汉坦病毒G2糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其在免疫诊断中的应用

目的构建汉坦病毒(HV)Z10株包膜糖蛋白G2基因的重组表达载体,探索其在昆虫细胞中的表达及在免疫荧光诊断中的应用。方法以质粒pUCmZ10M为模板设计引物,用聚合酶链反应(PCR)扩增Z10株G2基因片段,将G2片段克隆入pUCmT质粒载体,碱法提取质粒pUCmZ10G2,酶切后将回收片段插入杆状病毒转移载体pFastBacHTa,构建重组体pFastBacHTaZ10G2,重组体转化感受态细胞E.coliDH10Bac后,经2轮筛选,提取重组质粒转染昆虫细胞sf9,并用间接免疫荧光技术检测表达的G2蛋白。结果获得含有编码HVZ10株的包膜糖蛋白G2基因的重组质粒,转染昆虫细胞表达出G2蛋白,与肾综合征出血热(HFRS)阳性血清反应,昆虫细胞内呈现特异性环状荧光。检测40份HFRS血清,与全病毒细胞抗原片的符合率为95%。结论成功构建HVZ10株包膜糖蛋白G2基因的表达载体,并在昆虫细胞中表达。可利用重组G2蛋白检测HV感染。

原位肝移植大鼠肠道微生态状况研究

目的探讨肝移植术后大鼠肠道微生态的变化。方法将雄性Brown-Norway（BN）大鼠40只随机分成肝移植组（BN-BN，n=16，共8对）、模拟移植组（n=8）、假手术组（n=8）和对照组（n=8），24h后处死，分析肠道菌群构成、回肠末端超微结构变化、血浆内毒素水平以及细菌易位至肝、脾、肾和肠系膜淋巴结的比例。结果肝移植术后24h存在明显的肠道菌群紊乱，表现为肠杆菌科细菌和肠球菌数量增加（P〈0．05），乳杆菌和双歧杆菌数量下降（P〈0、05），移植组与模拟移植组存在肠黏膜上皮细胞微绒毛的损伤；肝移植组血浆内毒素水平升高（P〈0．01），细菌易位至肝脏、脾脏和肠系膜淋巴结的阳性率增加（P值均〈0、05）；与模拟移植组比较，肝移植组细菌易位至肝脏的阳性率增加（P〈0．05）。结论肝移植术后存在一定程度的肠道微生态紊乱和肠道屏障功能损伤，可能与肝移植手术过程中所经历的缺血再灌注过程有关。