金丝桃苷对糖尿病肾病大鼠TGF-β1/smad通路及肾上皮间质转化的影响

目的:探究金丝桃苷(HP)对糖尿病肾病(DN)大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)/smad通路及肾上皮间质转化(EMT)的影响。方法:采用高脂饲料喂养及腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建DN大鼠模型,随机分为模型(M)组、阳性药物罗格列酮(RGZ)组、HP低(HP-L)、中(HP-M)、高剂量(HP-H)组,每组12只;另取正常非DN大鼠12只为对照组(NC组),按照各组给药剂量连续灌胃处理8周。采集各组大鼠血清、24 h尿液及双侧肾组织,检查24 h尿微量白蛋白(UAlb)变化及空腹血糖(FBG)、尿肌酐(Ucr)、尿素氮(BUN)水平;苏木精—伊红染色(HE)观察大鼠肾脏组织病理变化;Masson染色分析大鼠肾脏纤维化程度;免疫印记法检测肾组织EMT、TGF-β1/smad通路相关蛋白表达情况。结果:与NC组比较,M组大鼠FBG、UAlb、Ucr、BUN水平显著升高(P<0.05),肾组织病变严重,肾小球体积显著增大,肾脏纤维化面积显著增多,肾组织E-钙黏蛋白(E-cadherin)、smad7蛋白水平显著降低,α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(Fibronectin)、TGF-β1、smad2、smad3蛋白水平显著升高(P<0.05);与M组比较,HP-L组、HP-M组、HP-H组大鼠FBG、UAlb、Ucr、BUN水平均显著降低,肾组织病变及肾纤维化程度得到一定改善,肾组织E-cadherin、smad7蛋白水平显著升高(P<0.05),α-SMA、Fibronectin、TGF-β1、smad2、smad3蛋白水平显著降低,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:HP可减轻DN大鼠肾脏纤维化、抑制EMT过程,可能与抑制TGF-β1/smad通路有关。

lncRNA ZFAS1吸附miR-34b-5p抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)锌指结构反义转录本(ZFAS)1、miR-34b-5p对高糖诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的影响。方法将HK-2细胞分为对照组(Con,5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,25 mmol/L葡萄糖)、HG+pcDNA组、HG+pcDNA-ZFAS1组、HG+anti-miR-NC组、HG+anti-miR-34b-5p组、HG+pcDNA-ZFAS1+miR-NC组、HG+pcDNA-ZFAS1+miR-34b-5p组。试剂盒检测白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,流式细胞术检测细胞凋亡,实时定量PCR(RT-qPCR)检测ZFAS1和miR-34b-5p表达水平。双荧光素酶报告实验确定ZFAS1和miR-34b-5p的靶向关系。结果高糖诱导后HK-2细胞凋亡率、培养液中IL-6和TNF-α水平显著升高,ZFAS1表达显著降低,miR-34b-5p表达显著升高(P<0.05)。过表达ZFAS1后,高糖诱导的HK-2细胞培养液中IL-6和TNF-α水平显著降低,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。抑制miR-34b-5p表达后,高糖诱导的HK-2细胞培养液中IL-6和TNF-α水平显著降低,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。ZFAS1靶向负性调控miR-34b-5p表达。过表达miR-34b-5p能够降低ZFAS1过表达对高糖诱导的HK-2细胞损伤的影响(P<0.05)。结论lncRNA ZFAS1通过吸附miR-34b-5p可减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤。