载FGF10的多孔明胶微球对脊髓损伤大鼠的神经修复作用机制研究

目的探讨载成纤维生长因子10(FGF10)的多孔明胶微球(GMSs)对脊髓损伤大鼠神经保护作用的机制。方法20只健康雄性SD大鼠(220~250g)随机分为假手术组、脊髓损伤组、FGF10组、FGF10-GMSs组,每组各5只。假手术组只咬除T_(9)~T_(10)棘突及椎板等骨性组织,不造成脊髓损伤。其余3组造成脊髓损伤后,用Hamilton微量注射器向FGF10组大鼠的损伤注入20μL FGF10,向FGF10-GMSs组大鼠的损伤处注射20μL FGF10负载的多孔明胶微球,脊髓损伤组和假手术组的大鼠注射等量的生理盐水。收集大鼠胸椎(T_(9)~T_(10))脊髓组织,分别采用离体释放试验评估FGF10-GMSs的持续释放。使用大鼠脊髓损伤评分(BBB评分)和斜坡测试评估FGF10-GMSs对SCI大鼠的运动功能改善效果。使用HE、Nissl染色、TUNEL试验及Western blot评估FGF10-GMSs的治疗效果。结果离体释放实验结果显示,普通明胶微球会在短时间内迅速释放FGF10,多孔明胶微球持续而缓慢地释放FGF10,未在初始48 h内观察到显著的爆发释放模式。BBB评分结果显示,与脊髓损伤组(5分)相比,第21天FGF10-GMSs组(12分)和FGF10组(9分)的大鼠均表现出良好的运动功能恢复(P<0.05),斜坡测试结果与BBB评分结果一致,FGF10组和FGF10-GMSs组均获得了明显的行为改变。HE、Nissl染色结果显示FGF10-GMSs组内的坏死、核崩解和浸润性多核白细胞数量较少,在脊髓腔内坏死组织的比例显著降低。Western blot测定结果显示FGF10-GMSs组中的细胞凋亡抑制程度比FGF10组中更加明显。TUNEL试验也产生类似的结果,相比FGF10组和脊髓损伤组,FGF10-GMSs组具有更加明显的抑制细胞凋亡的作用。结论FGF10-GMSs通过抑制神经细胞的凋亡,从而达到保护脊髓损伤大鼠神经细胞的作用,为脊髓损伤的治疗提供新的思路,对提高脊髓损伤的预后具有十分重要的意义。

放射性脑损伤与缺血缺氧性脑损伤细胞差异分子靶标筛选

目的探讨放射性脑损伤(RBI)与缺血缺氧性脑损伤(HIBI)细胞差异分子靶标。方法从GEO数据库中找到相应的数据集后使用GEO2R筛选差异表达基因。并对放射和对照、缺氧缺血及对照之间的通路富集情况做KEGG和GO分析。而后使用PPI分析找出几个关键基因及其蛋白靶标。而后以人星型胶质细胞作为研究对象构建RBI及HIBI模型。在损伤刺激后16 h收集各实验组总细胞和上清中漂浮的坏死细胞,通过RT-PCR和蛋白印迹法分析照射前后以及缺血缺氧处理前后关键基因及其蛋白表达水平之间的差异。结果照射与对照星型胶质细胞共筛选出差异基因237个,其中上调基因95个,下调基因142个。KEGG富集分析结果显示,照射后星型胶质细胞与对照细胞有20条显著差异性富集信号通路(P<0.05)。GO功能分析照射后星型胶质细胞与对照细胞差异显著富集条目62个,其中20个(30.8%)与生物过程(BP)相关,22个(35.4%)与细胞组分(CC)相关,20个(30.8%)与分子功能(MF)相关。缺血缺氧处理与对照星型胶质细胞共筛选出差异基因67个,其中上调基因38个,下调基因29个。KEGG通路富集分析结果显示,缺血缺氧处理后星型胶质细胞与对照细胞有22条显著差异性富集信号通路(P<0.05)。通过差异表达基因的GO功能分析得到显著富集条目35个,其中15个(42.8%)与BP相关,10个(28.6%)与CC相关,10个(28.6%)与分子功能MF相关。STRING分析发现照射后差异表达基因的关键节点基因为EGFR,缺血缺氧处理后差异表达基因的关键节点基因为PHD3。照射组EGFR基因mRNA及蛋白表达水平均显著高于其他两组(P<0.05),缺氧组PHD3基因mRNA及蛋白表达水平均显著高于其他两组(P<0.05)。结论EGFR、PHD3在放射及缺氧缺血处理后的星型胶质细胞中表达有显著差异。

