Bt基因和Bt蛋白检测技术研究进展

通过转基因技术将可表达杀虫特性蛋白的Bt基因转入大豆、水稻等农作物中,培育出优良的抗虫品种,从而在不使用农药等有害物质的前提下,对病虫害起到高效防治作用。然而动物试验及临床研究发现,Bt蛋白可能导致哺乳动物的免疫器官和免疫细胞损伤,也可能影响基因库的遗传结构及群体遗传多样性,对土壤特异生物类群功能、土壤生物多样性以及土壤酶活性等也有不同程度的影响,且Bt蛋白有可能沿着食物链在人体内富集,对人体形成潜在的危害。因此,开展对Bt基因和Bt蛋白的监控研究是必要的,该文对Bt的相关研究现状作一简要综述。

一种灰茶尺蠖高效引诱剂的研制及其田间防效评价

为研制有效诱杀重要害虫灰茶尺蠖雌、雄成虫的性信息素/植物源信息物复合型性诱剂,选源自茶梢和茶花挥发物的30个主要成分,分别配成10^(-6)g/mL、10^(-4)g/mL和10^(-2)g/mL液体石蜡溶液作味源,检测其引起1日龄灰茶尺蠖雌、雄成虫的EAG反应值。结果表明:(1)每种味源的3个剂量处理皆引起明显的EAG反应;随着味源浓度增加,EAG反应值显著增大;(2)引起的雌、雄成虫EAG反应值相近,差异不显著;(3)芳樟醇、反-2-己烯醛、顺-3-己烯-1-醇、己醇、苯乙醇和6-甲基-5-庚烯-2-酮的每个剂量处理引起强烈的EAG反应。将这6种EAG活性成分与灰茶尺蠖2个主要的性信息素成分Z,Z,Z-3,6,9-十八碳三烯和Z,Z-3,9-6,7-环氧-十八碳二烯配成数个备选的复合型性诱剂,载于羊毛毡细条上、塑封、制成诱芯,在茶园中检测其引诱活性,发现诱效最优的复合型性诱剂在每个诱芯上组成为:6种EAG活性成分各2 mg、Z,Z,Z-3,6,9-十八碳三烯0.4 mg、Z,Z-3,9-6,7-环氧-十八碳二烯0.6 mg、抗氧化剂——2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚1 mg、正己烷100μL。此外,使用土黄、荧光黄、米黄、素馨黄、桔黄、土褐、墨绿、芽绿、草绿、荧光绿、天蓝、大红和纯白等13种色板诱杀灰茶尺蠖成虫,发现其偏嗜暗黄色,以土黄色效果最佳。遂将该诱芯载于土黄色粘板上组成诱捕器,诱杀防治灰茶尺蠖主害代——第3代,试验程序:在第2代羽化始盛期用诱捕器诱杀成虫以减少交尾几率而压低第3代幼虫数,在第3代初龄幼虫期喷施2.5%联苯菊酯、茶尺蠖核型多角体病毒·苏云金杆菌悬浮剂(1×10^(4)PIB·2000 IU/μL),接着定期调查三者的防治效果,结果表明复合型性诱剂的防效显著优于后两者。该研究为灰茶尺蠖的绿色防控提供了可敷应用的技术产品。

