加减下瘀血汤对脂质诱导小鼠肾小球足细胞增殖影响的实验研究

目的：观察加减下瘀血汤对脂质诱导小鼠肾足细胞增殖的影响。方法：用不同浓度低密度脂蛋白(LDL)和氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导小鼠肾足细胞增殖,再用不同浓度加减下瘀血汤及强的松龙、缬沙坦的含药血清进行刺激干预,然后用四唑盐(MIT)法检测足细胞增殖。结果：25μml浓度LDL与100μg/ml OX-LDL刺激足细胞增殖达峰值,加减下瘀血汤的高、低剂量,强的松龙的中、高剂量及缬沙坦的中、高剂量含药血清有明显抑制足细胞增殖作用。结论：①LDL和OX-LDL在一定的剂量和时间条件下可以刺激足细胞增殖。②加减下瘀血汤、可抑制脂质诱导的足细胞增殖现象。

青藤碱对肾小管上皮细胞MCP-1和ICAM-1基因表达的影响

目的:探讨青藤碱对体外培养的肾小管上皮细胞单核细胞趋化因子1(MCP-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)mRNA表达的干预作用。方法:体外培养小鼠肾小管上皮细胞株(MCT),分为正常对照组、模型组和干预组。模型组和干预组细胞予以IL-1β(10ng/ml)刺激,干预组细胞同时加不同浓度的青藤碱,继续培养48h,RT-PCR检测细胞MCP-1和ICAM-1 mRMA的表达,Quangtity One 1-D分析软件分析积分光密度,计算MCP-1和ICAM-1电泳条带的积分光密度和GAPDH积分光密度的比值,用SPSS统计软件进行统计分析。结果:IL-1β可显著增强肾小管上皮细胞MCP-1和ICAM-I mRNA的表达,青藤碱各个浓度均能显著下调MCP-1和ICAM-1 mRNA的表达,并呈一定的剂量依赖性。结论:青藤碱能显著下调肾小管上皮细胞MCP-1和ICAM-1的mRNA表达,提示其具有防治肾小管肾间质炎症损伤作用。

抗风湿药青藤碱对UUO小鼠肾间质细胞表型转化的影响

目的:通过抗风湿中药青风藤的提取物青藤碱对单侧榆尿管结扎(UUO)小鼠模型肾间质细胞表型转化的影响,探讨其治肾作用及机理。方法:采用小鼠UUO模型,用不同剂量青藤碱进行干预,用血管紧张素转化酶抑制剂蒙诺作为对照。Masson染色观察肾组织病理及间质纤维化;肾组织中蛋白质表达采用免疫组化和Western-blotting方法检测;基因表达采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法。结果:UUO模型组和青藤碱、蒙诺治疗组小鼠肾间质纤堆化程度以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达和基因表达水平均较假手术组显著增高,而各剂量青藤碱和蒙诺均可显著降低上述指标,并呈剂量依赖性。中、高剂量的青藤碱对于波形蛋白的影响显著优于蒙诺。结论:青藤碱可显著抑制肾小管上皮细胞或间质细胞的表型转化,提示降低肌成纤维细胞的积聚是其防治肾间质纤维化的重要机制之一。

多毛孢菌菌粉含药血清对肾小管上皮细胞增殖及纤维生长因子基因表达的影响

目的 :研究多毛孢菌菌粉不同提取物对肾小管上皮细胞增殖及纤维生长因子 (FGF)mRNA表达的影响。方法 :培养猪肾小管上皮细胞株 (LLCPK) ,用庆大霉素刺激 ,同时加多毛孢菌的不同提取物干预。MTT法检测LLCPK细胞增殖 ;逆转录 -多聚酶链反应 (RT -PCR)测定纤维生长因子mRNA的表达。结果 :研究发现多毛孢菌水提物及醇提物均可显著增高LLCPK细胞OD值 ;庆大霉素刺激的肾小管上皮细胞纤维生长因子mRNA的表达显著增高 ,而经多毛孢菌菌粉水提物和醇提物干预后 ,纤维生长因子mRNA的表达显著下降。结论 :多毛孢菌菌粉可以促进LLCPK细胞增殖和拮抗庆大霉素对细胞的损伤 。

青藤碱对肾小管上皮细胞转分化相关基因表达的影响

目的:探讨青藤碱干预炎症介质诱导的肾小管上皮细胞转分化及其相关基因的表达作用。方法:IL-1β(10ng/ml)诱导体外培养的小鼠肾小管上皮细胞株(MCT),同时用青藤碱(10μmol/L、100μmol/L、500μmol/L和1000μmol/L)进行干预。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别测定细胞平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β(TGF-β)和纤连蛋白(Fn)的基因表达。结果:结果:IL-1β能够显著诱导肾小管上皮细胞α-SMA的基因表达上调,同时伴随着TGF-β和Fn的基因表达显著上调;而青藤碱各个浓度均具有显著抑制肾小管上皮细胞转分化作用,TGF-β和Fn的基因表达也随之下调。结论:青藤碱可显著抑制IL-1β刺激下的肾小管上皮细胞转分化标志物和细胞外基质的基因表达,其机制可能与部分下调TGF-β的表达有关。