ALDH1A1在肝细胞癌中的表达及临床诊断价值探讨

目的:分析乙醛脱氢酶1A1 (ALDH1A1)在肝细胞癌(HCC)与正常肝脏中的表达差异,探讨ALDH1A1在HCC诊断中的价值。方法:实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测人肝癌细胞株HepG2与人正常肝细胞株LO2中ALDH1A1 mRNA及蛋白的表达情况;免疫组织化学法(IHC)检测49例HCC及其癌旁组织中ALDH1A1的表达情况。结果:人肝癌细胞株HepG2中ALDH1A1 mRNA及蛋白的表达均明显高于人正常肝细胞株LO2 (P < 0.05, P < 0.0001);HCC组织中ALDH1A1的表达明显高于癌旁组织(P < 0.05)。结论:ALDH1A1在HCC中的表达升高,ALDH1A1有望作为诊断HCC的有效分子标志物。

类表皮生长因子域7促进颅脑损伤模型大鼠脑微循环的修复与重建

背景:研究表明血管内皮细胞受损与创伤性脑损伤的血脑屏障功能障碍密切相关,类表皮生长因子域7(EGF-likedomain7,EGFL7)是促进血管生成的重要因子,尚不可知EGFL7能否通过激活脑血管新生从而促进大脑创伤修复。目的:探讨EGFL7促进脑损伤后大鼠损伤脑组织中血管新生的具体机制。方法:健康成年雄性SD大鼠42只,随机分为2组,颅脑损伤组(n=36)运用改良Feeney法撞击大鼠脑硬膜建立颅脑损伤模型,假手术组(n=6)仅暴露完整脑硬膜;依照损伤后取标本时间分为颅脑损伤1,6,24h以及3,7,14d共6个亚组,每亚组各6只。经过神经功能损伤评分可用后,取挫伤灶及周围脑组织进行后续实验。另取18只SD大鼠随机分为3组,建立颅脑损伤模型,颅脑损伤1h后运用立体定向注射仪分别向大鼠脑室内注射腺病毒rAd-vector、rAd-EGFL7及rAd-EGFL7+PI3K/Akt通路抑制剂LY294002,每组6只。干预12h后取材检测。结果与结论:①RT-PCR、Westernblot及免疫组织化学染色检测显示:颅脑损伤大鼠脑组织中EGFL7、CD34表达显著上调,且随损伤后时间的增加而上调,EGFL7在颅脑损伤3d达到最大(P<0.05),EGFL7与CD34两者的表达趋势相一致,微血管生成数目在颅脑损伤7d到达最高;②大鼠颅脑损伤后1h颅内rAd-EGFL7微量注射12h后,损伤脑组织中EGFL7、CD34表达显著上调(P<0.05),同时pAkt、cyclinD1显著增加,FOXO1显著下降(P<0.05);③大鼠颅脑损伤后颅内同时注射rAd-EGFL7和PI3K/Akt信号通路抑制剂12h后,EGFL7表达变化不明显,但CD34表达显著受抑制(P<0.05),同时微血管生成数目显著减少(P<0.05);④结果证实,EGFL7在脑损伤组织中表达上调,其高表达可能与损伤脑组织中血管生成相关。EGFL7过表达激活PI3K/Akt信号通路从而促进损伤脑组织中的血管新生。

类表皮生长因子域7在创伤性脑损伤后脑组织中的表达变化及意义

目的探讨类表皮生长因子域(EGFL)7在创伤性脑损伤(TBI)后脑组织中的表达变化及意义。方法研究采用大鼠TBI模型,分别通过Western印迹分析和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测TBI后1 h、6 h、24 h、3 d、7 d和14 d的EGFL7表达。采用免疫组化检测挫伤周围皮层和海马区的EGFL7、Ⅰ型跨膜蛋白(CD34)表达。应用Transwell小室技术研究EGFL7基因沉默对神经干细胞(NSC)和内皮细胞(HUVEC)共培养系统的CD34、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化(p)-AKT蛋白表达。结果EGFL7 mRNA和蛋白水平在TBI后24 h显著升高(P<0.05),第3天达峰值,并持续至少14 d(P<0.05)。免疫组化检测结果显示,与假手术组相比,TBI大鼠挫伤周围皮层和海马区EGFL7和CD34阳性细胞显著增加(P<0.01)。EGFL7-siRNA表达载体转染组NSC-HUVEC共培养系统的CD34、AKT、p-AKT、PI3K蛋白相对表达均较对照组显著降低(P<0.05)。结论EGFL-7可能通过PI3K/AKT通路参与TBI后神经干细胞的血管生成。