重叠延伸聚合酶链反应法克隆人REGⅠα基因

目的采用重叠延伸PCR技术克隆人BEGⅠα基因，以便研究其在幽门螺杆菌感染促胃炎以及胃癌转化的病理过程中的作用。方法设计人BEGⅠα基因2．6号外显子OE-PCR引物，分段扩增各外显子DNA片断，通过重叠延伸PcR法将各外显子逐一连接，获得全长REGⅠα基因eDNA，并构建REGⅠα真核表达载体。结果扩增REGⅠα基因Exort2—6号外显子获得的产物长度分别为64bp、119bp、138bp、112bp和68bp；分别连接获得Exon2～3连接产物长度为183bp，Exon4～6连接产物318bp；获得全长BEGIa基因eDNA长度为501bp。所获扩增产物序列与预期设计相符。插入到真核载体pcDNA3．1的片断大小符合预期设计，测序结果与NCBI数据库100％相符（NM-（D2909．4）。结论成功克隆人BEG工a基因cDNA，并构建真核表达载体，有助于为REG工a基因参与胃癌发生的机制研究提供实验材料。