非小细胞肺癌组织中ZO-1的表达及其临床意义

背景与目的已有的研究表明紧密连接蛋白-1(zonula occluden-1,ZO-1)表达和肿瘤细胞的生长和转移存在密切联系。本研究旨在探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中ZO-1表达的临床意义。方法应用实时荧光定量PCR、Western blot和免疫组化检测101例NSCLC癌组织及癌旁组织中ZO-1mRNA和蛋白表达,以61例肺部良性病变患者作为对照。结果 ZO-1mRNA在癌组织和肺良性病变组织间差异具有统计学意义(P<0.01)。Western blot显示:ZO-1蛋白在癌组织、癌旁组织、肺良性病变组织的相对表达量之间均存在明显差异(P<0.01或P<0.05)。免疫组化显示:ZO-1平均光密度在癌组织、癌旁组织和肺良性病变组织中分别为69.55±17.13、246.39±83.15、330.93±72.44,组间差异均具有统计学意义(P<0.01)。伴有淋巴结转移与不伴淋巴结转移肺癌组织ZO-1mRNA表达水平比较有显著性差异(t=-5.07,P<0.01),肺癌患者术后2年内生存组和2年内死亡组间ZO-1mRNA表达水平比较差异具有统计学意义(t=5.61,P<0.01)。结论 ZO-1mRNA和蛋白在NSCLC癌组织中表达降低,并与淋巴结转移的术后生存有密切关系。

慢病毒载体介导RNA结合蛋白-5对肺腺癌细胞系H1299的增殖和凋亡的影响

目的探讨慢病毒载体介导RNA结合蛋白-5(QKI-5)对肺腺癌细胞凋亡的影响。方法应用GV358(过表达)和GV248(抑制表达)载体分别构建针对QKI-5基因的慢病毒过表达载体和抑制表达载体,转染293T细胞产生慢病毒颗粒,收集并测定慢病毒滴度。将经测序鉴定的QKI-5过表达的慢病毒或抑制表达的慢病毒转染到肺腺癌细胞H1299,Real-time PCR检测QKI-5 mRNA表达,集落形成实验检测H1299细胞增殖情况,膜联蛋白V(annexin V)、碘化丙啶(PI)检测H1299细胞凋亡情况,Western blotting检测促凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-8表达。结果成功构建QKI-5过表达慢病毒载体和抑制表达慢病毒载体,与对照组比较,QKI-5过表达后,QKI-5mRNA表达增加,细胞集落形成减少,肺腺癌细胞早期凋亡增加,促凋亡蛋白Caspase-8表达增加;QKI-5抑制表达后,QKI-5 mRNA表达降低,细胞集落形成增加,但肺腺癌细胞凋亡无明显变化,然而促凋亡蛋白Caspase-8表达减少。结论慢病毒介导QKI-5抑制增殖,可能通过Caspase-8促进肺腺癌细胞系H1299的凋亡。

hsa-microRNA-96-5p down慢病毒表达载体的构建与鉴定

目的 构建hsa-microRNA-96-5p down慢病毒表达载体并对其进行鉴定.方法 根据hsa-miR-9-5p基因序列设计合成hsa-miR-96-5p-inhibition-a和hsa-miR-96-5p-inhibition-b,将合成后成对的引物干粉溶解于退火缓冲液中引物退火.将慢病毒GV280载体酶切产物通过T4DNA连接酶将双酶切线性化的载体和退火双链DNA连接.经菌落筛选,菌落PCR及测序鉴定,荧光法及药筛法测定病毒效价.结果 菌落PCR和测序验证成功构建了hsa-miR-96-5p down慢病毒载体,经荧光法及药筛法测定病毒效价为3×108TU/ml.结论 成功构建了hsa-miR-96-5p down慢病毒表达载体,为后续深入研究miR-9-5p在肺癌细胞中的生物学行为及机制提供了前期实验基础.

