硅藻COX-Ⅰ区种属特异性PCR用于法医学溺死诊断

目的:对KEint2F和KEintR这一对COX-Ⅰ区特异性PCR引物应用于法医学溺死诊断的有效性进行研究。方法:取12例溺死尸体和5例非水中尸体的肺、肝组织,以及取落水区域水样及双蒸水,通过硝酸消化镜检法(镜检法)和种属特异性PCR检验法(PCR法)两种方法进行硅藻检验,对其硅藻的检出率进行对比。结果:PCR法比镜检法具有更高的硅藻检出率。结论:KEint2F和KEintR可作为法医学硅藻检验的特异性PCR引物用于法医学溺死的诊断。

海南地区地中海贫血产前基因诊断的临床研究

目的:研究检测α-地中海贫血及β-地中海贫血在产前基因诊断中的临床应用价值。方法:对孕妇夫妇携带地中海贫血的48例风险胎儿的羊水(或脐血)应用单管多重PCR体系和反向点杂交法,进行α-地中海贫血和β-地中海贫血基因诊断。结果:共检测出地中海贫血胎儿38例。其中α-地中海贫血14例,包括东南亚缺失型杂合子(--SEA/αα)2例,东南亚缺失型纯合子(--SEA/--SEA)8例,左缺失型杂合子(-α4.2/αα)1例,右缺失型杂合子(-α3.7/αα)2例,非缺失型点突变(ααT/αα)1例;β-地中海贫血24例,包括CD41-42杂合子16例,CD41-42纯合子2例,-28(A-G)杂合子3例,双重杂合子(IVS2nt654/CD41-42,-28(A-G)/CD71-72(+A),CD41-42/-α3.7)3例。其中10例重型地贫儿引产,1例重型地贫儿产后新生儿死亡,其余均足月分娩存活。所有病例经引产或正常分娩后留取脐带血,作地贫基因诊断,与产前诊断结果一致。结论:应用单管多重PCR体系及反向点杂交法能快速、准确进行α-和β-地中海贫血产前基因检测,这对于有效预防重型地中海贫血胎儿出生具有重大临床意义。

环孢素A及其在产科和生殖领域应用的研究

环孢素A(Cyclosporin A,CsA)是一种大环内酯类免疫抑制剂,广泛应用于器官移植后排斥反应和自身免疫性疾病的防治。近年对CsA在产科和生殖领域的应用展开了一系列研究,CsA不仅能从多方面诱导母胎免疫耐受,还能促进滋养细胞增殖、抑制凋亡,增强其运动、迁移和侵袭能力,从而对妊娠起到双重调节作用,有望成为原因不明型复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)的治疗药物。随着对其药效学机制的深入了解,CsA可能在辅助生殖技术中也具有应用价值。

103名医学生的职业规划特点与引导对策

目的本文通过问卷调查的形式,对103名医学生的职业规划特点进行分析,以便更好的指导教学工作。方法问卷调查内容包括三大模块:自我分析、职业分析与职业定位。结果性格特点中女生比男生有更多的情绪化表现;50%的女生认为自己缺乏毅力和自信心,而有82%的男生认为自己缺乏人际沟通的能力和耐心。认为自己职业定位明确的女生占70%,而男生只有45%。有46%的学生毕业后将选择在医院工作,而有41.1%的学生会选择考研。有75%的学生认为学校有必要在毕业前帮助他们进行职业规划。结论学校在培养人才的过程中,应注重因材施教,开展职业规划讲座,帮助学生及早认清自我、准确定位,使学生能在自己的兴趣领域发挥更大的主观能动性,为人才发展提供起跑线。

多囊卵巢综合征患者中医证候分布的研究

目的:探讨多囊卵巢患者中医证候及其分类症状分布规律。方法:100例PCOS患者按中医证候分为肾虚、肝郁、痰阻3组,并观察中医证候和症状分布规律。结果:中医证候出现频率为肾虚型37例(37%),肝郁型34例(34%),痰阻型29例(29%),不同证候的分类症状出现的频次各不相同。结论:PCOS患者中医证候的发生以肾虚型最多,分类症状出现的频次各有特点,总的来说大多以月经不调和不孕为主要共同症状。

