发展，产值达几十亿元。“黄水病”（亦称白水病、白浆病）是目前青蟹养殖发展中的主要疾病之一．其发病范围广、死亡率高，给养殖青蟹造成重大经济损失．严重制约了青蟹养殖的健康发展。该病主要表现为病蟹蟹体消瘦，肌肉白浊．打开蟹盖可见到不同程度的土黄色或浊白色牛奶状液体等症状。

白斑综合征病毒(WSSV)和血卵涡鞕虫多重PCR检测方法的建立

根据对虾白斑综合征病毒(WSSV)和血卵涡鞕虫在GenBank中已发表的基因序列分别设计2对引物,建立了一种同时检测WSSV和血卵涡鞕虫的多重PCR方法,即通过一次PCR反应,同时扩增WSSV和血卵涡鞕虫2种病原的核酸。应用该方法分别对已知WSSV和血卵涡鞕虫阳性的样品进行PCR扩增,分别扩增出了2条特异性带———467 bp(WSSV)和168 bp(血卵涡鞕虫),与实验设计相符,且与常规PCR检测结果一致。特异性实验结果也表明,该方法对WSSV和血卵涡鞕虫的检测均具很好的特异性,而对三疣梭子蟹其它常见病原、梭子蟹DNA样本的PCR扩增结果均为阴性。10份临床样品检测结果表明该检测结果与常规PCR检测结果符合率达到100%,说明所建立的多重PCR方法可以用于三疣梭子蟹2种病原的快速检测和鉴别诊断,对养殖三疣梭子蟹的疾病及时防控具有重要意义。

配合饵料(Compound feed)在三疣梭子蟹Portunus Trituberculatus(Miers)养殖中的应用试验

本文阐述了配合饵料在三疣梭子蟹养殖中的对比试验结果。试验塘放苗量为3.7kg/ha,产量为948.1kg/ha;对照塘放苗量为3.7kg/ha,产量为818.5kg/ha。回捕率试验塘为9.85%,对照塘为7.13%;平均规格试验塘为130g/只,对照塘为155g/只。试验结果显示,在相同的养殖条件下,试验塘的产量和回捕率高于对照塘,而平均规格小于对照塘。

斜带髭鲷网箱养殖技术

斜带髭鲷（Hapalogenys nitens）属于鲈形目、石鲈科、髭鲷属，俗称十八枚、打铁婆，我国沿海均有分布，其肉味鲜美、色彩鲜艳，市价较高，为近海中下层鱼类，栖息于岩礁较多的海区，主要以小型鱼类、甲壳类为食，适温范围为8℃～35℃，最适水温为22℃-28℃，适盐范围为5‰-39‰，最适盐度为26‰～32‰。

海湾扇贝虾塘混养技术

一、海湾扇贝对温度及盐度要求 海湾扇贝属于暖水性种类,但适温范围广,耐温下限在-1℃,上限在34℃,5℃以下停止生长,10℃以下生长缓慢,18～28℃生长较快,海湾扇贝的耐盐度范围在163‰～43‰(即比重1.012～1.033),适宜范围在23%～35‰(即比重1.016～1.027).