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题名花鲈免疫球蛋白的分离纯化及部分特性分析
被引量:6
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作者
许娜娜
钱冬
赵海泉
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机构
安徽农业大学生命科学学院
浙江省淡水水产研究所鱼病室
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出处
《中国水产科学》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期103-109,共7页
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基金
宁波市重大科研项目(2007C10037)
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文摘
分离纯化了花鲈(Lateolabrax japonicus)血清免疫球蛋白(Ig),并对其特性进行初步研究与分析。采用山羊-IgG(Goat-IgG)免疫花鲈并制备血清,分别采用硫酸铵分级沉淀法、A蛋白亲和层析法及Goat-IgG偶联亲和层析法提取花鲈Ig,对提取组份进行了蛋白浓度测定、间接ELISA效价测定、SDS-PAGE和Western-blotting分析。结果表明,采用硫酸铵分级沉淀法提取的花鲈Ig主要集中在硫酸铵饱和度为30%-50%的区间,其中45%饱和度硫酸铵富集的的抗体比活最高,ELISA效价为2×10^4/mg蛋白,比血清ELISA效价提高2.2倍;A蛋白柱亲和层析可得单一蛋白峰,洗脱峰集中在洗脱体积0.8-1.6 mL处,占洗脱蛋白总量的76.2%,峰值的ELISA效价为1.37×10^5/mg蛋白,抗体得率为2.57%;Goat-IgG偶联Sephrose 4B亲和柱层析也可得单一蛋白峰,洗脱峰集中在洗脱体积1.4-2.8 mL处,占洗脱蛋白总量的72.4%,峰值的ELISA效价为1.39×10^5/mg蛋白,抗体得率为2.63%。以上3种提取方法均可得到79 kD的重链和29 kD轻链,表明可得到纯化的免疫球蛋白;采用鼠抗花鲈Ig血清和单抗AA5经Western-blotting证实提取成份为花鲈Ig。本研究表明,A蛋白柱和Goat-IgG偶联柱亲和层析均可用于花鲈Ig的提取,其中A蛋白柱法获得的洗脱峰值更为集中,抗体效价高,且提取过程不需要Goat-IgG免疫鱼体,是一种更为有效的免疫球蛋白提取方法。
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关键词
花鲈
免疫球蛋白
纯化
亲和层析
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Keywords
Lateolabrax japonicus
immunoglobulin
purification
affinity chromatography
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分类号
S942
[农业科学—水产养殖]
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