718周期夫精宫腔内人工授精临床因素分析

目的：探讨影响夫精宫腔内人工授精（intrauterine inseminatio，IUI）成功率的各种临床因素。方法：回顾性分析526例患者进行718周期的IUI。对患者年龄、自然周期或超排卵周期、IUI次数、IUI活性精子数量、输卵管条件、子宫内膜厚度与妊娠率的关系进行分析。结果：718周期的IUI中妊娠109周期，其中双胎妊娠率9．2％，三胎妊娠率为2．8％，流产率为22．2％，每周期临床妊娠率为15．2％。自然周期或超排卵周期、单侧或双侧输卵管通畅病人间，妊娠率无显著性差异（19〉0．05）。就女方年龄，〈30岁、30。40岁和〉40岁妊娠率分别为17．24％、14．40％和3．22％，年龄越大受孕率越低，〉40岁组妊娠率明显低于前两组（19〈0，05））。第3次IUI的妊娠率明显高于第2次IUI（妊娠率分别为25．00％、10．39％，19〈0．05）。当IUI活性精子数量低于1×10^6时，妊娠率为3．33％，明显低于活性精子数为1～10×10^6，10～50×10^6，和〉50×10^6组（妊娠率分别为15．82％、16．67％和27．27％，P〈0．05）。LH峰或注射HCG时，子宫内膜厚度〈7mm和〉16mm时，妊娠率分别为7．14％和3．23％，明显低于7～12mm和13～16mm组（妊娠率为16．86％和14．18％，P〈0．05）。结论：IUI中女方的年龄、IUI活性精子数量和子宫内膜厚度是影响IUI妊娠率的直接因素。

多囊卵巢综合征患者中医证候特点的研究

目的探讨多囊卵巢患者中医证候的特点。方法100例多囊卵巢综合征（PCOS）患者按中医证候分为肾虚、肝郁、痰阻3组,并观察舌象和脉象以及病程和中医证候之间的关系。结果PCOS患者年龄主体在25～35岁。肾虚型舌色以淡为主,舌苔主要以黄白为主,脉象以细为主;肝郁型的病程大多在两年以上,舌色以红为主,舌苔以黄苔居多,脉象以弦脉为主;痰阻型患者的病程以5年以上的居多,舌色以红为主,舌苔以腻为主,脉象以濡滑为主。结论PCOS患者的舌象脉象均符合中医基础理论对证候的认识。用客观的方法分析中医证候之间的区别与联系,可以更好地认识中医证候的本质。

高剂趋黄体生成素在卵泡期不同时段对体外受精-胚胎移植的影响

目的探讨在控制超排卵(controlled ovarian hyperstimulation,COH)用药中,高剂量黄体生成素(luteinising hormone,LH)在卵泡的不同时期对体外受精-胚胎移植(inn vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET) 的影响。方法采用回顾性研究方法。常规方案实施IVF-ET的患者359例,按COH中卵泡刺激素(follicle- stimulating hormone,FSH)和LH的不同用量,以及它们的用药时间分为3组:A组(n=252),FSH≥225 IU/d,且LH ≤225 IU/d(对照组)。B组(n=43)为卵泡晚期高LH接触组,ESH>225 IU/d,且取卵前3 d内LH>225 IU/d(高LH 近期组)。C组(n=64)卵泡早、中期高LH接触组,FSH>225 IU/d,且取卵前4 d或以前LH>225 IU/d,取卵前3 d 内LH<225 IU/d(高LH远期组)。对各组在受精率,胚胎植入率,临床受孕率,继续妊娠率进行比较分析。结果A组的胚胎植入率,临床受孕率,继续妊娠率均高于B组(10.4% vs 7.0%,26.7 vs 18.4%,20.2% vs 9.5%,P均< 0.05);而与C组比较则差异无显著性(10.4% vs 9.5%,26.7 vs 23.6%,20.2% vs 18.6%,P均>0.05),但受精率差异有显著性(60.2% vs 50.4%,P<0.05)。C组的胚胎植入率,临床受孕率与B组差异无显著性(9.5% vs 7.0%, 23 6 vs 18 4%,P>0,05),但C组的继续妊娠率明显高于B组(18.6% vs 9.5%,P<0.05)。结论降调节下COH 应用LH>225 IU/d时,使IVF-ET的受精率下降。在卵泡晚期(取卵前3 d内)高LH的不良影响较大,其植入率、临床受孕率、继续妊娠率均明显下降。

