利用毒素蛋白基因ccdB构建高效低背景T-载体

高效低背景T-载体的构建可显著提高克隆PCR产物的效率。笔者介绍1种在实验室常规条件下简单快捷制备高效低背景T载体的方法。将含有限制酶Xcm I酶切位点的ccd B致死基因作为插入DNA片段连接到p MD19-T Simple Vector骨架上得到重组质粒,通过菌落PCR、酶切分析及测序验证正确的重组质粒经限制酶Xcm I酶切即得到T-载体。该T-载体含有的ccd B致死基因可以降低载体自连的背景干扰,提高了T-A克隆效率,具有较高的阳性克隆率,继承了p MD19-T Simple Vector的优点,与普通T-载体相比,还具有高效、低背景的优越性。整个操作过程简易可行,具备一定的应用前景。

文昌鸡MHCB-G基因第2外显子序列多态性分析

根据GeneBank上红色原鸡的MHCB-G序列设计特异性引物,利用PCR-SSCP和测序方法对文昌鸡18只个体的MHCB-G基因第2外显子序列332bp区域进行序列多态性分析。通过PCR-SSCP分型得到16种基因型;测序检测到21个变异位点,其中20个位点导致16个氨基酸位点发生变异。结果表明:所有序列均未发生长度变化;文昌鸡群体内MHCB-G的多态性较丰富,主要体现在氨基酸多态性上,与其抗原多样性有密切关系。