正确获取冷凝集标本血常规检验参数的方案探讨

目的:血常规标本出现冷凝集可引起检测中多个参数的结果异常,目前的解决方案包括手工计数、温浴后即刻检测、血浆置换等。但各种方案标准不一,其实际纠正效果很多时候并不理想,本文拟对目前各种纠正方案进行统一评价,探讨一种针对冷凝集血常规标本简单易行、纠正效果确切的凝集现象消除方案。

问号钩端螺旋体GGDEF和EAL/HD-GYP结构域蛋白生物信息学分析

目的分析问号钩端螺旋体(钩体)环二鸟苷酸(Cyclic dimeric-GMP,c-di-GMP)调节相关的GGDEF和EAL/HD-GYP结构域蛋白生物信息学结果,为后续的功能研究奠定基础。方法 PSI-BLAST方法分析编码GGDEF和EAL/HDGYP结构域蛋白的基因;利用相应生物信息学软件对蛋白信号肽序列、跨膜序列、蛋白结构、同源性进行分析并构建目的蛋白进化树。结果问号钩体中22个蛋白分别含有GGDEF或EAL/HD-GYP结构域,多数蛋白均有感受器结构域和跨膜区。7个具有PAS输入感受器的GGDEF结构域蛋白进化较为独立,位于单独的一个分支,其余6个GGDEF结构域蛋白则分散在不同的分支上。4个EAL结构域蛋白和2个HD-GYP结构域蛋白进化上也较为独立,分别处于同一进化分支。3个GGDEF和EAL结构域耦合的蛋白在进化关系上更趋向于PDE活性蛋白。结论钩体具有多拷贝的合成和降解c-di-GMP相关蛋白编码基因,表明在钩体中c-di-GMP网络具有高度复杂性,同时反映出钩体对环境条件的改变具有复杂的应对机制。

培美曲塞联合顺铂化疗对晚期非小细胞肺癌(腺癌)患者外周血T细胞亚群及NK细胞的影响

目的探讨培美曲塞联合顺铂化疗对晚期非小细胞肺癌患者细胞免疫功能的影响及其临床意义。方法对经细胞或组织病理学确诊的40例晚期非小细胞肺癌(腺癌)患者给予培美曲塞500mg/m^2,dl静脉滴注,顺铂25mg/m^2,d1～d3静脉滴注,21d为1周期,共治疗2个周期。采集正常健康者与患者治疗前后外周血标本,应用流式细胞仪检测CD^(3+)、CD^(4+)、CD^(8+)T细胞和NK细胞的表达水平。结果与正常健康者相比,晚期非小细胞肺癌(腺癌)患者化疗前后CD^(3+)、CD^(4+)T细胞、CD^(4+)/CD^(8+)比值和NK细胞水平下降,CD^(8+)T细胞水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与化疗前相比,化疗后CD^(3+)、CD^(4+)T细胞、CD^(4+)/CD^(8+)比值和NK细胞水平升高,CD^(8+)T细胞水平下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论培美曲塞联合顺铂化疗能增强晚期非小细胞肺癌(腺癌)患者的细胞免疫功能,可以将细胞免疫功能作为一项判断患者预后的指标。

红花注射液对野百合碱损伤血管内皮细胞NO活性、内皮型NO合成酶及结缔组织生长因子表达的影响

目的探讨红花注射液对野百合碱(MCT)损伤的血管内皮细胞一氧化氮(NO)产生、内皮型NO合成酶(e NOS及结缔组织生长因子(CTGF)表达及活性的影响。方法人血管内皮细胞(HUVECs)分为空白对照组、MCT组、红花注射液组。以CCK-8法检测红花注射液对HUVECs增殖的抑制作用,硝酸还原酶法检测NO含量,荧光定量PCR和Western blot法检测e NOS和CTGF的mRNA和蛋白表达情况。结果红花注射液有效抑制HUVECs增殖,呈浓度依赖性。与空白对照组相比,MCT组e NOS表达降低,NO生成降低(均P<0.05),而CTGF表达增加(P<0.05);与MCT组比较,红花注射液组e NOS活性及NO的生成均增加(均P<0.05),而CTGF表达降低(P<0.05)。结论红花注射液可促进MCT损伤的血管内皮细胞e NOS活性增加及NO产生,抑制CTGF的表达和分泌。

