海南罗非鱼致病性维氏气单胞菌分离鉴定及药敏特性研究

2014年3—5月海南省罗非鱼主养区多个养殖场发生爆发性疾病,从患病尼罗罗非鱼不同组织中分离获得12株优势菌。经人工回归感染试验,从肝脏和脑中分离获得的HN-G-03和HN-B-02菌株具较强的致病力,HN-G-03和HN-B-02菌株对罗非鱼的的半致死密度分别为7.12×105cfu/尾和1.32×105cfu/尾。经16S rRNA和gyr B基因序列分析,同时结合细菌的形态学特征、生理生化特征,菌株HN-G-03和HN-B-02分别被鉴定为维氏气单胞菌的维氏生物型和温和生物型。体外药物药敏试验结果显示,两株菌均对左氧氟沙星、强力霉素、氟苯尼考、恩诺沙星、庆大霉素等5种药物高度敏感,对呋喃妥因等3种药物中度敏感,对青霉素等12种药物较强耐药。

海南地区溶藻弧菌耐药性及其质粒多样性的研究

调查了海南省的30株溶藻弧菌环境菌株对24种常见抗生素的耐药性,并对菌株携带质粒及其多样性进行了研究,所有菌株对洁霉素、乙酰螺旋霉素、万古霉素、氯洁霉素、制霉菌素5种抗生素完全耐药,对24种抗生素的耐药率为20.8%～66.7%,表明该地区溶藻弧菌具有严重的多重耐药性;30株溶藻弧菌中有22株不携带质粒,8株携带1～3个质粒,质粒为1.20～12.5kb;8株携带质粒的菌株共形成了7种类型的质粒指纹图谱。试验结果表明,该地区溶藻弧菌的耐药性与其是否携带质粒无明显关系。分离菌株的耐药性可能主要是由染色体相关基因引起的。

海南黎安港纳潮量及海水交换规律研究

利用Nortek AquadoppTM水流剖面仪对黎安港口门处的潮流情况进行了28 h的垂直剖面连续观测,结合潮位历史资料,分析了黎安港的潮汐特征,计算了该港的纳潮量,同时,以盐度作为标准物质,计算了海水半交换周期.结果表明:黎安港潮汐类型属于全日潮型,涨落潮历时基本相等,涨潮平均流速小于落潮平均流速;黎安港的平均纳潮量约为5.65×106m3,海水半交换周期约为20.50 d.由于黎安港的海水半交换周期长,泻湖内的生态平衡非常脆弱,因而易受外源和养殖自身的污染.

海南地区溶藻弧菌遗传多样性的RAPD分析

以来源于泰国的菌株TG06003作对照，对采自海南地区的27株溶藻孤菌（Vibrio alginolyticus）环境菌株进行了随机扩增多态性DNA标记（RAPD）分析，其中6株为毒力菌株，另外22株为非毒力菌株。实验共得到70个多态性条带，多态性比率（PP13）为98．6％。基因多样度的算术平均数和加权平均数分别为0．922和0．4544，Shannon’s信息指数的算术平均数和加权平均数分别为0．1391和0．1713。遗传相似度为0．4429-0．8857，遗传距离为0．1214-0．7520。将溶藻弧菌分为毒力菌株和非毒力菌株两个类群进行分析，结果表明，毒力菌株的遗传多样性丰富，它们的基因多样度和Shannon’s信息指数明显高于非毒力菌株；毒力菌株HN08811、HN08155、HN08809、HN08813明显聚为一类，另外2株毒力菌株分别与非毒力菌株HN08304和HN08803聚为一类，溶藻弧菌毒力菌株存在多种遗传型。

酶解海洋生物源蛋白制备活性肽研究进展

海洋是地球上最大的生物储库。辽阔的海洋生长着十几万种海洋动植物，从海洋获取的鱼、虾、贝、藻等，为人类提供了丰富的海洋蛋白资源，是人类的蛋白类食物及生物活性物质的重要来源。现在人们直接和间接食用的动物蛋白质，约有四分之一来自海洋。海洋生物源蛋白无论在种类还是数量上都远远大于陆地生物源蛋白。并且海洋牛物的蛋白质结构与功能和陆地生物相比也有较大的差别，其中蕴藏着许多功能特异、结构新颖的多肽类物质。

