蛋白指纹图谱技术诊断胎儿神经管缺陷的初步研究

目的:探讨表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术在胎儿神经管缺陷(NTD)产前诊断中的应用。方法:取神经管缺陷胎儿的孕妇羊水8例作为NTD组,取正常胎儿的孕妇羊水16例作为对照组,分别进行蛋白质谱分析,确定两组间蛋白峰值的差异。结果:24份羊水检测质谱图,共有96个蛋白质峰,通过统计分析,发现有5个不同质荷比蛋白质在两组的相对含量有明显差异。质荷分别为3484、8126、15112、16139和30891。结论:神经管缺陷胎儿孕妇的羊水中存在差异蛋白质的变化,这一组蛋白质谱图的特征变化具有疾病提示意义,可用于胎儿产前诊断。

单纯性侧脑室扩张胎儿产前MRI检查诊断的临床价值及出生后随访

目的探讨单纯性侧脑室扩张胎儿的产前MRI检查诊断的价值，随访其出生后神经系统发育状况。方法收集2013年5月至2015年6月在浙江省湖州市妇幼保健院，经产前MRI检查诊断为单纯性侧脑室扩张且活产无异常的胎儿126例为扩张组，并纳入同期50例正常胎儿为对照组。扩张组胎儿的亚组分析：（1）单侧或双侧侧脑室扩张：单侧侧脑室扩张组98例（77．8％，98／126），双侧侧脑室扩张组28例（22．2％，28／126）。（2）侧脑室扩张宽度：宽度〉10．0mm，双侧均扩张者，取扩张较重一侧的宽度，分为3个亚组，分别为扩张A组（侧脑室宽度为10．0～12．0mm）88例（69．8％，88／126）、扩张B组（侧脑室宽度为12．1—15．0mm）29例（23．0％，29／126）、扩张C组（侧脑室宽度〉15．0mm）9例（7．1％，9／126）。全部176例胎儿出生后，分别于3、6、12、18个月定期随访（早产儿校正月龄后随访），并采用Gesell发育量表（GDS）评估中枢神经系统的功能，以比较其出生后的神经系统发育状况。结果（1）扩张组胎儿出生后MRI复查结果：扩张组胎儿有2l例出生后复查MRI。扩张A组复查11例，其中9例正常（出生后MRI复查示，侧脑室宽度〈10．0mm），2例稳定（出生后侧脑室宽度仍≥10．0mm，且首次MRI测量的侧脑室宽度与出生后MRI测量的宽度变化≤2．0mm）；扩张B组复查4例，其中1例正常，2例缩小（出生后侧脑室宽度仍1〉10．0mm，且出生后MRI测量的宽度较首次MRI测量的侧脑室宽度缩／Ix〉2．0mm），1例稳定；扩张C组复查6例，其中3例缩小，3例稳定。（2）总体的GDS评价结果：扩张组胎儿m生后3、6、12、18个月的GDS评价结果分别与对照组比较，差异均无统计学意义（P均〉0．05）。（3）亚组的GDS评价结果比较：扩张A组胎儿出生后3、6、12、18个月的GDS评价结果分别与对照组比较，差异均无统计学意义（P均〉0．05）。扩张B组胎儿出生后3、6个月的GDS评价结果较对照组均较差（P均〈0．05）；12、18个月的GDS评价结果分别与对照组比较，差异均无统计学意义（P均〉0．05）。扩张C组胎儿出生后3、6、12、18个月的GDS评价结果与对照组分别比较，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。（4）扩张组胎儿出生后不同时间点的总体GDS评价结果比较：扩张组胎儿出生后3个月的GDS评价结果，与6个月的比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；与12、18个月的结果分别比较，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。出生后6个月的GDS评价结果与12、18个月的比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。生后12个月的GDS评价结果与18个月的比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。（5）单侧侧脑室扩张与双侧侧脑室扩张胎儿的GDS评价结果比较：出生后18个月，98例单侧侧脑室扩张者中，GDS评分正常（〉85分）86例（87．8％，86／98），GDS评分临界（75～85分）8例（8．2％，8／98），落后（〈75分）4例（4．1％，4／98）；28例双侧侧脑室扩张者中，GDS评分正常23例（82．1％，23／28），临界3例（10．7％，3／28），落后2例（7．1％，2／28）；两组间比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论单纯性侧脑室扩张胎儿的侧脑室宽度≤12．0mm时，临床上可不特殊处理；宽度为12．1～15．0mm时，临床应密切随访，出生后应进行针对性的康复训练；宽度〉15．0mm时，出生后中枢神经系统发育落后的风险明显增高，应尽早干预，以期改善预后。

