SCAR分子标记技术在香菇菌株鉴定上的应用研究

为了建立一套基于DNA分子标记技术快速鉴定香菇菌株的有效方法,本研究首先通过对生产上常用的14个香菇菌株进行RAPD多态性分析,从香菇菌株162中扩增获得了一个片段长为1166bp的特异RAPD标记XG1166,随之利用分子克隆技术将该特异RAPD标记成功转化为稳定的SCAR标记。用同样的方法,本研究又从另一香菇菌株申香10号中获得了一段长度为347bp的特异SCAR标记SX347。试验结果表明,利用本研究获得的香菇菌株162和申香10号的特异SCAR标记,能在一天时间内准确鉴定出香菇菌株162或申香10号菌株的真伪。由此可见,SCAR分子标记是一种快速、稳定、准确鉴定香菇菌株的新方法, 可应用于食用菌种质资源保护利用、品种分类与鉴定和假种辨别。

我国食用菌育种技术应用研究现状与展望

综述了食用菌人工选择育种、杂交育种、辐射诱变育种、原生质体融合和基因工程育种技术的应用研究现状和进展,指出应在系统考查种质资源的基础上,重点开展杂交育种等常规育种技术与DNA分子标记辅助选择等基因工程育种技术相结合的研究。

DNA分子标记技术在食用菌研究中的应用及进展

根据近年来国内外的文献报道,对DNA分子标记技术在食用菌遗传育种、菌种和菌株鉴定、遗传多样性分析、基因定位和克隆等研究中的应用及进展进行了综述和分析。认为随着分子生物学技术的进一步发展,将有更多、更有效的分子标记在食用菌研究中得以应用,同时随着分子标记技术应用的深入,更高密度、更为实用有效的遗传连锁图谱将被建立,大量重要的功能基因将被定位和克隆,这将为进一步培育高产、优质、抗病、耐贮等食用菌新品种奠定良好的基础。

四个红菇科菌株的rDNA ITS序列分析和系统发育研究

以采自浙江省丽水山区的4个红菇科菌株作为研究材料,进行rDNAITS(Internal Transcribed Spacer)区段克隆测序和序列特征比较分析,并对ITS序列进行核酸序列数据库GenBank同源性检索比对,将从GenBank检索获得的15个最相似物种的ITS序列连同4个红菇科菌株的ITS序列一起用于系统发育分析。序列比较结果表明,4个红菇科菌株的rDNAITS序列长度为673bp^766bp,GC含量为47.4%~49.48%,其中2个红菇属(Russula)菌株R32和R57间的ITS序列长度和GC含量差异极小,而与血红乳菇(Lactarius sanguifluus)菌株L37间的ITS序列长度和GC含量差异较大。系统发育分析表明,R57为花盖红菇(R.cyanoxantha)的一个菌株,红菇属的赭盖红菇(R.mustelina)、绿菇(R.virescens)和青灰红菇(R.parazurea)三者间的序列差异较小,亲缘关系较近;乳菇属(Lactarius)的血红乳菇同鲑色乳菇(L.salmonicolor)种间的序列差异较小,亲缘关系较近。

分心木酸性多糖SJP-2的理化性质及其抗氧化活性研究

以分心木为原料进行热水浸提,经过醇沉、脱色素、脱蛋白以及DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱色谱和Sephadex-G50凝胶柱色谱分离纯化得到一种酸性多糖组分（SJP-2）,再对该组分进行理化性质及抗氧化活性分析。结果表明：SJP-2不含蛋白,是一个低分散度,分子量较为均一的多糖,分子量为3.239×10^3g/mol;HPLC分析得知SJP-2为一种酸性多糖,其单糖组成及摩尔比例为阿拉伯糖∶半乳糖∶葡萄糖∶半乳糖醛酸=1∶2.62∶4.45∶18.53;抗氧化活性测得SJP-2清除DPPH自由基、羟自由基以及ABTS自由基的IC50分别为0.094、0.945、0.591 mg/m L,还原能力在1.0 mg/m L时达到1.158,ORAC值为（1217.99±31.22）μmol TE/g,说明SJP-2具有较高的体外抗氧化能力。

桑黄中β-葡聚糖快速荧光光谱检测方法研究

建立了以海带多糖为标准样品,与苯胺蓝特异结合,荧光光谱法测定桑黄多糖中β-D-葡聚糖含量的准确、经济、快速的检测方法.对96孔板、标准样品、回收率、精密度及稳定性进行考察.结果表明：在激发波长为398 nm,发射波长为503 nm测试条件下,海带多糖质量浓度在0～15μg/mL范围内与荧光强度呈现良好的线性关系,桑黄粗多糖中β-D-葡聚糖含量测定结果为19.86％,平均回收率为98.39％.并对市售酵母葡聚糖粉中β-葡聚糖含量进行了测定,质量分数为82.29％,与产品标识含量相符.