花期杭白菊植株引诱菊小长管蚜的嗅觉和视觉线索及应用

杭白菊是一类顶级的茶用菊,原产地是浙江省桐乡市。菊小长管蚜Macrosiphoniella sanborni是菊属植物重要害虫,常常在花期觅食于花上和匿于花内,随着菊花采摘、加工而残留在菊花产品中。冲饮菊花茶过程中,蚜尸或肢体就浮现在菊花茶汤中,致饮者“倒胃口”。为揭示该蚜嗜好花朵原因和研制有效的防控手段以便在花期控制该蚜,分离鉴定了花期杭白菊植株的36种挥发性化合物,挑选其中含量大的、主要的17种用作味源,对该蚜做行为测定。发现a-蒎烯、反-2-己烯醛、(+)-4-蒈烯、顺-3-己烯乙酯、顺式-β-罗勒烯、γ-萜品烯、或者1-辛烯-3-乙酯7种成分的10-4g/mL的正己烷溶液显著地吸引该蚜雌、雄成蚜。依次将该7种成分的每种10-2g/mL正己烷溶液与蚜虫性信息素荆芥内酯的10-4g/mL正己烷溶液按照60∶10∶10∶2∶2∶20∶2∶1体积比配制成复合型蚜虫引诱剂,在菊园中与专利产品蚜虫引诱剂比较诱效,结果表明前者对于该蚜更具有引诱力。此外,在杭白菊园进行的该蚜趋色行为测定中,测得菊花黄对该蚜诱效稍强于芽绿色。随后,将每块菊花黄粘板附1个复合型蚜虫引诱剂诱芯,组成1个诱捕器,在杭白菊花期的菊园放置相互间距7 m×8 m的诱捕器诱杀成蚜。结果证实:不仅每个诱捕器诱杀了大量菊小长管蚜成虫,而且诱捕器的防效优于吡虫啉药液。认为:花期杭白菊植株的主要挥发性化合物和花朵上雌蚜释放的性信息素(嗅觉线索)与菊花的黄色(视觉线索)叠加引诱了菊小长管蚜;研制的载有复合型蚜虫引诱剂的菊花黄粘板可用作花期有效诱杀菊小长管蚜的手段。

冬季遮阳网茶园昆虫趋色性及其群落结构分析

茶园建设固定遮阳网可助力干旱时节抗旱和冬季防冻,但茶园病虫害也常发。目前,有关固定遮阳网茶园昆虫群落缺乏研究。以浙江松阳县建有的固定遮阳网茶园为对象,冬季采用13种颜色的诱虫色板每隔10 d依次对5块遮阳网茶园内昆虫进行诱捕,统计24 h内捕获的种数和个体数。结果共捕获6个目37个科的2940个昆虫(蜘蛛);诱捕量最多的为双翅目,种数、个体数分别占总物种数、总个体数的29.7%和69.5%;聚类分析将13种色板中的荧光绿、芽绿、米黄、土黄、橘黄、草绿、荧光黄和素馨黄色板聚为一类,每种色彩的每块板平均诱捕的物种数和个体数分别是(19.4±2.4)种和(286.9±55.4)个;墨绿、大红、天蓝、土褐和纯白5种色板聚为一类,每种色彩的每块板平均诱捕的物种数和个体数分别是(11.8±3.3)种和(129.0±36.4)个;主要害虫有茶小绿叶蝉、茶蚜和黑刺粉虱等,主要天敌是尺蠖原绒茧蜂和单白绵副绒茧蜂。研究认为遮阳网茶园成为主要害虫和重要天敌的越冬庇护场所;芽绿、素馨黄、荧光绿和荧光黄等色板可作为监测茶园虫情的手段之一。

肽核酸荧光原位杂交技术检测生肉中沙门氏菌方法的建立及应用

本研究设计了一种基于沙门氏菌毒力基因侵袭蛋白A(invA)的特异性肽核酸(PNA)探针,在前期优化条件的基础上,建立并评估了沙门氏菌肽核酸荧光原位杂交(PNA-FISH)的检测方法。特异性试验结果显示,该方法的Sal-invA探针除对目标菌杂交呈阳性外,与12株常见的非目标菌杂交均为阴性,特异性强;灵敏度试验结果显示,该方法对沙门氏菌的检测限为105 cfu/mL,而荧光定量PCR方法和细菌分离培养法对沙门氏菌的最低检测限分别为102 cfu/mL和105 cfu/mL,PNA-FISH方法的灵敏度与分离培养方法相近。人工污染沙门氏菌的生肉制品,增菌培养后经上述3种方法检测的最低检测限均可达到100 cfu/mL。对83份生鲜肉经增菌培养后,用上述3种方法检测。结果显示,该方法与细菌分离培养方法和荧光定量PCR方法的符合率均达到98.8%。表明,增菌培养是提高该PNA-FISH检测方法灵敏性的重要步骤。本研究建立的检测沙门氏菌的PNA-FISH方法快速、准确、灵敏,适合用于临床肉制品的检测。