一例鳃-耳-肾综合征孕妇的产前诊断

目的明确1例腮-耳-肾综合征孕妇及其家族成员的遗传学病因,并对其胎儿进行产前诊断.方法采用外周血染色体核型分析及染色体微阵列分析(chromosomal microarray analysis,CMA)技术对表型异常的孕妇进行遗传学检查,了解其拷贝数变异(copy number variants,CNVs)的情况.同时行其家族成员的相关检测,明确其遗传学特征,在此基础上实施产前诊断.结果该孕妇及其女儿均携带染色体8q13.3微缺失,带有EYA1致病基因,同为腮-耳-肾综合征患者,胎儿亦携带有该CNVs,其他家系成员未发现表型及基因型的异常.结论位于染色体8q13.3区的EYA1基因突变是该家系鳃-耳-肾综合征的分子基础,符合常染色体显性遗传的规律.

改良羊水细胞原位培养和传代培养法——附208例羊水染色体分析

目的:建立一种操作简便易于推广的羊水细胞原位培养及传代培养方法。方法:抽取208 例孕16-23周孕妇的羊水,离心作原位培养,6 d后换液,换下的上清液传代培养,原位培养和传代培养在观察到多个细胞集落和较多圆形细胞时直接在原位收获制片分析。结果:208例羊水全部培养成功,并发现多例异常。其中199例经原位培养即获得足够分裂相,培养时间6-9 d,平均7 d,平均每例分裂相≥100个,一般8-10 d报告结果;9例由于原位培养不能获得足够分裂相或实验过程失误等而依靠传代培养,培养时间12-15 d,16-18 d报告结果。结论:羊水细胞原位培养法较传统胰酶消化法染色体分裂相多,分带清晰,核型完整,成功率高,出报告时间短等优点, 传代培养后收获的细胞可做为前者的补充或其它研究。

微阵列比较基因组杂交技术对一例胎儿染色体复杂易位的产前诊断

目的对1例5条染色体发生复杂易位的胎儿作出产前诊断,评价微阵列比较基因组杂交(array-CGH)技术在产前诊断中的应用价值。方法应用G显带分析羊水细胞染色体及夫妇双方外周血染色体,应用array-CGH技术对羊水细胞进行全基因组高分辨扫描分析,了解是否有微小缺失和重复。结果羊水细胞染色体结果为46,XX,t(5;7;12),t(14;21),夫妻双方外周血染色体核型正常,羊水细胞array-CGH结果显示胎儿染色体未发生微缺失或微重复。结论 array-CGH技术与传统细胞学技术相结合,大大提升产前诊断技术水平。

一对大前庭导水管综合征育龄夫妇遗传咨询研究

大前庭导水管综合征(larged vestibular aqueduct syndrome,LVAS)是一种以前庭水管扩大伴有感音神经性聋为特征的常染色体隐性遗传性非综合征型听力障碍疾病,其发病与SLC26A4基因密切相关[1]。SLC26A4基因位于7q31,含有21个外显子,开放阅读框架2343bp,每个内含子与外显子的界线分明,SLC26A4基因编码一个结构和功能都十分复杂的蛋白质Pendrin[2]。该蛋白由780个氨基酸组成,主要表达于内耳的内淋巴管和淋巴囊,介导OH-、I-、Cl-和HCO3-转运,维持内淋巴液的离子平衡,对内耳内淋巴液再吸收具有不可或缺的作用[3]。SLC26A4基因的突变谱很广泛,目前世界范围内约有240种以上的突变报道与耳聋相关[4]。本研究中,笔者对1对大前庭导水管综合征听障育龄夫妇应用目标区域捕获测序技术对听力障碍相关基因进行突变检测,明确其突变类型和突变形式,并探讨其遗传风险。

