HTK液3种不同灌注方法对兔心脏保存移植后心肌组织ICAM和IL-17表达的影响

目的研究HTK液3种不同灌注方法(单纯低温浸泡、持续灌注与间断2 h灌注)对同种异体兔心保存移植后心肌组织细胞间黏附分子(ICAM)-1和白细胞介素(IL)-17表达的影响,探讨HTK液灌注方式对心脏移植后急性排斥反应的影响机制。方法选择健康2月龄新西兰兔共18对36只,雌雄各半,体质量(2.15±0.33)kg,随机分为3组,即单纯低温浸泡组(单纯组)5对、持续灌注组(持续组)5对和间断2 h灌注组(间断组)8对。供体心脏离体后经主动脉根部灌注HTK液停跳保护心脏,4℃保存心脏8 h,根据改良Ono术式完成心脏移植模型,取出供体心脏。制备石蜡切片,光学显微镜下HE染色观察组织和细胞的病理改变,分别采用实时定量RT-PCR和Western blot检测组织ICAM-1和IL-17水平,TUNEL试剂盒检测细胞凋亡率。结果HE染色发现,3组大部分心肌组织结构完整,伴细胞水肿、黏液样变性或坏死,炎性细胞浸润、脂肪化生及小血管生成。半定量分析发现,间断组细胞水肿、炎性细胞和小血管数目明显少于持续组,单纯组最多(P<0.05)。定量检测ICAM-1和IL-17 mRNAs和蛋白表达水平发现,间断组显著低于持续组,单纯组最高(P<0.05)。间断组细胞凋亡率低于持续组,单纯组最高(P<0.05)。结论HTK液不同灌注方法对同种异体兔心移植后的急性排斥反应影响不同,间断2 h灌注可明显降低受体心肌ICAM-1和IL-17表达,抑制细胞凋亡效应最明显。

HTK液三种不同方法对兔心保存移植后复跳效果的研究

目的比较组氨酸-色氨酸-酮戊二酸(HTK)液单纯低温浸泡、持续灌注与间断灌注对离体兔心保存移植后的复跳效果。方法健康2月龄新西兰兔共36只,随机分为3组,即单纯低温浸泡组(单纯组)10只、持续灌注组(持续组)10只和间断2 h灌注组(间断组)16只。麻醉后取出心,建立HTK液经主动脉根部灌注停跳保护心,悬挂于Langendorff灌注模型上,K-H缓冲液平衡灌注510 min心搏动达稳定状态;根据分组灌注HTK液56 ml(30 ml/kg)使心停搏,4℃保存心8 h。连接压力传感器,收集冠脉流出液,比较各组心复跳时间等相关指标。比较3组心肌组织形态学差异。结果离体心均成功复跳,间断组复跳时间、1 min和5 min心律失常评分、平均心率、心律失常发生率以及肾上腺素注射次数均小于其它两组,单纯组最大(P<0.05)。复跳后间断组心肌酶CK-MB和肌钙蛋白I水平低于其它两组,单纯组最高(P<0.05)。复跳5 min后间断组左心室收缩压和冠状静脉流量高于其它两组,单纯组最低(P<0.05)。间断组心肌细胞水肿最轻,炎性细胞浸润的程度最低,而单纯组最严重。结论间断2 h灌注HTK液较持续灌注或单纯低温浸泡对降低离体兔心复跳后心律失常的发生和心肌损伤,以及改善左心血流动力学方面表现更加突出,为一种简单、高效、安全的移植心保存方法。