组织微环境中细胞外囊泡的分离纯化及其理化特征

目的通过对比不同方法抽提的不同组织中的细胞外囊泡的差异和特点,探寻组织中细胞外囊泡的分离纯化方法,为组织微环境中细胞外囊泡的功能和机制研究奠定基础。方法采用胶原酶消化法对肾脏、前列腺、皮肤和胃4种组织进行脱细胞处理,制备细胞外基质悬液,分别采用Qiagen外泌体抽提试剂盒、SBI外泌体抽提试剂盒及超速离心法(UC)抽提细胞外囊泡,然后使用ATS粒度分析仪q Nano技术检测细胞外囊泡的粒径和浓度等。结果采用3种方法对4种组织的细胞外基质悬液进行抽提,均可获得纯化的细胞外囊泡,主要囊泡类型为外泌体。不同组织中细胞外囊泡粒径分布存在一定的差异,但粒径大小差异无统计学意义(P>0.05)。等质量组织中均以UC抽提得到的细胞外囊泡浓度最高,与另外2种方法相比差异有统计学意义(P<0.01);不同组织间比较,以前列腺和肾脏获得的细胞外囊泡浓度较高,而胃和皮肤较低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论不同组织中均以UC抽提得到的细胞外囊泡浓度最高;不同类型组织微环境中存在的细胞外囊泡的浓度有差异。