一例骨骼发育异常胎儿ALPL基因的遗传学分析

低磷酸酯酶症(hypophosphatasia,HPP)是一种由于编码组织非特异性碱性磷酸酶(tissue non-specific alkaline phosphatase,TNSALP)的碱性磷酸酯酶基因(alkaline phosphatase gene,ALPL)变异导致的罕见常染色体显性或隐性遗传病,临床表现主要是骨骼和牙齿矿化不全以及血清碱性磷酸酶(ALP)活性偏低[1]。

6089例住院儿童呼吸道感染常见病毒病原学检测分析

呼吸道感染是儿童常见的感染性疾病,严重威胁儿童健康.Williams等[1]报道的数据显示,2000年全世界约有190万（160万- 220万）5岁以下儿童死于急性呼吸道感染（acute respiratory infections,ARI）.呼吸道病毒是导致人类罹患呼吸道疾病最常见的病原体,目前已经证实急性呼吸道感染中80％以上是由病毒引起,包括呼吸道合胞病毒（RSV）、流感病毒（Ⅳ）、副流感病毒（PIV）、腺病毒（ADV）、鼻病毒（RV）及人偏肺病毒（hMPV）等[2-3].同一种呼吸道病毒可引起多种临床症状,不同的呼吸道病毒又可引起相同的临床症状而且呼吸道病毒感染存在显著的地域流行特征,了解儿童呼吸道感染病毒病原学特点和流行特征,对该类疾病的防治非常重要.本研究对2011年1月至2013年12月湖州市妇幼保健院住院的呼吸道感染患儿的呼吸道标本进行了常见病毒病原学检测和分析,现将结果报告如下。

基因芯片技术在复发性流产遗传学诊断中的应用

目的 探讨基因芯片单核苷酸多态性阵列（SNP-array）技术在复发性流产遗传学诊断中的应用价值.方法 选择2012年1-10月在浙江省湖州市妇幼保健院产前诊断中心就诊的、曾有自然流产≥2次、本次妊娠又发生自然流产的患者26例（RSA组）,对流产物分别应用绒毛染色体核型分析技术和SNP-array技术进行分析；同时选取20例早孕期人工流产妇女作为对照组.结果 绒毛染色体核型分析获得结果19例,检测成功率为73％ （19/26）,发现染色体异常10例,异常检出率为10/19；SNP-array技术检测获得结果26例,检测成功率为100％,发现全基因组拷贝数异常15例,异常检出率为58％ （15/26）.对照组胚胎绒毛染色体核型分析获得结果16例,检测成功率为16/20,均未发现染色体核型异常；SNP-array技术检测获得结果20例,检测成功率为20/20,均未发现全基因组拷贝数异常.结论 SNP-array技术具有分辨率高、准确性好等优点,是自然流产特别是复发性流产遗传学诊断的有力工具.

湖州地区聋哑学校68名聋哑学生耳聋易感基因突变分析研究

目的研究4个耳聋易感基因GJB2、GJB3、SLC26A4、线粒体12SrRNA在湖州市聋哑学校68名聋哑学生中的突变类型分布情况。方法应用飞行时间质谱技术,对68名聋哑学生进行GJB2、GJB3、SLC26A4、线粒体12SrRNA 4个耳聋易感基因检测,检测位点包含以上基因的20个热点突变。结果 68名聋哑学生中共检出耳聋基因突变27例,阳性率39.71%,其中GJB2基因突变19例,占70.37%;GJB3基因突变1例,占3.7%;SLC26A4基因突变5例,占18.52%;线粒体12SrRNA基因突变2例,占7.41%。结论在湖州市聋哑学校中,GJB2是最常见的耳聋突变基因,235delC是GJB2基因最常见的突变位点。