新型中国被毛孢胞内多糖HSIPS2链构象及抗氧化活性研究

以发酵得到的中国被毛孢菌丝体为原料进行热水浸提,经过醇沉、脱蛋白、脱色素以及DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱色谱和Sephacryl S-100凝胶柱色谱得到均一性多糖组分(HSIPS2),并对该组分进行链构象及抗氧化活性分析。结果表明:HSIPS2的单糖组成及摩尔比例为葡萄糖∶半乳糖∶甘露糖∶核糖=48.52∶6.58∶5.17∶1.0,其绝对分子量为1.46×10~4 g/mol,纯度为99.82%;该多糖在0.1 mol/L的Na NO3溶液中呈柔顺链构象,流体力学半径R_h=2.3 nm,M_L=334.05 nm^(-1),q=0.70 nm,d=0.69 nm;同时,HSIPS2清除羟自由基的IC_(50)为0.749 mg/m L,氧自由基吸收能力(ORAC值)为872.80μmol TE/g,说明HSIPS2具有较高的抗氧化能力。

浙江丽水地区外生菌根菌资源调查初报

通过野外调查采集、分离培养并经鉴定,共获得大型真菌56种,隶属14科,26属,其中外生菌根真菌38种,并且分离获得了14种外生菌根真菌的纯培养。这些外生菌根真菌主要隶属牛肝菌科(Boletaceae)、红菇科(Russulaceae)和鹅膏菌科(Amanitaceae),大多发生在海拔500米以上的松林、针阔混交林或常绿阔叶林地,主要与赤松(Pinus.densiflora)、马尾松(Pinus.massoni-ana)、黄山松(Pinus.taiwanensis)等松属(Pinus)树种以及落叶松(Larix)、云杉(Picea)、冷杉(Abies)、油杉(Keteleeria.cyclolepisFous)、栎(Quercus)属等树种共生。

黄靛牛肝菌子实体营养成分分析评价

测定了黄靛牛肝菌子实体的氨基酸、矿质元素以及维生素等主要营养成分含量,并与香菇和双孢蘑菇的营养成分进行了比较。结果表明,黄靛牛肝菌子实体富含蛋白质、多种维生素和矿物质,并含有18种游离氨基酸,其中包括人体必需的8种氨基酸,其铅、镉。

我国食用菌种质资源现状及其发展趋势

对近年来我国食用菌种质资源调查现状和存在问题进行了分析总结,提出了要加大食用菌种质资源调查与保藏的科研投入,加强食用菌种质资源的鉴定评价、创新与利用研究,尽早确定国家知识产权战略,防止食用菌种质资源流失等发展对策。

香菇SRAP扩增体系的建立与优化

为了建立稳定的香菇(Lentinula edodes)SRAP(sequence-related amplified polymorphis m,相关序列扩增多态性)分子标记技术体系,以香菇(Lentinula edodes)为材料,采用SDS-CTAB(sodium dodecyl sulfate-cetylri methylammoniumbromide)法提取菌丝体基因组DNA,用琼脂糖检测扩增产物,筛选优化了SRAP扩增条件。可用于香菇SRAP分析的最佳PCR条件为20μL PCR反应体系中,模板DNA25ng,Buffer l×,Mg2+2.5mmol/L,dNTP Mixture0.2mmol/L,引物0.4μmol/L,Taq DNA聚合酶1.5U。优化后的SRAP体系目标条带增多,重现性好。

灵芝不同生长发育期粗多糖和三萜含量变化规律

检测分析了3种灵芝(Ganoderma lucidum,G.capense,G.tsugae)11个菌株不同生长发育期的子实体粗多糖和三萜含量变化情况。结果表明,大部分供试灵芝菌株不同生长发育期的子实体粗多糖和三萜含量均存在显著或极显著差异,其中粗多糖含量多为现蕾期时最高,芝盖形成期有所降低,成熟期又有所增加,衰老期又大幅度降低;而子实体三萜含量则在现蕾期、芝盖形成期和成熟期均较高,于衰老期显著或极显著地降低。