血清总胆汁酸检测在孕妇肝内胆汁淤积症诊断中的应用价值

目的:孕妇肝内胆汁淤积症是现在临床上比较多见的一种疾病,据不完全统计,该病的发病率已经快要和妊娠期黄疸的发病率持平,严重影响了产妇的生命健康,给产妇及其家属带来极大的精神和经济压力。就目前我国医疗水平发展的现状来看,该病的发病原因尚不是很清楚,有学者认为,该病的发病原因可能与非遗传因素与遗传因素有关,大多数产妇通常情况下都是在妊娠的中晚期才会出现。该病的主要临床表现为皮肤出现不同程度的瘙痒,并且伴有生化指标的变化,例如肝酶、胆汁酸等水平升高。一般情况下该病发病后采取及时的措施进行治疗,可以得到良好的预后,不会对产妇的身体造成很大的影响,但是会对胎儿造成一定的影响,严重的还有可能会导致胎儿出现早产、新生儿窘迫、甚至是死亡等。

问号钩端螺旋体T和B细胞表位联合基因的原核表达及其产物免疫性分析

目的构建问号钩端螺旋仆（简称钩体）Lipl32、OmpI．1和Lipl21蛋门的优势T-和B-细胞联合表位融合基阂及其原核表达系统，并对表达产物的免疫原性进行鉴定。方法人工合成多表位联合綦冈并构建其原核表达系统。采朋SDS-PAGE榆测雨组蛋白；采用MAT检测重组蛋白兔抗恤清呵我旧钩体标准参考株的凝集效价；Westernblot和ELISA检测重组蛋白的免疫原性。结果扶得了多表化融合基陶斤构建了原核表达系统。表达广：物的相对分子质鞋约为23X10^3，n主要以可溶性形式存在；重组蛋白兔抗血清免疫双扩散效价为1：8，该抗血清能‘丁我同15群的钩体标准参考株发，Ii凝集反应，ELISA证明该重组蛋白能检测不问群刑钩休感染患者血清中的抗钩体抗体。结论成功构建了包含钩体LipI32、OmpLI和Lipl21蛋白的优势T和B细胞联合表位基冈及其原核表达系统，表达产：物县有良好的抗原性和交义免疫反应性，可作为研制通用割问号钩体基因工程疫苗及血清学检测的抗原。

环介导的等温扩增与实时荧光PCR检测问号钩端螺旋体的比较

目的通过比较环介导的等温扩增技术（loop—mediatedisothermalamplification，LAMP）与实时荧光PCR（real．timePCR）技术在检测问号钩端螺旋体的特异性及灵敏度方面的差异，寻找一种快速、灵敏且特异性强的问号钩端螺旋体检测方法。方法根据问号钩端螺旋体liplAl基因序列设计LAMP及实时荧光PCR扩增所用的特异性引物，对我国15群15株问号钩端螺旋体参考菌株进行检测，比较二者在检测的特异性和灵敏度方面的差异。结果LAMP反应大约可在30min内完成，整个分析过程不超过1h。Real-timePCR的整个过程大约需要60min。二者具有相同的检测灵敏度和特异性，最低检出限度均为100个拷贝，整个检测过程没有出现假阳性。结论在检测速度、灵敏度和特异性方面，LAMP技术与real—timePCR技术相当，但LAMP检测技术是在恒温条件下进行，不需要特别昂贵的仪器设备，检测方法简单，在基层实验室及现场检测方面具有明显的优势，是可应用于问号钩端螺旋体检测的一种有效技术。