生物饵料培养学实验教学改革探索

根据《生物饵料培养学》课程的性质、实验教学中存在的问题以及社会的需求,对《生物饵料培养学》实验教学内容、教学方法和考核方式等采取了相应的改革措施,以提高《生物饵料培养学》课程的实验教学质量。

海南地区养殖石斑鱼皮肤溃疡病病原的分离、鉴定、药敏分析及病理学研究

2016年,针对海南岛沿岸9个石斑鱼养殖场的石斑鱼皮肤溃疡病的调查发现,该疾病的发病面积广、死亡率高,对养殖产业的危害严重.从9个采样点3种患病石斑鱼样品的组织中分离得到了9株优势菌株,人工回感试验表明,其感染特征与自然病症一致,证明这9株菌均为皮肤溃疡病的致病原,在经过生理生化和16S r DNA序列分析后,这9株菌均被鉴定为哈维氏弧菌(Vibrio harveyi).人工回感试验证实,菌株SY-1对珍珠龙胆石斑鱼的毒力最强,其14天每克鱼体重的半致死剂量(LD50值)为7.18×10~4cfu;药敏实验的分析表明,这9株病原菌对34种抗菌药物的药敏谱基本一致,但对氟苯尼考、强力霉素、四环素等药物高度敏感;病理学的研究表明,患病鱼的鳃丝、皮肤、肌肉、肝脏、脾脏、肾脏、肠道和脑等组织器官都发生了不同程度的病理变化,因此认为该病为全身性感染.本研究表明,目前海南地区养殖石斑鱼皮肤溃疡病的致病原有较高的病原同一性,主要为哈维氏弧菌;而较早报道的溶藻弧菌、副溶血弧菌等致病菌的优势度大大降低了,其致病力有所下降,并且与海南地区养殖石斑鱼皮肤溃疡病的相关度不大.

海南南渡江唇染色体核型和银染分析

本研究以海南南渡江野生唇(Hemibarbus labeo)为材料,采用腹腔注射植物血球凝集素(PHA)、秋水仙素,肾细胞直接制片法,分析唇染色体核型和银染(Ag-NORs)。结果显示,唇的二倍体染色体数目为50,核型公式为2n=18m+12sm+12st+8t,其染色体臂数(NF)为80,未发现异型染色体,Ag-NORs出现在第5对和第11对同源染色体的短臂末端。亚科鱼类染色体进化综合分析结果表明,唇具有亚科鱼类的原始核型。本研究不仅补充了唇的细胞遗传学数据,为研究亚科/属鱼类的分类与进化提供了数据资料,也为唇的种质资源保护、种质改良等工作奠定了理论基础。

海南珠母贝属Pinctada6个种的分类鉴定

通过测试海南省珠母贝属Pinctada 6个种的45个个体的16S和H3基因序列,并与GenBank数据库中相同物种进行比对,构建系统发育树对其进行分类,同时根据简单、明确的贝壳形态学特征予以最终确认。此分类法不仅可以较准确、快速地进行珠母贝属的分类鉴定,而且分类结果不易受被测试贝类生活环境的影响,不易受分类鉴定人员水平的限制,有利于发现杂交种和隐存种。