小鼠胚胎及人包皮成纤维细胞按比例制成混合饲养层上的人胚胎干细胞生长状态

目的:人胚胎干细胞传代培养的关键是抑制其自发分化、保证细胞的全能性。欲解决以小鼠胚胎成纤维细胞或人包皮成纤维细胞为常规饲养层培养人胚胎干细胞时存在的问题,观察两者按一定比例制成的混合饲养层上人胚胎干细胞的生长状态。方法:实验于2006-04/2007-07在海南医学院附属医院生殖医学中心完成。①对象:包皮来自于行包皮环切的儿童,由海南医学院附属医院泌尿外科提供,儿童家属对治疗及实验均签署知情同意书,实验经医院医学伦理委员会批准。人胚胎干细胞系HN-1由本实验室从人类囊胚中分离培养并鉴定。清洁级孕12.5～14.5d的胎鼠11只,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法:将去除头、四肢和内脏的胎鼠按常规胰蛋白酶反复消化法获得细胞悬液进行接种培养,待生长汇合后冻存部分原代细胞,用丝裂霉素C处理2.0～3.0h后,按1×108L-1密度接种于明胶包被的中心皿内,即小鼠胚胎成纤维细胞饲养层。人包皮成纤维细胞的分离培养与饲养层制备同上。上述两种成纤维细胞分别计数后,按1:0,3:1,1:1,1:3,0:1比例混合,然后以1×108L-1密度接种于明胶包被的中心皿内,即混合饲养层。③实验评估:观察体外传代培养的人胚胎干细胞在3种不同饲养层上的生长状态。并对生长在混合饲养层上的人胚胎干细胞进行碱性磷酸酶检测、OCT-4表达免疫组化检测、OCT-4及端粒酶mRNA表达RT-PCR检测。撤除饲养层,观察人胚胎干细胞体外分化情况。结果:①不同饲养层上人胚胎干细胞的生长状态比较:生长在小鼠胚胎成纤维细胞和人包皮成纤维细胞上的人胚胎干细胞克隆扁平、不饱满,而生长在混合饲养层上的人胚胎干细胞克隆饱满、厚实,其克隆形态显著好于其他两种饲养层。②人胚胎干细胞在不同比例混合饲养层上的生长状态比较:小鼠胚胎成纤维细胞:人包皮成纤维细胞按1:1混合时,人胚胎干细胞显著堆积生长,克隆边缘清晰、隆起明显且饱满,按1:3混合时无明显变化,优于其余3种混合比例。③混合饲养层上人胚胎干细胞未分化状态的检测:碱性磷酸酶染色及OCT-4抗原表达均呈强阳性,分别在200～300bp和300～400bp处可见OCT-4和端粒酶 mRNA表达的特异性条带。④体外分化实验:能形成拟胚体,贴壁后人胚胎干细胞可分化为多种形态的细胞。结论:①与小鼠胚胎成纤维细胞或人包皮成纤维细胞常规饲养层相比,二者混合饲养层能够更好的支持人胚胎干细胞的体外传代培养,获得更佳的克隆形态。②小鼠胚胎成纤维细胞与人包皮成纤维细胞的混合比例为1:1时效果较好。

体外受精失败的次级卵母细胞单精子显微注射后的效果观察

目的：探讨采用精子卵胞浆内注射（ICSI）对于常规体外受精和胚胎移植（IVF－ET）受精失败的次级卵母细胞实施补救受精的效果。方法：对在常规IVF－ET中没有得到受精卵的病例的次级卵母细胞实施ICSI，观察受精、卵裂、胚胎种植和受孕情况。结果：2000年1月～2000年12月在我院生殖中心接受常规IVF治疗的夫妇中，12例在授精后12～20 h卵子全部不受精，在取卵后24 h实施ICSI。12例患者有卵111个，对其中的69个次级卵母细胞实施ICSI， ICSI 20 h后检查，56个受精，受精率81．2％，形成胚胎50个，卵裂率89．3％，移植11个周期共38胚胎，临床妊娠1例（双胎）。胚胎着床率为5．3％。结论：在常规IVF无受精的情况下，应当立即实施ICSI以补救。但在此情况下，胚胎的着床率低下。

解脲脲原体感染降低精子参数、精子膜功能及顶体酶活性

目的研究解脲脲原体(ureaplasm aurealyticum,Uu)感染对精子主要参数、精子膜功能及精子顶体酶活性的影响。方法以精子密度、精子活力、精子形态、低渗肿胀及精子顶体酶活性为观察指标,比较38例Uu阳性患者和30例Uu阴性患者的精子质量情况,分析Uu感染对精子主要参数及精子功能的影响。结果 Uu阳性组与Uu阴性组相比,精子前向运动率[(34.32±14.21)%vs(45.32±9.43)%]、精子畸形率[(77.43±20.32)%vs(65.78±16.65)%]、低渗肿胀率[(45.35±15.46)%vs(59.65±14.32)%]及顶体酶活性[(17.23±6.56)vs(22.23±4.68)]差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),精子密度2组比较无明显差异(P>0.05)。结论 Uu感染可以明显降低精子主要参数、精子膜功能及顶体酶活性,可能与Uu感染引起精液炎症介质增加,破坏精子膜结构有关。