人源化乙肝表面抗体重链克隆、表达及免疫学特性初步鉴定

目的建立一种利用单细胞分选技术克隆人源化乙肝表面抗体重链的方法。方法从乙肝疫苗接种志愿者外周血中分选得到单个抗体分泌细胞,单细胞RT-PCR筛选20个单菌落,挑选其中有IgG保守区域的克隆全长,并将IgG(H)基因全长克隆到pEGFP-N1载体,转染COS-7细胞,取上清液进行Western blotting验证,并采用Batty饱和法测定亲和力常数。结果筛选得到IgG(H)能与HBsAg结合,且Ka值达到2.39×109L/mol。结论利用单细胞分选克隆技术获得的抗体重链亲和力较高。

浙江舟山群岛居民甲状腺功能减退症患病情况调查

目的：调查浙江舟山群岛各地区甲状腺功能减退症（简称甲减）患病情况及相关致病因素。方法：对舟山海岛地区1389名城镇居民、502名农民、737名盐民、362名渔民及294名普陀山僧侣进行流行病学问卷调查、血清人促甲状腺激素（hTSH）、游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）、甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）和尿碘测定。8岁-10岁儿童仅行尿碘检测。结果：舟山海岛地区城镇居民、农民、盐民、渔民及普陀山僧侣的尿碘中位数（MUI）分别为320.7μg/L、188.9μg/L、122.2μg/L、193.6μg/L和271.7μg/L,亚临床甲减的患病率分别为1.01%、0.80%、0.81%、1.66%、1.36%,仅有1例调查对象患有临床甲减。女性较男性更易患甲减,TPOAb阳性者患甲减危险性较高（P〈0.05）。结论：舟山海岛地区碘营养充足,需警惕自身免疫性甲减的发生。

海岛地区NA治疗无良好应答CHB患者HBV P区耐药突变分析

目的分析舟山地区经核苷类似物(NA)治疗无良好应答的慢性乙型肝炎(CHB)患者乙型肝炎病毒(HBV)P区耐药突变模式。方法收集2011年10月至2013年11月188例于浙江省舟山医院接受NA治疗无良好应答的CHB患者血清,采用直接测序法检测患者HBV P区基因突变状态。结果 188例经NA治疗无良好应答的CHB患者HBV P区基因突变率为71.28%(134/188),主要模式:rt L180M+rt M204V/I/S突变率为26.12%(35/134),rt M204V/I/S突变率为25.37%(34/134),rt M181T/V/S突变率为16.42%(22/134);其中113例服用单种NA无良好应答患者有73例发生耐药变异(73/113,64.60%),多位点(3个及以上耐药位点)突变率为12.33%(9/73);75例服用多种NAs无良好应答患者有61例发生变异(61/75,81.33%),多位点突变率为16.39%(10/61),多药使用者发生耐药突变率明显高于单药使用者,差异有统计学意义(χ2=6.631,P<0.05)。结论在NA治疗无良好应答CHB患者中耐药变异发生率高,且长期服用多种NAs易发生多点突变;监测HBV P区耐药突变可为NA耐药CHB患者用药提供依据。

甲型流感患者外周血白细胞介素10、干扰素-γ及免疫调节分子T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域蛋白3分子表达检测

目的探讨细胞因子白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)、干扰素-γ(interferon-gamma,IFN-γ)及免疫调节分子T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域蛋白3(T cell immunoglobulin-and mucin-domain-containing molecule-3,Tim-3)在甲型流感患者外周血中的表达情况。方法收集49例甲型流感病毒阳性患者、30例健康体检者血浆及血清,Luminex多因子液相分析技术(Luminex xMAP)检测其血浆IL-10、IFN-γ表达水平;ELISA方法检测其血清可溶性Tim-3表达水平;流式细胞术检测其各免疫细胞亚群中Tim-3表达水平。结果甲型流感患者血浆IL-10、IFN-γ及血清可溶性Tim-3表达水平均显著高于对照组(P<0.05),NK细胞Tim-3表达水平显著高于对照组(P<0.01),而CD8^(+)T细胞Tim-3表达水平与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论细胞因子IL-10、IFN-γ及免疫调节分子Tim-3可作为甲型流感患者病程监测的潜在指标。