缘盖牛肝菌纯培养菌种的RAPD和ITS分子标记鉴定

以浙江省庆元县的缘盖牛肝菌[Boletus appendiculatus(Sehaeff:Fr.)Secretan]子实体及其组织分离菌种作为研究材料,运用RAPD分子标记和ITS序列测定二种技术手段来鉴定该组织分离菌种是否为缘盖牛肝菌的真正纯培养菌种。RAPD分析结果表明,缘盖牛肝菌子实体与其组织分离菌种在0.92的Dice相似系数水平上聚为一类。ITS序列分析结果表明,二者的ITS序列在长度和碱基排列上完全一致。二种技术手段的分析、测定结果相互支持,证明缘盖牛肝菌的组织分离菌种为其真正的纯培养菌种。本研究结果同时表明,RAPD指纹分析结合ITS序列测定是鉴定外生菌根菌纯培养菌种真伪的一种高效可行的方法。

不同中药水提物对蝉拟青霉液体深层发酵和产物活性的影响

通过分别向培养基中添加不同的中药水提物进行蝉拟青霉液体发酵培养,探究其对蝉拟青霉发酵过程中生物量、胞外和胞内多糖的产量及其产物活性的影响。结果表明,黄芪、薏苡仁、枸杞的水提物分别对蝉拟青霉生物量、胞外和胞内多糖的合成促进效果最为显著(p<0.05),分别较对照实验提高了135.82%、48.90%、137.18%;而金银花和山楂水提物不利于蝉拟青霉的发酵培养;对于产物活性,结果显示枸杞水提物能同时显著(p<0.05)提高蝉拟青霉胞外和胞内多糖对DPPH自由基的清除能力,分别为对照实验的1.17倍和1.38倍。综合比较上述结果,枸杞水提物是蝉拟青霉液体发酵的最适中药成分,其最佳添加量为10g/L。

早竹TB1同源基因的克隆和表达分析

竹笋的形成和生长发育过程涉及侧枝形态发生,探讨侧枝发育有关基因在竹笋发育过程中的作用,对于阐明竹笋发育基因调控机制有重要意义。利用禾本科TB1同源基因在序列上的保守性,在基因上游的非编码区设计简并引物,通过RT-PCR技术,从早竹笋中克隆到一个1296bp的cDNA序列,该序列包含1个编码349个氨基酸的阅读框,在氨基酸水平上与玉米TB1相似性达64.7%,定名为PpTB1。序列分析比对表明,PpTB1基因的编码产物含有保守的SP区、TCP区和R区,属于基因家族的1个成员。进化分析进一步表明,竹子TB1相似基因是玉米TB1基因的同源基因,且竹子TB1同源基因的分歧时间介于水稻和现有其他TB1同源基因之间。RT-PCR分析表明,该基因在笋、叶片和花中均有表达。原位杂交分析表明,PpTB1在笋的侧芽中表达较多。研究表明,PpTB1很可能与禾本科其他植物的TB1同源基因相似,在竹笋发育过程中,参与侧枝的形成。另外,TB1同源基因也可能在竹子分类和进化研究上有重要价值。

红曲菌株鉴别中SCAR分子标记的应用

目的:建立一套基于DNA遗传标记技术的红曲菌株快速鉴定方法。方法:采用RAPD方法对分离收集的10个红曲菌株进行多态性分析,从菌株F中获得1个421 bp的特异RAPD标记片段F421。Blast分析未发现F421序列(GenBank登录号EF063107)与GenBank中相关序列有较高同源性。根据该序列设计特意引物,对10个红曲菌株进行PCR检测。结果:利用所获得的特征性片段扩增区域(SCAR)标记能能在1 d内准确地鉴别出红曲F菌株。结论:利用SCAR分子标记技术对红曲菌株进行分类鉴别是红曲研究领域的新尝试,为推广应用SCAR分子标记技术对药用真菌进行菌株快速准确鉴定提供技术依据。

响应面优化黄色蚕茧超声辅助酶法脱胶工艺

对黄色蚕茧超声辅助酶法脱胶工艺进行研究。在单因素实验的基础上,选择对蚕茧脱胶率有显著影响的3个因素:pH(X1)、酶加量(X2)、超声功率(X3),进行三因素三水平的响应面分析实验。最终确定最优条件为:pH5.5、酶加量5.5%(E/S)、超声功率390W、超声处理时间35min、温度60℃、料液比1∶30(m/v)。并且该最佳条件下脱胶率(37.62±0.34%)和脱下的丝胶蛋白DPPH自由基清除率(IC502.41±0.078mg/mL)、类胡萝卜素含量(0.34±0.038mg/g)和黄酮含量(0.59±0.062mg/g)均高于水浴煮沸脱胶和酶法脱胶,进一步表明了超声辅助酶法脱胶的优越性。