基于液相PNA-FISH技术的单增李斯特菌检测方法研究

为了提高单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)的检测效率和检测通量,本研究在前期初步建立的液相肽核酸荧光原位杂交(PNA-FISH)检测方法基础上,分别采用50%酒精加4%多聚甲醛和80%酒精加PBS两种杂交前处理方式进行细菌固定试验。结果显示,两种方法在95%的置信区间内无显著性差异,PBS可代替多聚甲醛使用。本研究进一步利用特异性探针Lm-16S-2初步建立单增李斯特菌液相PNA-FISH方法,特异性试验结果显示,该方法与17株常见单增李斯特菌杂交的荧光值明显高于阴性对照,而8株非单增李斯特菌和14株非李斯特菌杂交的荧光值与阴性对照无差别,表明该方法特异性强;将单增李斯特菌菌液10倍倍比稀释(101 cfu/mL^108 cfu/mL)后同时利用该方法及传统细菌生化鉴定法检测,进行敏感性试验。结果显示,该方法与传统细菌生化鉴定法敏感性相同,对单增李斯特菌的检测限均为104 cfu/mL,敏感性较高。对8个批次不同种单增李斯特菌进行重复性试验,结果显示批内和批间荧光值变异系数均小于5%,重复性好;经更换不同实验室及操作人员后检测同一批次不同浓度的单增李斯特菌,结果显示试验结果可以重复再现,稳定性好。对28份家禽组织样品经国标法增菌培养后采用液相PNA-FISH方法检测,结果显示该方法与传统细菌生化鉴定法检测单增李斯特菌的符合率达到100%,并大大缩减检测时间。本研究建立的单增李斯特菌液相PNA-FISH方法能够高效、快速、准确的检测单增李斯特菌,为该菌的检测提供了一种可行技术手段。

肽核酸在微生物检测中的应用

核酸是由许多核苷酸单体聚合成的生物大分子化合物,为生命的最基本物质之一,在遗传信息传递中发挥着重要的作用,核酸序列分析对阐释生命活动具有重要意义。寡核苷酸探针可用于微生物等的核酸序列检测和分析,但应用寡核苷酸探针检测核酸序列时存在一些不足与缺陷,如其抵御核酸酶降解的能力较弱、杂交分子的解链温度低.

剪叶对双季茭白秋茭病害发生及采茭期、产量等主要性状的影响

为明确双季茭白秋茭的适宜剪叶方式,以双季茭品种浙茭3号为试材,于6月15日定植,以不同离地高度设重剪(离地高10 cm)、中剪(离地高25 cm)、轻剪(离地高40 cm)3个剪叶处理,以不剪叶为对照,比较分析不同剪叶处理对胡麻斑病、锈病的控制效果及植株分蘖、采茭期、产量等主要性状表现。结果表明,剪叶后植株病情指数显著降低,对胡麻斑病、锈病防治效果分别为43.95%~49.91%、41.06%~47.69%;重剪、中剪处理提高了植株分蘖数、有效分蘖数及小区产量,净茭率分别显著提高6.53%、5.58%,一级茭率分别显著提高5.43%、4.46%。双季茭秋茭以离地高10~25 cm剪叶为宜。

水杨酸及茉莉酸介导植物抗病性的研究进展

为了进一步明确水杨酸及茉莉酸介导的植物抗病信号传递的分子机制,阐明植物的抗病机理,综述了水杨酸与茉莉酸介导的植物抗病过程、关键酶、标记基因以及二者在抗病通路中的交叉对话机制的研究进展,并展望了水杨酸与茉莉酸在植物抗病中的应用。

内山六安瓜片4个等级茶叶香气的组成及其差异

为深入探究历史名茶六安瓜片不同等级间香气组分和含量的差异,选用内山六安瓜片特级、一级、二级和三级茶叶样品,以SDE法提取香精油,使用GC-MS配合标样做定性分析,加入癸酸乙酯为内标进行相对定量分析。结果表明,从4个等级的茶叶香精油中共鉴定香气成分96种,包括20种醇、18种酯、17种烯烃、16种醛、12种酮、7种杂环化合物和少量酸类;主要成分为芳樟醇、香叶醇、橙花叔醇、β-紫罗酮、己酸-顺-3-己烯酯、苯甲醛、棕榈酸、芳香醇氧化物Ⅰ型、β-环柠檬醛、α-紫罗酮、顺-3-己烯-1-醇、庚醛和壬醛;从特级、一级、二级至三级,香气成分个数分别为79、60、55个和47个,相对于内标的含量分别为695.94、579.90、541.69和268.50,香气成分个数和香气总含量呈梯度递减;4个等级茶叶的共有高含量香气成分为芳樟醇、橙花叔醇、α-紫罗酮、β-紫罗酮、己酸-顺-3-己烯酯,其含量随着等级降低而减少。六安瓜片的香气化合物包含多种类型且存在一些较稳定的高含量香气化合物,显露清香高爽的香型特征,但4个茶叶等级之间香气组分和含量的差异十分明显。