1,6-二磷酸果糖对冻融移植小鼠卵巢组织的影响

目的:在冷冻液中增加能量底物1,6二磷酸果糖(Fructose-1,6-bisphosphate,FDP),观察FDP是否对冻存卵巢有保护作用。将9～12周龄小鼠的卵巢取出,在含(FDP组)或不含FDP(LN2V组)的冷冻液中平衡后快速深低温冻存,解冻后行自体双肾被膜下移植,观察动情周期、移植21d后取移植物固定行HE染色观察,计数单位高倍视野下的卵泡数、测定小鼠血清雌激素,对比冻存效果。结果:移植后21d,两组均有移植物存活,移植卵巢组织内可见各级处于不同发育阶段的卵泡。FDP组单位高倍视野卵泡数及小鼠血清雌激素值分别为(3.6±0.7)个/HP、(8.5±0.9)pg/mL,与LN2V组(2.2±0.8)个/HP、(6.8±1.0)pg/mL存在显著性差异(P<0.05)。结论:在保存液中添加FDP能明显增加冻融移植后单位面积存活卵泡数与小鼠血清雌激素水平,明显提高对小鼠卵巢组织的保存效果。

219例阴道镜拟诊宫颈HPV亚临床感染患者的病理诊断和HPV-DNA检测分析

目的探讨电子阴道镜检查和HPV-DNA检测对宫颈人乳头瘤病毒亚临床感染(SPI)的诊断价值。方法对2000年3月至2008年4月在海南医学院附属医院妇产科门诊经阴道镜检查拟诊宫颈SPI的219例患者行病理检查,同时行HPV6/11、16/18型DNA的检测。结果 219例阴道镜拟诊宫颈SPI患者中,病理确诊为HPV感染209例,阴道镜的诊断符合率为95.4%。HPV-DNA阳性191例,HPV-DNA检测阳性率为87.2%,其中HPV6/11型阳性126例,HPV16/18型阳性62例,混合感染3例。病理诊断为单纯HPV感染患者133例,其中HPV6/11型115例,HPV16/18型18例,而病理诊断为HPV感染合并宫颈上皮内瘤变(CIN)患者58例,其中HPV6/11型11例,HPV16/18型44例,混合感染3例。结论阴道镜检查是一种早期发现宫颈SPI的简便、有效的方法。宫颈单纯HPV感染的主要亚型为HPV6/11型,HPV感染合并CIN的主要亚型为HPV16/18型。

女性年龄对夫精宫腔内人工授精结局的影响

目的分析不同年龄组促排卵周期夫精宫腔内人工授精(IUI)的临床结局及其影响因素。方法回顾性分析2008年1月至2015年12月期间在海南医学院第一附属医院生殖中心进行促排卵周期IUI治疗的4 228个周期的临床资料,分析临床妊娠率、抱婴率、流产率与女性年龄的关系。结果 IUI临床妊娠率为14.5%(614/4 228),抱婴率为10.1%(429/4 228),流产率为15.5%(95/614);按照女性年龄分为21~25岁组、26~30岁组、31~35岁组、36~38岁组、39~40岁组、>40岁组,各组临床妊娠率依次分别为16.5%(40/242)、16.8%(262/1 559)、14.2%(224/1 578)、13.1%(59/451)、8.9%(18/203)、5.6%(11/195);其抱婴率依次分别为10.3%(25/242)、12.2%(190/1 559)、10.2%(161/1 578)、8.4%(38/451)、4.9%(10/203)、2.6%(5/195);其流产率依次分别为7.5%(3/40)、14.1%(37/262)、13.4%(30/224)、25.4%(15/59)、27.8%(5/18)、45.5%(5/11);各年龄组临床妊娠率、抱婴率、流产率比较差异均有显著统计学意义(P<0.01);HCG日子宫内膜厚度平均(9.4±2.0)mm,各组的子宫内膜厚度比较差异无统计学意义(P>0.05);各组平均处理后前向运动精子数依次分别是(11.7±12.3)百万、(10.4±10.8)百万、(9.9±9.4)百万、(10.2±10.6)百万、(8.9±10.0)百万,各组比较差异均无统计学意义(P>0.05);各组的不孕年限依次分别为(3.5±1.5)年、(4.3±2.1)年、(5.2±2.7)年、(6.3±3.8)年、(6.3±4.6)年、(6.2±5.2)年;IUI次数依次分别为(1.4±0.6)次、(1.5±0.8)次、(1.6±0.8)次、(1.6±0.8)次、(1.6±0.9)次、(1.7±1.2)次;直径≥14 mm卵泡个数依次分别为(2.8±2.1)个、(2.7±2.1)个、(2.5±1.9)个、(2.5±1.8)个、(2.4±1.6)个、(2.3±1.4)个;不孕年限、IUI次数、直径≥14 mm的卵泡个数总体分布不全相同,差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论年龄是影响AIH结局的重要因素,对于年龄较大的患者特别是>40岁者应慎重选择IUI,适当减少IUI次数。

