大岩桐SPY同源基因的克隆及其功能分析

以大岩桐幼叶为材料,利用RACE技术克隆到SPY基因的全长cDNA,命名为SsSPY(Genbank:ACF96937)。序列分析表明,SsSPY包含一个完整的ORF,长度为2805bp,编码934个氨基酸;含有SPY基因所共有的TPR保守结构域。通过蛋白序列比对,发现SsSPY与矮牵牛的PhSPY有82%的同源性,与拟南芥的SPY有81%的同源性,与大麦的HvSPY有74%的同源性。将SsSPY置于CaMV35S启动子控制下在烟草中异位表达,转基因烟草表现出株高、花芽数、分枝数显著增加,节间变长等新表型,表明SsSPY参与了转基因烟草株形的发育及花芽的分化。

大岩桐GAI同源基因的克隆及功能研究

以大岩桐(Sinningia speciosa)花蕾RNA为模板,利用RACE技术克隆了大岩桐GAI同源基因的全长cDNA,命名为SsGAI(在GenBank中登录号为:FJ594773).序列分析表明,SsGAI的ORF长度为1689bp,编码562个氨基酸,含有典型的植物DELLA结构域以及GRAS结构域.蛋白同源性分析表明,SsGAI与葡萄的VvGAI及陆地棉的GhGAI相似性分别为68%、64%.SsGAI基因在花萼中的相对表达量最高,在茎中表达沉默.将SsGAI置于CaMV35S启动子控制下在烟草中异位表达,转基因烟草表现出植株矮化,花瓣数增加,花期延迟等新表型,表明SsGAI参与了转基因烟草株高及花器官的发育.

隔离法与整体法的应用

隔离法：将某个物体从相互作用的连接体中隔离出来，分析受力情况，列出平衡方程或动力学方程，用以求解该物体与其它物体之间的相互作用力．