链霉素人工抗原及多克隆抗体的制备与鉴定

通过研究链霉素(SM)人工抗原的合成和多克隆抗体的制备,建立链霉素残留的免疫分析方法。以氧-缩甲基羟胺肟化链霉素的醛基,引入羧基,再用碳二亚胺法将半抗原与蛋白质载体连接,合成免疫原SM-cBSA。用戊二醛法合成包被原SM-OVA。用紫外扫描、SDS-PAGE分析偶联情况,计算得链霉素与cBSA、OVA的分子偶联比分别为7.6:1与17.7:1。经动物免疫获得效价为1:40000的链霉素多克隆抗体,采用间接竞争ELISA测定IC50为3.32ng/mL,与双氢链霉素的交叉反应率为105.21%,与同类的其他药物均无交叉反应。

茭白黑粉菌核相变化及ISSR分子标记筛选的研究

通过显微观察和Hoechst 33258荧光染色方法,系统观察了茭白灰茭中黑粉菌厚垣孢子不同萌发时期的核相变化.研究表明,厚垣孢子萌发过程中黑粉菌细胞核的数目不断变化,核相在萌发过程中是不规则的.茭白灰茭厚垣孢子中没有观察到细胞核,菌丝体细胞核的数目在1~4个,大多数小孢子仅有一个细胞核或没有细胞核.同时获得了18个可用于茭白黑粉菌遗传变异分析的ISSR分子标记,作为深入探讨茭白黑粉菌的生物学特性的参考.

低温下茭白品种龙茭2号细胞膜损伤与冷胁迫分析

以浙江省主栽茭白品种浙茭911为对照,比较它与新品种龙茭2号在低温下叶片丙二醛含量、相对电导率的变化以及冷胁迫指数和耐寒性.结果表明,龙茭2号在低温,尤其是持续低温下,电导率变化小,丙二醛含量少,对寒冷适应较快,恢复能力较强.两个茭白品种的冷胁迫指数只有在5℃的恢复阶段存在显著差异,且龙茭2号的茎和叶冷胁迫指数都较低,干物质积累受寒冷胁迫影响小,具有较强的耐寒性.

恩诺沙星人工抗原及多克隆抗体的制备

[目的]制备恩诺沙星人工抗原及多克隆抗体。[方法]采用活性酯法合成恩诺沙星的人工抗原,并通过紫外光谱扫描和SDS-PAGE电泳对其进行鉴定。利用免疫原(ENR-BSA)免疫新西兰大白兔,制备抗恩诺沙星的高亲和力和高特异性的多克隆抗体。[结果]恩诺沙星成功地偶联到载体蛋白上。通过动物免疫,获得了高效价的抗血清,最高效价达到1∶100 000,说明人工抗原成功地诱导机体产生免疫应答。[结论]恩诺沙星的人工抗原合成路线简单易行,可为进一步建立恩诺沙星的免疫检测方法奠定了基础。

植物电子标本库建设的若干问题探析

植物电子标本是利用数码设备进行采集,经后期编辑加工而成的数字化植物图像,是一种特殊形式的新型标本。本文通过解析电子标本和传统实物标本间的区别与联系,探讨了以电子标本为核心的电子标本库建设的有关问题,明确了电子标本采集、加工、集成等的原则、方法和注意事项,旨在为电子标本库的建设、管理和应用提供建设性意见。