地中海贫血羊水及脐血产前基因诊断的临床研究

目的：研究检测α-地中海贫血及β-地中海贫血在产前基因诊断中的临床应用价值。方法：对48例地中海贫血的风险胎儿的羊水（或脐血）应用单管多重PCR体系和反向点杂交法检测α-地中海贫血和β-地中海贫血基因诊断。结果：共有38例胎儿检测出携有地中海贫血。其中α-地贫14例，包括东南亚缺失型杂合子（--^SEA／αα）2例，东南亚缺失型纯合子（--^SEA／--^SEA）8例；左缺失型杂合子（-α^4,2／αα）1例，右缺失型杂合子（-α^3.7／αα）2例，非缺失型点突变（αα^T／αα）1例；β-地中海贫血24例，包括CD41～42杂合子16例，-28（A—G）杂合子3例，双重杂合子3例（IVS2nt654／CD41-42，-28（A—G）／CD71-72（＋A），-α^3.7／CD41-42）。其中10例重型地贫儿引产，1例重型地贫儿产后新生儿死亡。所有病例经引产或正常分娩后均留取脐带血作地贫基因诊断证实产前诊断。结论：应用单管多重PCR体系及反向点杂交法能快速、准确进行α和β-地中海贫血产前羊水基因检测，这对于有效预防重型地中海贫血胎儿出生具有重大临床意义。

不同病因对男性不育患者精子形态的影响

目的探讨不同病因对男性不育患者精子形态的影响。方法 426例男性不育患者根据病因分为7组:精索静脉曲张组(68例)、慢性前列腺炎组(127例)、精索静脉曲张合并慢性前列腺炎组(36例)、特发性弱精子症组(42例)、少精子症组(115例)、小睾丸症组(21例)及其它组(17例),用瑞-姬氏染色法进行精子形态分析。以78例供精者精液检查结果作为对照。结果不育患者的形态正常精子百分率明显低于对照组(P<0.001),精子头部畸形率明显高于对照组(P<0.001);不育各组精子形态异常率与对照组比较,差异均有统计学意义,不育各组精子形态异常率均高于对照组;精索静脉曲张合并慢性前列腺炎组、少精子症组、小睾丸症组分别与慢性前列腺炎组相比较,差异均有统计学意义,慢性前列腺炎组精子形态异常率低于精索静脉曲张合并慢性前列腺炎组、小睾丸症组和少精子症组。结论精子形态缺陷率在不同病因男性不育患者中呈现出不同程度的增高,提示精子形态学分析是反映患者睾丸受损程度的一项敏感指标。

木犀草素对冷保存大鼠心脏心功能及氧化应激反应的影响

目的研究木犀草素对冷保存大鼠心脏心功能及氧化应激反应的影响.方法将40只成年SD大鼠随机分成2组(n=20):对照组(心脏保存液为UW液)及实验组(心脏保存液为含30μmol/L木犀草素的UW液).利用Langendorff离体心脏灌流法,观察2组液体保存心脏18 h并复灌60 min后心脏的收缩与舒张功能,冠脉流出液中磷酸肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)的释放量及心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量变化.结果实验组复灌期心脏的收缩功能(LVPSP,+dp/dtmax)、舒张功能(-dp/dtmax)及心率显著高于对照组(P<0.05),冠脉流出液中CK、LDH的漏出量和心肌组织中MDA含量明显低于对照组(P<0.05),而心肌组织中SOD活力明显高于对照组(P<0.05).结论木犀草素能显著改善冷保存后心脏的心功能,减少心肌氧化损伤.