HNRNPA1基因在结直肠癌组织中高表达及其潜在的诊断和治疗价值

目的通过生物信息学和细胞实验探究HNRNP A1在结直肠癌中的临床意义及其在肿瘤组织中的表达情况。方法使用HPA、TIMER和GEPIA数据库,分析HNRNP A1在结直肠癌组织中的表达水平,并检验HNRNP A1与Ki-67/VEGFA在结直肠癌中表达的相关性。使用Kaplan-Meier Plotter数据库评估HNRNP A1 mRNA水平与结直肠癌患者生存率之间的联系。通过基因富集途径分析,预测HNRNP A1在结直肠癌中的潜在生物学作用。通过免疫组织化学(IHC)和Western blotting技术检测HNRNP A1在结直肠癌及其癌旁组织中的蛋白表达。利用TIMER数据库网站对HNRNP A1在免疫浸润细胞中的表达进行预测。使用慢病毒敲低RKO/Caco2细胞中HNRNP A1的表达;通过CCK-8实验检测细胞增殖,使用克隆形成实验检测HNRNP A1对细胞增殖能力的影响;利用细胞划痕实验和Transwell迁移实验评估两组细胞(RKO/Caco2-nc、RKO/Caco2-sh)的迁移能力。最后验证HNRNP A1小分子抑制剂(VPC-80051)对肿瘤细胞增殖的影响。结果在结直肠癌(CRC)肿瘤组织中HNRNP A1的表达显著上调并与患者的不良预后显著相关(P<0.01)。TIMER数据库的分析结果指出,HNRNP A1与肿瘤微环境中的免疫细胞之间存在一定的相关性。根据GEPIA数据库的分析,CRC组织中HNRNP A1、MKI67和VEGFA的表达均较高(P<0.05),且HNRNP A1与这两者之间存在正相关关系。通过Kaplan-Meier Plotter进行的生存分析表明,在CRC中,HNRNP A1的高表达预示着较差的总生存期(P=0.0081)和无进展生存期(P=0.012)。基因富集通路分析的数据显示,HNRNP A1可能参与到多个与CRC进展相关的生物途径中。HNRNP A1影响RKO/Caco2细胞的增殖和迁移能力,对照组(RKO/Caco2-nc)的增殖能力、克隆形成能力和迁移能力均优于实验组(RKO/Caco2-sh),差异有统计学意义(P<0.05);HNRNP A1小分子抑制剂(VPC-80051)可以有效抑制结直肠癌增殖活性,并具有时间和浓度依赖性;IHC显示HNRNP A1在结直肠癌中高表达,且与肿瘤分期有密切关系(P<0.0001)。结论HNRNP A1基因在CRC组织中表达较高,并可调节细胞的增殖和迁移能力,与不良预后密切相关,同时HNRNP A1小分子抑制剂(VPC-80051)也可以抑制结直肠癌细胞的增殖,因而可作为CRC治疗过程中新的潜在治疗靶点。

SPHK1靶向NF-κB信号通路调控胃癌细胞的迁移与侵袭

目的探讨鞘氨醇激酶-1(SPHK1)在胃癌(GC)组织中的表达及其靶向核因子-κB(NF-κB)调控GC细胞迁移和侵袭能力的分子机制。方法基于TIMER2.0、GEPIA与HPA数据库分析SPHK1在GC组织中的表达。使用Kaplan-Meier Plotter数据库预测SPHK1与GC患者预后的关联。利用IHC检测GC及癌旁组织中SPHK1和MKI67的表达并分析两者相关性。运用Western blotting与qRT-PCR检测GC各细胞系中SPHK1蛋白及mRNA水平。基因富集通路数据库检索SPHK1对GC进展的生物学功能。使用慢病毒敲低HGC-27/过表达MGC-803细胞中SPHK1的表达;采用细胞划痕实验探究SPHK1对GC细胞迁移能力的影响;Transwell实验探究SPHK1对GC细胞迁移和侵袭能力的作用;通过Western blotting检测各蛋白表达情况。体内成瘤实验中,将裸鼠随机分为shNC组、shSPHK1组、oeNC组与oeSPHK1组,利用稳转株验证SPHK1的促癌作用。结果生物信息学表明SPHK1在GC组织中显著高表达(P<0.001);同时高表达的SPHK1预示着较差的总生存期(P<0.001)和进展后总生存期(P<0.001)以及更差的无复发生存期(P<0.001)。IHC结果表明GC组织中SPHK1与MKI67表达明显上调(P<0.001)且呈正相关(P<0.001)。基因富集通路数据库提示,SPHK1参与GC中的细胞黏附、迁移及血管生成等,且NF-κB参与GC进展(P<0.05)。细胞实验数据显示,抑制SPHK1减弱GC细胞的迁移和侵袭能力,而过表达SPHK1会产生相反的结果(P<0.01);SPHK1正向调节磷酸化P65(p-P65)、血管内皮生长因子(VEGFA)和白细胞介素(IL-17)蛋白表达(P<0.05);利用PDTC阻断NF-κB信号通路可削弱SPHK1促进的GC细胞迁移与侵袭能力以及各蛋白表达水平(P<0.01);动物实验表明,与NC组相比,shSPHK1组肿瘤大小和质量明显减小,而oeSPHK1组显著增加(P<0.001)。结论SPHK1可靶向NF-κB信号通路表达进而调控GC细胞的迁移与侵袭,提示SPHK1可能是GC进展的潜在诊断分子标志物。