海南红树林淡紫拟青霉胞外多糖抗HSV-1作用研究

目的探讨红树林淡紫拟青霉胞外多糖体内抗单纯疱疹病毒-1(HSV-1)作用。方法选取昆明种小鼠75只,随机分为正常对照组,病毒对照组,低、中、高剂量组,每组15只。正常对照组给予DMEM 0.5 ml腹腔注射,其余4组给予HSV-10.5 ml腹腔注射。次日低、中、高剂量组小鼠分别经腹腔注射淡紫拟青霉胞外多糖6、8、10 g/(kg·d);正常对照组和病毒对照组腹腔注射生理盐水0.5 ml,连续注射7 d。观察并比较各组小鼠肝脏病理变化;5组小鼠脑组织匀浆上清液接种于Vero细胞,观察其细胞病变情况;提取同一部位脑组织病毒基因组DNA,检测病毒DNA相对含量及血清干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-12(IL-12)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果与正常对照组比较,病毒对照组和低剂量组小鼠肝脏汇管区大量炎性细胞浸润,部分肝细胞肿胀;中剂量和高剂量组炎性细胞浸润明显减少。与病毒对照组相比,中、高剂量组脑组织HSV-1病毒DNA相对含量减低(P<0.01),低剂量组病毒DNA相对含量与病毒对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组比较,其余4组小鼠血清IFN-γ、IL-12、TNF-α水平均显著升高(P<0.01);高剂量组IFN-γ水平高于病毒对照组和低、中剂量组(P<0.01);中、高剂量组IL-12水平高于病毒对照组和低剂量组(P<0.01)。与病毒对照组比较,低、中、高剂量组TNF-α水平均显著降低,且中、高剂量组低于低剂量组(P<0.01)。结论红树林淡紫拟青霉胞外多糖具有一定抗HSV-1作用,可能是通过抑制病毒复制、刺激IFN-γ和IL-12分泌,抑制TNF-α产生完成的。

海南红树林淡紫拟青霉胞外多糖提取条件的优化

为了探讨影响红树林淡紫拟青霉胞外多糖提取的因素,确定最佳提取方案,设置不同的发酵液浓缩倍数、三氯乙酸用量等因素,设计单因素实验测定多糖提取最佳条件。然后设计正交试验,检测多糖在不同条件下的提取率,以获得最佳提取工艺。结果发现,发酵液浓缩3~5倍时多糖提取率最高,10%的三氯乙酸对蛋白质脱除效果最好;正交试验表明影响多糖提取的因素依次为乙醇用量、沉淀时间和温度,最优方案为3倍95%乙醇、4℃沉淀24 h。该条件下,多糖提取率可达57.835%±1.206%。研究结果为红树林淡紫拟青霉胞外多糖的提取研究提供了参考。

核酸负载纳米金的改良ELISA高灵敏检测平台的构建

目的构建基于核酸负载纳米金(AuNPs)的酶联免疫吸附试验(ELISA)高灵敏检测平台。方法将生物素化DNA通过金-硫键结合在AuNPs上,制备纳米金生物素化DNA(AuNPs@DNA-B)信号探针,在ELISA检测目标分子的基础上,使信号探针通过链霉亲和素结合于夹心复合物中的生物素化抗体上,发挥信号放大作用,实现对目标分子的高灵敏检测。该研究选用血清水平极低的抗体免疫球蛋白(Ig)E作为目标分子,验证该检测平台的可行性。结果通过紫外光谱扫描、透射电镜观察,发现制备的AuNPs颗粒大小均匀、分散性好。在最优条件下,该方法对选定的目标分子IgE的最低检测限为0.012 ng/mL;批内变异系数<2.0%,批间变异系数<6.1%;该方法的回收率为(99.956±0.168)%~(104.733±3.376)%,传统ELISA为(99.100±0.529)%~(100.044±0.276)%,差异无统计学意义(P>0.05)。其检测灵敏度与化学发光法相近。结论该研究成功构建了基于AuNPs@DNA-B的信号放大ELISA高灵敏检测平台。

红树林淡紫拟青霉EPS对HSV-1颅内感染小鼠脑组织NF-κB表达的影响

目的探讨红树林淡紫拟青霉胞外多糖(EPS)对单纯疱疹病毒1型(HSV-1)颅内感染小鼠脑组织核因子κB(NF-κB)表达的影响。方法除阴性对照组外,其他各组小鼠均颅内注射病毒建立HSV-1颅内感染模型,次日起实验组分别经腹腔给予低剂量、中剂量和高剂量EPS干预,药物对照组用阿昔洛韦干预,病毒对照组和阴性对照组均用生理盐水干预,连续注射7 d。观察各组小鼠病变、死亡情况,免疫组织化学检测脑组织NF-κB表达情况,RT-qPCR检测脑组织NF-κB mRNA表达。结果除病毒对照组小鼠死亡率明显高于阴性对照组(P<0.05)外,其他各组间无明显差异(P>0.05)。免疫组织化学和RT-qPCR检测均发现,与病毒对照组相比,实验组小鼠脑组织NF-κB表达均有一定程度下调,其中高剂量EPS组下调最明显(P<0.05),低剂量、中剂量EPS组下调不明显(P>0.05)。低剂量、中剂量EPS组NF-κB表达与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),高剂量EPS组与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论红树林淡紫拟青霉EPS具有一定抑制HSV-1颅内感染小鼠脑组织NF-κB表达的作用,且该抑制作用呈一定剂量依赖性。