脂肪间质干细胞抑制肝星状细胞增殖活化及肝脏纤维化

目的 探讨脂肪间质干细胞（adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADSCs）对活化态肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）增殖、活化的影响及其对活体肝硬化模型的治疗作用.方法 分别分离纯化培养HSCs及ADSCs,通过半透膜（transwell insert）建立HSCs与ADSCs的双层培养体系,大鼠正常肝细胞系（（buffalo rat liver cells,BRLs）培养作为对照.通过CCK-8比色法检测ADSCs对HSCs增殖的影响；Western blot检测HSCs的α-肌动蛋白（α-SMA）表达；建立鼠肝硬化模型,经门静脉输注ADSCs或BRLs,检测肝组织肝硬化；通过检测培养液中细胞因子的含量探讨可能的作用机制.结果 成功分离获得原代HSCs与ADSCs,活化的HSCs与ADSCs共培养72 h,与对照组相比,ADSCs明显抑制HSCs的活化（各组灰度值分别为1.4±0.2,152±14,258±18,F=283.348,P＜0.05）与增殖（各组吸光度A值分别为2.172±0.107,1.424±0.013,1.209±0.117,F=90.605,P ＜0.05）,活体移植显示ADSCs对肝硬化具有明显抑制作用（分别F=77.234、65.164、58.309,均P ＜0.05）.培养液细胞因子检测显示ADSCs比BRLs分泌更多的肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）（F=0.005,P＜0.05）,分泌较少的转化生长因子（transforming growth factor-β,TGF-β1）（F=1.767,P＜0.01）及神经生长因子（nerve growth factor,NGF）（F=2.301,P＜0.05）. 结论 ADSCs具有分泌细胞因子抑制HSCs活化增殖的潜能,对活体肝硬化进程具有一定的抑制作用.

脂肪特异性蛋白27基因抑制大鼠肝星状细胞增殖活化

目的探讨脂肪特异性蛋白27（Fsp27）基因对活化态肝星状细胞（HSCs）增殖、活化的影响及其对纤维化相关基因的调节作用。方法提取HSCs并培养。用实时定量PCR技术检测原代HSCs及活化HSCs中的Fsp27基因表达。构建携带Fsp27目的基因的慢病毒，转染活化的HSCs并继续培养72h。通过CCK-8比色法检测Fsp27基因对HSCs增殖的影响。Western blot检测HSCs α-肌动蛋白（α—SMA）的表达，了解HSCs的活化状态。实时定量PCR技术研究Fsp27基因对HSCs纤维化相关基因表达的影响。结果成功分离原代HSCs，Fsp27基因在原代HSCs及活化HSCs中表达差异显著（P〈0．01）。活化HSCs成功转染携带Fsp27目的基因的慢病毒后继续培养72h，与对照组比较，HSCs的活化与增殖受到明显抑制（P〈0．05）；Fsp27基因促进MMP-2的表达（P〈0．05），降低了TIMP-1及TGF-β1的表达（P〈0．05）。结论Fsp27基因具有抑制HSCs活化增殖的潜能，Fsp27基因可调节纤维化相关基因的表达。Fsp27基因的作用可能与维持HSCs静息状态细胞表型有关。