浙江省急性驰缓性麻痹相关肠道病毒鉴定分析

目的对浙江省2006-2008年急性弛缓性麻痹病例(AFP)中的非脊灰肠道病毒(NPEV)分离株进行分子生物学分型鉴定。方法采用简并引物和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),对31株非脊灰肠道病毒分离株进行目的基因片段扩增,然后测定序列,将测定的结果与GenBank进行BLAST比较分析,运用DNAMAN软件进行同源性分析,并构建基因树。结果31株非脊灰肠道病毒分离株经分子生物学分型,其中人类肠道病毒(HEV)-A组5株,有2个血清型;HEV-B组24株,有13个血清型;HEV-C组2株,有1个血清型。结论浙江省2006-2008年分离到的非脊灰肠道病毒以HEV-B组为主。

单管多重荧光定量RT-PCR方法鉴别新甲型H1N1及甲型和乙型流行性感冒病毒

目的建立和评价鉴别新甲型H1N1、甲型和乙型流行性感冒（简称流感）病毒的单管多重荧光定量RT-PCR方法。方法2010年10月至2011年4月，采集流感样患者咽拭子样本213份。分别选用新甲型H1N1流感病毒HA基因、甲型流感病毒M基因和乙型流感病毒NP基因中的152、128和107bp片段作为荧光定量PCR检测的靶片段，设计特异性引物和不同发光基团标记的TaqMan探针，采用体外转录构建标准品，绘制标准曲线，评价检测方法的重复性、特异度和灵敏度，并对213份流感样患者咽拭子样本进行检测及测序验证。结果3种病毒对应的标准曲线分别为：新甲型H1N1流感病毒：Y=-3．461gX＋46．985；甲型流感病毒：Y=-3．491gX＋37．709；乙型流感病毒：Y=-3．51lgX＋38．889，Y为Ct值，lgX为病毒RNA拷贝数的对数值。质粒标准曲线的方差系数为0．998，灵敏度达到每个反应10^2拷贝／μl，特异度强。213份样本中检出新甲型H1N1流感病毒核酸39份（18．3％），甲型流感病毒核酸阳性63份（29．6％），乙型流感病毒核酸阳性23份（10．8％），阳性样品经过测序验证。结论为鉴别新甲型H1N1、甲型和乙型流感病毒建立的单管多重荧光定量RT-PCR方法快速、特异且灵敏。