曼氏裂头蚴6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的基因克隆、蛋白表达及转录水平分析

目的分析曼氏迭宫绦虫中6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(Sm 6PGDH)的潜在的生物学特征和获得纯化蛋白。方法通过NCBI和ExPASy网站中在线软件,预测Sm 6PGDH基因序列的生物信息学特征。通过PCR技术扩增得到Sm 6PGDH的全长序列和构建pET-28a(+)-Sm 6PGDH重组质粒,利用双酶切和测序手段鉴定重组质粒。利用western blot鉴定重组蛋白和定量PCR分析在不同浓度葡萄糖培养的裂头蚴体内的转录水平。结果Sm 6PGDH蛋白由491个氨基酸组成,理论相对分子质量约为53.84 kDa。该蛋白分子中无信号肽。Sm 6PGDH序列与绦虫、人的同源基因一致性分别为75%和65%以上。Sm 6PGDH氨基酸序列中具有39个磷酸化位点、1个O-糖基化位点和9个B细胞线性表位。通过原核蛋白表达,成功得到可溶性的融合蛋白,并且在不同浓度葡萄糖培养的裂头蚴体内Sm 6PGDH的转录水平升高。结论构建了Sm 6PGDH重组质粒并获得纯化蛋白,为在裂头蚴的糖代谢的规律研究中提供了物质保障。