复方积雪草含药血清对肾小管上皮细胞表型保护作用的研究

目的:探讨复方积雪草含药血清对炎症介质诱导的肾小管上皮细胞表型转化的干预作用。方法:用IL-1β(10ng/ml)刺激原代小鼠肾小管上皮细胞,并用低、中、高浓度复方积雪草含药血清进行干预。应用MTT法测定复方积雪草含药血清的细胞毒性;Western-blottlng和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别测定细胞α-SMA、Vimentin蛋白和基因表达。结果:IL-1β能够诱导肾小管上皮细胞α-SMA、Vim-entin蛋白质合成增加,基因表达亦显著上调;各个浓度的复方积雪草含药血清干预均可显著降低α-SMA、Vimentin蛋白质、基因的表达。结论:复方积雪草含药血清可抑制免疫炎症因子诱导的肾小管上皮细胞表型转化,从而在防治肾小管间质纤维化中发挥其作用。

葛根素对淋巴细胞P-糖蛋白表达的影响及降低激素耐药的作用

目的:探讨葛根素对淋巴细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响及降低糖皮质激素耐药的作用,为提高糖皮质激素耐药患者的临床疗效提供新的思路和方法。方法:取健康志愿者静脉血10ml,密度梯度离心法分离淋巴细胞,贴壁培养去除单核细胞。予小剂量甲基泼尼松龙(2μg/ml)诱导细胞耐药,用非细胞毒浓度(80μg/ml)的葛根素干预,MTT试验检测激素耐药倍数和葛根素逆转倍数,流式细胞术检测淋巴细胞P-gp和200μg/ml甲基泼尼松龙刺激24h后AnnexinⅤ。结果:小剂量甲基泼尼松龙刺激72h可诱导淋巴细胞P-gp显著升高,甲基泼尼松龙耐药倍数为2.45±0.42。葛根素干预可显著降低耐药细胞P-gp,使甲基泼尼松龙对细胞的半数抑制率IC50显著降低,对激素耐药的逆转倍数为1.55±0.30;葛根素干预可使甲基泼尼松龙诱导细胞的AnnexinⅤ显著增高。葛根素独立干预无显著诱导细胞凋亡作用。结论:葛根素干预可显著降低淋巴细胞糖皮质激素耐药性,显著增强激素诱导淋巴细胞凋亡的作用。葛根素显著下调P-gp表达的作用可能是其降低激素耐药的重要机制之一。

脂质对小鼠肾足细胞增生影响

目的观察脂质对体外培养小鼠肾足细胞增生的影响。方法用不同浓度的低密度脂蛋白(LDL)和氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)对体外培养的小鼠肾足细胞进行不同时间的刺激干预,然后用四唑盐(MTT)法检测足细胞增生。结果LDL刺激足细胞24、48h后,从最低剂量6.25μg/ml组到25μg/ml组呈现剂量依赖性OD值增高(与正常组比较,P<0.01);24h25μg/ml组达到刺激足细胞增生的峰值、48h12.5μg/ml组达到刺激足细胞增生的峰值。OX-LDL刺激24h后,从12.5μg/ml组到100μg/ml组呈现剂量依赖性OD值增高(与正常组比较,P<0.01)。结论脂质LDL和OX-LDL在一定的剂量和时间条件下可以刺激足细胞增生。

MDRD公式法估算成人肾小球滤过率的临床应用

肾小球滤过率（GFR）是判断肾小球滤过功能的重要指标。检测GFR的方法很多，内生肌酐清除率（Ccr）是最常用的检测方法。但有较多因素影响内生肌酐的产生，此外，要求准确留取24小时尿液，临床上很多患者难以做到。因此，急需一种更加简便、快速准确估算GFR的方法．

输尿管结扎对小鼠肾皮质骨架蛋白与炎症因子表达的影响

目的通过对UUO小鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、波形蛋白(vimentin)、炎症介质细胞间粘附分子(intercellular adhesion molecule1,ICAM-1)、单核细胞趋化因子(monocyte chemoattractant protein1,MCP-1)表达的研究,探讨肾间质纤维化机制。方法实验取单侧输尿管结扎(UUO)21天小鼠结扎侧肾组织,肾组织α-SMA、Vi-mentin表达采用免疫组化技术;ICAM-1蛋白质表达采用Western-blotting方法检测;MCP-1基因表达采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法。结果UUO模型组小鼠肾小管间质α-SMA、Vimentin的表达较假手术组显著增高,肾组织中ICAM-1蛋白表达、MCP-1基因表达亦较假手术组显著增高。结论输尿管结扎21天可诱导肾小管间质肌成纤维细胞的大量积聚,可能与肾组织炎症因子的高度表达相关。