错配修复基因在右半结肠癌的表达对病理特征的影响

目的:研究散发性结肠癌错配修复基因MLH1、MSH2、MSH6和PMS2在右半结肠癌的蛋白质表达缺失情况,进一步分析错配修复基因的表达缺失与右半结肠癌病理特征的相关性。方法:收集2015年1月至2020年8月期间,在我院就诊的206例结肠癌病人手术切除组织标本及病历资料,左半结肠癌116例,右半结肠癌90例。应用免疫组织化学检测MLH1、MSH2、MSH6和PMS2基因的蛋白质表达情况,分析错配修复基因的蛋白质表达缺失与结肠癌病理特征的相关性。结果:错配修复基因在右半结肠癌的蛋白质表达缺失率高于左半结肠癌。右半结肠癌错配修复基因的蛋白质表达缺失与肿瘤分化程度、肿瘤神经浸润显著相关(P<0.05)。结论:散发性结肠癌中右半结肠癌病人错配修复基因的蛋白质表达缺失比例高于左半结肠癌。错配修复基因的蛋白质表达缺失右半结肠癌病人分化程度低,不易发生神经浸润。

无血清培养人牙龈间充质干细胞对免疫细胞的作用

目的建立人牙龈间充质干细胞(GMSCs)的无血清培养方法,探讨其对免疫细胞的调节作用。方法将原代GMSC后分别用无血清培养基与10%胎牛血清培养基培养,至P3代观察2组细胞的生物学性状及对免疫细胞的调节作用。结果 P3代无血清与10%FBS培养GMSCs均为纺锤状,呈集落、鱼群状生长,两者成脂成骨能力差异无统计学意义(P>0.05),且CD29、CD73、CD90、CD105阳性率均>95%,CD33、CD34、CD86、HLA-DR阳性率均<5%。无血清与10%FBS培养GMSCs 24 h和48 h后增殖率差异无统计学意义(P>0.05);但72 h后10%FBS增殖率高于无血清培养,差异有统计学意义(P<0.05)。无血清与10%FBS培养GMSCs抑制单个核细胞增殖的抑制率差异无统计学意义(P>0.05)。结论无血清培养GMSCs生物学性状及免疫调节能力与10%FBS培养GMSCs无明显区别,可用于对GMSCs培养,以避免有血清培养对后续细胞免疫治疗的潜在危害。

miR-23b对人肝癌细胞恶性表型及其对仑伐替尼敏感性的影响

目的探讨miR-23b对人肝癌细胞恶性表型及其对仑伐替尼敏感性的影响。方法人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721和QGY-7703细胞分别转染miR-23b mimic及其对照,CCK-8与EdU实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化情况,管腔形成实验检测细胞的血管生成拟态情况。组间均数比较采用t检验进行分析。结果CCK-8结果显示,转染120 h后miR-23b mimic组的肝癌细胞HepG2和SMMC-7721,其A值分别为0.325±0.011和0.537±0.026,明显低于对照组的0.430±0.017和0.752±0.051(P值均<0.05)。Transwell实验结果显示,miR-23b mimic组肝癌细胞HepG2和SMMC-7721的细胞迁移数为(517.220±32.873)个和(242.327±20.793)个,显著低于对照组的(724.130±15.142)个和(424.432±27.212)个(P值均<0.01);同时miR-23b mimic组的细胞侵袭数为(55.671±7.514)个和(64.670±6.011)个,显著低于对照组的(124.320±11.782)个和(156.204±12.501)个(P值均<0.01)。管腔形成实验显示,miR-23b mimic组肝癌细胞QGY-7703和SMMC-7721的成管分支数为(489.824±42.035)个和(435.201±44.143)个,明显低于对照组的(878.620±31.618)个和(785.430±38.723)个(P值均<0.01)。并且,EdU结果显示miR-23b与仑伐替尼联合用药后,miR-23b mimic组肝癌细胞HepG2和SMMC-7721的EdU染色阳性率为32.905%±1.342%和24.811%±0.820%,显著低于对照组的52.623%±2.441%和38.702%±1.312%(P值均<0.05)。结论miR-23b可抑制人肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和血管拟态形成,并增强人肝癌细胞对仑伐替尼的药物敏感性。

