生物样本库——转化医学的基础

转化医学是近年来生物医学领域的新概念[1,2],这种新型的医学转化模式基于基础研究与临床应用的双向转化[3],使人们更准确地理解环境和遗传分子之间的相互作用,精确地描绘疾病发生的本质,从而找到疾病预防、早期诊断、治疗的最佳方法,达到个体化治疗。

荧光素标记噬菌体抗体的制备及其应用

目的:通过直接荧光素标记方法制备荧光标记的噬菌体单链抗体,并且对于肿瘤细胞的免疫学活性进行检测。方法:用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)和四甲基异硫氰酸罗丹明(tetramethyl rhodamine isothio cyanate,TRITC)标记的单链噬菌体抗体对肿瘤细胞进行直接染色,通过荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜检测观察单链抗体与肿瘤细胞及白细胞的荧光显色情况。结果:荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜检测证实标记荧光素FITC、TRITC的噬菌体抗体与肿瘤细胞有较好的特异性结合,主要结合在细胞膜的表面。比较荧光的强度,与白细胞结合活性有差异。结论:用荧光素标记的噬菌体单链抗体能够作为检测试剂用于细胞、组织的检测,具备应用于免疫检测分析的价值,进一步证实所筛选的抗肿瘤细胞噬菌体抗体具有较好的免疫生物学活性。

负性富集食管鳞癌患者外周血中循环肿瘤细胞的检测及其意义

目的:负性富集并鉴定食管鳞癌患者外周血循环肿瘤细胞(CTCs)的数量及表型特征,探讨CTCs在食管鳞癌临床疗效评价和预后判断等方面的应用价值。方法:通过免疫磁珠偶联CD45抗体除去外周血白细胞,富集外周血CTCs的"负性策略",用荧光鉴定CTCs上皮标志及细胞核特征,用统计学方法分析CTCs数量改变与患者临床参数与治疗效果、预后的相关性。结果:59例食管鳞癌患者术前外周血CTCs的阳性率为79.7%(47/59),7.5ml外周血CTCs平均检出数目为7.83(0~72)个。其中淋巴结是否转移、肿瘤TNM分期、肿瘤浸润程度和分化程度、不同各组CTCs检出的差异,具有统计学意义(P<0.05)。采用多因素Cox回归分析,术前CTCs≥5及淋巴结转移是影响预后的显著因素。结论:免疫磁珠负性富集结合免疫荧光鉴定的方法可以有效地分离和鉴定食管癌外周血CTCs。初步研究提示,外周血中CTCs与食管鳞癌分期、进展及其预后相关。

用不同方法从大容量噬菌体抗体库中筛选抗完整食管癌细胞的单链抗体

目的:初步探索从天然的单链大容量噬菌体抗体库中筛选肿瘤细胞抗体的技术策略。方法:通过两种方法,即2%多聚甲醛固定细胞筛选法(PF)及活细胞直接筛选法(NF),经过4轮"吸附-洗脱-扩增"的淘筛过程,对食管癌KYSE-170细胞进行筛选,得到抗食管癌细胞的噬菌体抗体,完善了噬菌体抗体库筛选完整细胞的特异性抗体的技术策略。并且进一步制备了其可溶性抗体。结果:活细胞NF组的筛选阳性率高于2%多聚甲醛固定PF组,筛选特异性抗体的阳性率分别为25.00%和12.50%,两组的差异具有统计学意义。结论:利用单链大容量抗体库可以采用不同的筛选方法成功制备与肿瘤细胞结合的噬菌体抗体,为今后的研究和应用奠定基础。

噬菌体单链抗体碱性磷酸酶细胞ELISA检测方法的建立

目的建立噬菌体单链抗体碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)细胞ELISA检测方法,以期排除外周血中白细胞的干扰,将筛选到的噬菌体抗体用于临床样本的检测。方法从大容量噬菌体抗体库中筛选与食管癌细胞结合的噬菌体单链抗体,制备食管癌细胞KYSE-170和EC109鉴定板及白细胞鉴定板,采用ALP细胞ELISA法分析筛选到的噬菌体抗体与两种食管癌细胞及白细胞的结合活性,同时与辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase,HRP)细胞ELISA法进行比较,以抗卵清蛋白(ovalbumin,OA)为阴性对照。结果经ALP细胞ELISA法检测,筛选到的噬菌体抗体1、2、3均可与KYSE-170和EC109细胞结合,A405值在检测范围内;3个噬菌体抗体与不同食管癌细胞系的结合活性差异有统计学意义(P<0.001);抗OA抗体与两种食管癌细胞的结合活性明显低于3个噬菌体抗体,且差异有统计学意义(P<0.001);3个噬菌体抗体与白细胞结合的A405值在检测范围内,与食管癌细胞系的结合活性相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 ALP细胞ELISA法可鉴定噬菌体单链抗体,并可排除白细胞的干扰,有望应用于临床样本的检测。