围孕期妇女营养摄入与胎儿先天性心脏病的关系

目的探讨围孕期妇女营养摄入与胎儿先天性心脏病（CHD）发生的关系。方法采用以医院为基础的病例．对照研究设计，按照纳入和剔除标准选择100例CHD胎儿孕母为病例组，100例健康胎儿孕母作为对照组，调查孕母围孕期营养摄入情况，同时采集调查对象外周静脉血，检测MTHFRC677T基因多态性，血清同型半胱氨酸（Hcy）、叶酸及维生素B12（VitB12）水平。采用单因素和多因素非条件Logistic回归模型，进行胎儿CHD影响因素的分析。结果非条件Logistic回归分析显示，孕母围孕期奶类摄入〈5次／周是影响胎儿CHD发生的危险因素（OR=3．250，95％CI：1．785—5．916）。孕母MTHFR677Tr基因型与围孕期营养摄入〈5次／周之间在CHD发病中均为负相加模型交互作用．且不同MTHFRC677T基因型对其血清Hcy未产生明显影响（F=0．629、1．872，P〉0．05）。血清Hcy水平病例组明显高于对照组，且差异有统计学意义（t=-8．141，P〈0．01），血清叶酸和VitBl2水平与血清Hey水平呈负相关（r=-0．281和-0．236，P均〈0．01）。结论血清高Hcy水平是子代CHD的危险因素，未发现孕母MTHFRC677T基因多态性与子代CHD发病存在关联，经常补充富含叶酸和B族维生素的食物或可降低子代CHD的发病风险。

两例Dandy-Walker畸形胎儿的遗传学分析

目的探讨两例Dandy-Walker畸形胎儿的遗传学病因以及单核苷酸多态性微阵列（singlenucleotide polymorphism microarray，SNP-array）检测在其产前诊断中的应用价值。方法应用常规G显带分析胎儿及其父母的染色体核型，SNP—array对胎儿进行全基因组扫描。结果两例胎儿父母的染色体核型均未见异常，1例胎儿为46，X，？i（x）（q10），另1例羊水细胞培养失败。SNP-array检测提示1例胎儿具有染色体6p25．3p25．2微缺失、1例具有Xp22．33p22．2缺失，同时携带Yq11．221q11区的序列，异常片段包含与Dandy-Walker畸形相关的FOXC1、SHox、STS等基因。结论染色体6p25．3p25．2、Xp22．33p22．2区的DNA拷贝数异常可能是2例Dandy-Walker综合征患儿的遗传学病因，可能与FOXC1、SHOX、STS基因的表达异常有关。作为染色体核型分析的重要补充，SNP-array对于胎儿的产前诊断与遗传咨询具有重要的意义。

智力障碍患儿ARX基因起始密码c. 1A>G变异的遗传学分析

目的对1例智力障碍患儿进行基因变异分析,明确其遗传学病因。方法对1例智力障碍患儿进行目标区域捕获测序,将测序结果与GenBank提供的标准序列进行对比,寻找基因序列的变异。对于检出的可能致病性变异,应用Sanger测序法,对患儿双亲进行验证,并分析患儿的临床遗传学特点。结果检测出患儿ARX基因c.1A>G半合子变异;双亲验证后,证实母亲为ARX基因c.1A>G杂合变异携带者,因此患儿的变异遗传自母亲。通过检索公共数据库及本地数据库该变异未收录、也未见文献报道,ARX基因c.1A>G变异为未报道过的新变异,临床意义为“可能致病性变异”。结论AKX基因c.1A>G(pMetl?)变异可能与患儿的智力障碍的发生相关。

FISH技术在514例流产物染色体数目异常的临床应用研究

目的评估荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术在快速检测流产物染色体数目异常的价值。方法对514例流产物应用13、16、18、21、22、X、Y染色体特异性DNA探针进行FISH技术检测。结果 513份组织标本检测成功,1份标本无荧光信号,共检出染色体数目异常141例,其中各种常染色体三体型60例,性染色体异常37例,三倍体32例,四倍体10例,染色单体2例。结论应用FISH技术检测流产物染色体数目异常,简单、快速并且准确,可以进行流产病因分析并且为再次妊娠风险评估提供依据。

FISH技术在一例45,X/46,X,i(Xq)Turner综合征中的研究

目的应用荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)分析一例45,X/46,X,i(Xq)嵌合体,并探讨其形成机理,临床表型与染色体核型的关系。方法通过染色体常规G显带技术,并联合FISH技术,选用X染色体着丝粒特异DNA探针(CSPX)和X染色体长臂全涂抹探针(Xq),进一步确认异常染色体的来源。结果 G显带分析该患者染色体核型为45,X/46,X,i(Xq),FISH技术证实了该异常染色体为Xq等臂染色体。结论 X短臂单体长臂三体型Turner综合征患者的临床表型与其染色体核型相关;在常规G显带的基础上,应用FISH技术可准确识别异常染色体,对明确诊断及后续治疗有指导意义。