地西他滨联合丙戊酸钠对白血病细胞株HL-60促凋亡和分化的影响

目的探讨地西他滨(DCA)和丙戊酸钠(VPA)联用对白血病细胞株HL-60促凋亡和分化诱导的协同作用。方法白血病细胞株HL-60分别与以下药物终浓度组作用48 h:对照组,DCA单药A组(1.0μmol·L^(-1)),DCA单药B组(4.0μmol·L^(-1)),VPA单药组(2.0 mmol·L^(-1)),联合用药A组(IDCA 1.0μmol·L^(-1)+VPA 2.0 mmol·L^(-1)),联合用药B组(DCA 4.0μmol·L^(-1)+VPA2.0 mmol·L^(-1))。应用Annexin V-FTTC/PI标记法检测早期凋亡率,流式细胞术检测CD34、CD117平均荧光强度(MFI)以及CD11b、CD14表达率。结果联合用药A、B组的凋亡率高于其各自的单药组,差异具有高度统计学意义(P<0.01);联合用药A、B组的CD117和CD34 MFI低于其各自的单药组,差异具有高度统计学意义(P<0.01);联合用药A组的CD11b和CD14表达率以及联合用药B组的CD11b表达率均低于其各自的单药组,差异具有高度统计学意义(P<0.01)。结论白血病细胞株HL-60中VPA能显著增强DCA的促凋亡分化作用。

电离辐射对男性放射人员血清中甲状腺激素和睾酮水平的影响

目的 探讨不同剂量电离辐射对舟山地区男性放射人员血清中甲状腺激素和睾酮（TS）水平的影响.方法 测定168例男性放射人员血清中甲状腺功能和TS水平,按工作岗位及工龄进行分组比较,以39名健康男性为对照.结果 在X线组中,游离甲状腺素（FT4）和TS水平在不同工龄段间的差异有统计学意义（t=1.998,P〈0.05;t=2.067,P〈0.05）;在MRI组中,F14在不同工龄段间中的差异亦有统计学意义（t=2.920,P〈0.05）.在～20年工龄组中,CT组的游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、FT4,X线组的三碘甲状腺原氨酸（T3）、甲状腺素（T4）、FT3、TS,MRI组的FT3、FT4均与～20年工龄的对照组的对应指标存在统计学意义（P〈0.05）;在21～年工龄组中,CT组的T4、FT3,X线组的T3、FT3,MRI组的FT均与21～年对照组的指标有统计学意义（P〈0.05）.结论 电离辐射能引起以FT3为主的甲状腺激素的变化,中剂量短期电离辐射可能会引起TS水平的升高.

社区获得性肺炎与经常吸烟者外周血清microRNAs差异表达

目的探讨社区获得性肺炎与经常吸烟者外周血清微小RNA(microRNAs)差异表达。方法采用基于Taqman探针的荧光定量PCR法检测23例社区获得性肺炎、20例经常吸烟者及40例不吸烟健康人外周血清6种miRNAs (miR-210、miR-182、miR-183、miR-125a-5p、miR-126、let-7e)表达。结果社区获得性肺炎患者外周血清miR-182表达明显高于对照组,而miR-125a-5p、miR-126和let-7e则明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而与经常吸烟者比较,社区获得性肺炎患者外周血清miR-182和miR-210表达明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。应用外周血清miR-182、miR-125a-5p、miR-126和let-7e区分社区获得性肺炎和健康对照的曲线下面积(AUC)分别为0.997、0.755、0.762、0.760,应用外周血清miR-182、miR-210区分社区获得性肺炎和经常吸烟者的AUC分别为0.783、0.805(P<0.05)。结论社区获得性肺炎患者具有不同于对照组和经常吸烟者特异性的外周血清miRNAs表达,miR-182、miR-125a-5p、miR-126、let-7e和miR-210可用来辅助诊断社区获得性肺炎。