胚胎干细胞系向造血干细胞定向分化的研究

目的建立并稳定和优化诱导胚胎干细胞（ES）向造血干细胞定向分化的方法。方法应用体外胚胎干细胞分化系统，观察了多种因素对原始细胞成集落细胞（BLast Colony-Forming Cell，BL-CFC）形成集落的影响。结果植入不同数量的３．５d胚体衍生的细胞与BL-CFC集落生成数量之间呈高度相关，大约每植入１００个３．５d胚体衍生的细胞，能生成１．０８～１．２个BL-CFC集落；２０％与３０％浓度的D４T条件培养液促BL-CFC集落生成作用的效率最高；单用D４T条件培养液、EPO或KL对BL-CFC集落的生长无明显促进作用（P＞０．０５）；但单用VEGF对BL-CFC集落的生成有极显著的促进作用（P＜０．００１）。但当这四种因素两两组合使用时，均比单用VEGF具有明显的促BL-CFC集落生成作用。在VEGF＋KL＋D４T合用的基础上加用EPO，则促BL-CFC集落生成作用大大增强，与其它各组相比较，BL-CFC集落数极显著地增多（P＜０．００１）。大约每植入１００个３．５d胚体衍生的细胞，能生成１．５～１．６个BL-CFC集落。结论影响BL-CFC生长的主要因素可能为VEGF；D４T条件培养液具有强大的协同作用；EPO和KL为诱导BL-CFC向造血细胞系分化的主要因素；３．５d胚体衍生的细胞比３．２５d胚体衍生的细胞对各种刺激因子反应更敏感。

卵黄囊干细胞向粒-单系造血祖细胞的定向诱导分化

目的 :观察卵黄囊干细胞向粒 单系造血祖细胞 (CFU GM )的定向诱导分化 ,稳定和优化检测卵黄囊CFU GM的方法。方法 :应用体外琼脂培养法 ,观察多种因素对小鼠卵黄囊干细胞形成粒 单系造血祖细胞集落形成单位的影响 ;应用染色压片法对所生成的集落性质作鉴定。结果 :植入不同数量的E7.5～ 8.5d的卵黄囊干细胞与CFU GM生成数量之间呈高度正相关 ;在接种相同数量的卵黄囊细胞数的情况下 ,DMEM培养体系生成的CFU GM数明显多于IMDM培养体系生成的集落数 (P <0 .0 1 ) ;马血清 (HS)组优于胎牛血清 (FBS)组 (P <0 .0 1 ) ;与GM CSF相比 ,WEHI 3条件培养液 (W3 CM)能明显促进卵黄囊CFU GM的生成 (P <0 .0 1 )。采用完整琼脂凝块压片法对卵黄囊细胞所形成的集落进行鉴定表明为粒 单系细胞集落。结论 :卵黄囊干细胞具有向CFU GM分化的能力 ;卵黄囊干细胞CFU GM诱导体系中各组分变化均可影响CFU GM的集落生成率 ;以DMEM ,GM CSF或W 3 CM ,HS为组分的体系可稳定地检测卵黄囊细胞CFU