食物种类与饥饿胁迫对福寿螺生长发育的影响

【背景】福寿螺是一种危害极其严重的外来生物,可对不同的农作物造成不同程度的危害。目前,国内外关于食物来源和饥饿程度对福寿螺生长发育影响的研究较少,且主要集中在成螺。【方法】本试验研究8种食物(牛筋草、青菜、油麦菜、芹菜、大白菜、茭白、萝卜叶和杨梅叶)对Ⅲ级福寿螺生长发育的影响,以及不同的饥饿条件对不同发育级别福寿螺的螺长、螺宽、螺高和体重的影响。【结果】在相同条件下,福寿螺取食利用率和特定生长率最高的食物是大白菜,其次是油麦菜,而不取食杨梅叶。饥饿胁迫对不同发育级别福寿螺的影响程度表现为Ⅰ>Ⅱ>Ⅲ>Ⅳ,持续喂食Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级福寿螺100d,其体重分别增加9.65、1.57和3.03倍。而Ⅳ级福寿螺无论饥饿与否其体重变化均不明显。【结论与意义】福寿螺可取食大部分绿色植物,但食物种类可显著影响福寿螺的生长发育,且福寿螺的耐饥性随着温度的增加而减弱。这些结果进一步明确了福寿螺的取食特性,为福寿螺的综合防治提供了理论基础。

茭白品种间基因组ISSR多态性分析

对浙江、湖北、江苏等省3个野生茭白材料17个不同品种的茭白种质资源进行了收集,利用ISSR方法对茭白植株进行了基因组多态性分析.结果表明,野生茭白与栽培茭白品种间具有明显的多态性,不同来源的栽培茭白品种间也具有一定的多态性,多态性比例分布在12%-25%之间.利用DPS软件对茭白植株的多态性位点进行的系统聚类分析发现,野生茭白与栽培茭白间距离较远,茭白地域分布及栽培特性与种质资源多样性相关。

茭白愈伤组织诱导及基因组多态性分析

诱导获得了双季茭白龙茭2号的愈伤组织,采用RAPD和ISSR分子标记技术对4个茭白品种和诱导获得的2种茭白愈伤组织进行了基因组多态性分析。筛选获得的12条ISSR和7条RAPD引物共扩增出121条清晰条带、20条多态性条带,其中茭白品种材料与愈伤组织的多态性位点比率分别为3.30%和13.22%。正常茭白的3个品种之间未检测到多态性;正常茭白与野茭间多态性位点比率为3.31%;但愈伤组织与茭白之间的基因组多态性为11.57%。表明组培过程中产生的基因组多态性明显高于正常田间无性繁殖产生的变异,茭白组织培养体系的建立将有助于茭白的品种选育。

稳健偏最小二乘类模型及其在清真香肠红外质量控制中的应用

针对在实际多元质量控制中经常遇到的奇异样品问题,本研究提出了一种稳健偏最小二乘类模型。本方法基于Stahel-Donoho奇异度和样品重加权策略,用稳健的类中心和模型误差构造稳健的决策区间。将本方法用于清真香肠的红外分析,建立了稳健的质量控制方法。在香肠样品的不同部位进行取样,充分研磨后制备溴化钾压片,以空气为背景,测量4000～400cm"1范围的红外透射光谱。基于73个清真香肠样品和78个非清真样品的光谱数据,研究了新提出的稳健类模型的统计效率和稳健性。在有奇异样品存在的情况下,本方法能有效检出奇异样品,为新样品的预测提供稳健的决策区间。排除奇异样品后,基于原始光谱的模型灵敏性为0.846,特异性为0.936;基于标准正态变量法的模型灵敏性为0.923,特异性为0.974。

苦杏仁酸对褐飞虱取食行为影响的刺探电位测试分析

应用刺探电位图谱(EPG)技术研究了在液态人工饲料中褐飞虱(Nilaparvata lugens)口针的刺探行为,对出现的波形进行了定义,从各波形占总时间的比率、各波形的平均时间、能够产生N2波和E波的个体比例等方面进一步研究和分析了褐飞虱在不同质量浓度苦杏仁酸-蔗糖取食液中的取食行为,并应用铷元素标记法验证了EPG结果.结果表明,褐飞虱取食液态人工饲料主要出现5种波形,即N1波、N2波、N3波、E波以及非刺探波np波.在苦杏仁酸质量浓度为1.0 mg/ml时,褐飞虱取食的路径波(N2波)持续时间由空白对照的22.85 min显著延长到64.65 min,占总时间比率由对照组的10%上升至25%,而取食波(E波)缩短为9.75 min,占总时间比率由对照组的37%下降至4%,E波出现的频率由对照组100%下降至42%.苦杏仁酸对褐飞虱具有一定的拒食效果,随苦杏仁酸质量浓度的升高拒食效果更为明显,铷元素标记法测定的结果与EPG检测的E波结果基本一致,证实了EPG检测结果的可靠性.