汉坦病毒核蛋白的重组表达及其免疫印迹法在肾综合征出血热血清抗体检测中的应用

目的 应用基因工程技术，在昆虫细胞中表达汉坦病毒（HV）S基因，表达产物作为诊断抗原，用于检测血清中抗HV特异性抗体IgG。方法 PCR扩增HV-Z10株N蛋白（NP）编码基因，基因工程方法构建NP编码基因昆虫表达系统 rBAC-Z10S-TN。间接荧光法了解重组NP（rNP）表达及与特异性免疫反应情况，SDS-PAGE观察重组蛋白表达情况。建立免疫印迹法检测肾综合征出血热（HFRS）患者血清样品，并与常规间接免疫荧光法进行比较。结果 rBAC-Z10S-TN高效表达rNP，SDS-PAGE显示rNP的蛋白表达带，此抗原仅与HFRS患者血清起反应。经双盲试验，两法检测血清143份，HFRS阳性符合率为97.67%。结论 成功构建了HV-Z10株NP编码基因高效真核表达系统。所建立的免疫印迹法可作为HFRS简便、安全、敏感、特异的血清学诊断新方法。

2007年浙江省鼠类感染汉坦病毒监测及病毒分离

目的了解浙江省鼠类自然感染汉坦病毒(HV)情况和病毒型别,为肾综合征出血热(HFRS)防治提供科学依据。方法采集鼠类肺组织和血清标本,用间接免疫荧光试验检测鼠血清IgG抗体,直接免疫荧光试验检测鼠肺HV抗原。HV抗原阳性鼠肺接种Vero-E6细胞分离病毒,用HV单克隆荧光抗体鉴定分离株的型别。结果共捕获鼠形动物1129只,其中黑线姬鼠为优势种,鼠肺HV抗原阳性率为3.0%,鼠血标本IgG抗体阳性57份,阳性率8.0%。分离到6株汉滩(HTN)型病毒,其中来自黑线姬鼠5株,褐家鼠1株。结论浙江省存在以黑线姬鼠为主要传染源的HFRS疫源地,HV主要流行型别为HTN型。

东南沿海地区汉坦病毒的遗传进化分析

目的对浙江、福建省及上海市东南沿海地区汉坦病毒的基因进行比较。方法收集浙江、福建省及上海市汉坦病毒部分M基因序列，应用Mega4．0和DNAStar软件包进行系统发生分析，以邻位相连法（NJ）构建系统发生树，分析东南沿海地区浙江、福建省及上海市汉坦病毒的基因差异，分析采用1000个多序列组。结果经对浙江、福建省及上海市若干株汉坦病毒基因的序列比较与系统进化分析，浙江省分离的同型别毒株的基因序列同源性高于福建省与上海市的分离毒株，而浙江省同地区分离株的核苷酸同源性更高，地区接近的分离株系统进化分支的分布也大部分更靠近。汉滩型病毒（HTNV）福建株的ZH53和汉城型病毒（SEOV）浙江建德株Gou3和ZJ5与本研究同型别的其他株及国际标准株的核苷酸同源性较低，分别为82．7％～86．3％和84．0％～85．3％，而且分别在HTNV和SEOV发生群中构成一独立分支。浙江省从田鼠中分离到SEOV，产生宿主“溢出”现象。结论浙江、福建省及上海市东南沿海地区汉坦病毒的基因差异和亲缘远近关系主要表现在地区性，显示出高度的地理聚集现象，浙江省建德地区和福建省分别存在SEOV和HTNV的特殊亚型病毒。