海南坡鹿MD2 cDNA的克隆及其生物信息学分析

以海南坡鹿外周血白细胞总RNA为模板,利用RT-PCR技术,获得海南坡鹿MD2全长cDNA,并对其进行较系统的生物信息学分析,内容包括序列特征分析、同源性分析、编码蛋白质理化性质及结构预测。结果表明:海南坡鹿MD2的CDS序列长度为486 bp,编码160个氨基酸,与黄牛、人、欧洲兔、褐家鼠的核苷酸序列同源性分别为98.55%,77.43%,78.47%和74.74%。该基因编码的蛋白质相对分子质量约为19×103,理论等电点为8.18。对编码蛋白的分子结构预测发现,该蛋白为非跨膜蛋白,其二级结构中,α-螺旋占16.25%,β-折叠片占38.13%,无规则卷曲占45.63%。

转基因表达的时空调控

建立转基因表达的时空调控系统,对于分析基因在组织或发育阶段的特异表达,以及建立研究外源基因表达、调控的动物模型等方面,具有极其重要的应用价值。论文综述了近年来基于四环素(tetracy-cline,Tet)的调控系统,基于酵母转录激活蛋白,小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)和RNA干扰(RNA interference,RNAi)等转基因表达的时空调控技术研究进展。

水牛TLR2cDNA的克隆与生物信息学分析

本研究通过RT-PCR分段扩增得到水牛Toll样受体2(TLR2)cDNA序列,并利用亚克隆重叠区进行全长序列拼接。将拼接产物与pMD20-T载体连接,重组质粒经PCR酶切鉴定后测序,并进行生物信息学分析。结果表明,克隆得到的序列全长2 455bp,含有一个大小为2 355bp的开放阅读框,共编码784个氨基酸,分子质量为90.2ku,理论等电点为6.92;TLR2ORF序列与GenBank上登载的水牛核苷酸序列同源性为99.53%,与黄牛、马、人、黑猩猩和狗的核苷酸序列同源性分别为97.88%、84.94%、83.12%、82.95%和82.74%,具有很高的相似性;该蛋白是一个跨膜蛋白,存在LRR、LRR-TYP、LRRCT及TIR结构域,与Toll样受体家族成员的共同结构相一致。水牛TLR2基因的成功克隆及序列分析和结构预测为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

水牛CD14 cDNA的克隆、表达及鉴定

目的:克隆水牛白细胞分化抗原14(buffalo cluster of differentiation antigen14,bCD14)基因,表达bCD14蛋白,并进行Western Blot鉴定。方法:采用RT-PCR方法从水牛外周血白细胞中扩增bCD14基因,构建重组质粒pET28a-bCD14,转化入Ecoli BL21,IPTG诱导表达,对表达蛋白进行可溶性分析及Western blot鉴定。结果:bCD14基因含有一个1 122bp的开放阅读框,编码373个氨基酸;与印度水牛、挪威大鼠和人CD14的cDNA序列同源性分别为97.95%、68.78%、78.60%,氨基酸同源性分别为96.78%、61.27%、72.34%;主要以包涵体形式表达,表达蛋白经Western Blot鉴定,得到了一条约46 kD的特异性条带。结论:该文成功克隆了bCD14基因,表达了bCD14蛋白,为进一步揭示水牛抵抗革兰氏阴性菌感染的免疫机制奠定了基础。