中国七种水生动物源无乳链球菌的分子特征及其对斑马鱼的致病性

为了解中国水生动物源无乳链球菌的分子流行特征,揭示其传播和流行规律,本实验对分离得到并鉴定的10株7种水生动物源无乳链球菌通过分子血清型、多位点序列分型(MLST)分型、毒力基因型和前噬菌体分型等方法进行分子分型;其次,通过斑马鱼评价7种水生动物源无乳链球菌的致病性。分子血清型分析结果表明,10株无乳链球菌可分为3种血清型,即Ⅰa、Ⅰb和Ⅲ型;MLST分型结果表明,Ⅰa型无乳链球菌均为ST7型,Ⅰb无乳链球菌均是ST261型,只有Ⅲ型无乳链球菌是ST739型。进一步分型结果表明,10株无乳链球菌可分为3种毒力基因型和4种前噬菌体基因型。根据4种分型结果可知,10株水生动物源无乳链球菌可分为4种类型,其中虎纹蛙源无乳链球菌具有独立的分子血清型、MLST型、毒力基因型和前噬菌体基因型,即Ⅲ-ST739-V1-P3;罗非鱼源无乳链球菌的基因型有3种,即Ⅰa-ST7-V2-P1、Ⅰa-ST7-V2-P2和Ⅰa-ST7-V3-P4;红尾皇冠鱼、鳙和罗非鱼源无乳链球菌的基因型相同:Ⅰa-ST7-V2-P2;卵形鲳鲹、宝石鲈和罗非鱼源无乳链球菌具有相同的基因型:Ⅰa-ST7-V2-P1;鲮和罗非鱼源无乳链球菌的基因型相同,即Ⅰb-ST261-V3-P4。致病性研究表明,7种水生动物源无乳链球菌对斑马鱼均有强致病性。研究表明,两栖类虎纹蛙源无乳链球菌和鱼源无乳链球菌的基因型明显不同,它们之间遗传变异较大,因此,无乳链球菌在两栖类和鱼类之间相互传播的可能性较小。鱼源无乳链球菌有3种基因型,且这3种基因型均在罗非鱼中流行,这表明无乳链球菌在鱼类中相互传播的可能性较大,尤其是在罗非鱼与其他鱼类之间。

东寨港红树林小型底栖动物的密度和生物量研究

2012年2月对海南省东寨港红树林滩涂沉积物小型底栖动物进行研究,结果表明,红树林中有六大类小型底栖动物,包括自由生活线虫、桡足类、涡虫、多毛类、寡毛类、海螨。在种类组成上,自由生活线虫为优势类群,在4个采样站位中,分别占小型底栖动物总数量的95.30%,97.02%,96.45%,90.53%。东寨港红树林小型底栖动物的总栖息密度为(1 082.23±563.76)个/(10cm2),总生物量为(764.06±511.63)μg/(10cm2)。4个采样站位平均多样性指数H′分别为0.26、0.17、0.20、0.45,平均均匀度指数J分别为0.13、0.09、0.10、0.23。最小显著极差法(LSR)进行多重比较分析表明,4个采样点小型底栖动物差异明显。海洋线虫与桡足类的数量之比(N/C)显示东寨港红树林受到了有机质污染。

糙海参苗种规模化繁育技术研究

为有效增殖糙海参资源,2014年6月—2015年5月,以采自海南陵水沿海的天然糙海参为亲参,通过探索糙海参亲参运输、培育、诱导精卵排放以及幼体和稚幼参培育等技术,建立糙海参苗种规模化繁育关键技术体系。试验结果显示,采用薄膜袋充氧干运法运输糙海参,亲参成活率可达99.8%;亲参培育成活率达97.1%以上;采用阴干与流水相结合诱导亲参排放精卵,成功率达93.3%。以培育的亲参进行了12批次初耳幼体和稚幼苗培育试验,共放养初耳幼体5474万个,培育出体长1.0~5.5 cm幼参445.9万头,初耳幼体培育总成苗率8.1%。初步实现了糙海参苗种规模化生产。

环境因素对溶藻弧菌HN08155生物膜形成的影响

为了研究不同环境因子对溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）HN08155生物膜形成的影响,本研究采用改良的微孔板方法,结果显示：在3个不同培养基中,于2216E培养基中生物膜形成的速度最快,与其他实验组存在明显差异;在pH4-9范围内,当pH值为7.0时,溶藻弧菌形成的生物膜量最高;质量浓度为0.5%的NaCl最适宜溶藻弧菌生物膜的生成,但NaNO3不能促进生物膜的形成;低浓度CaCl2可促进生物膜形成,Mg ／Cl2不参与溶藻弧菌生物膜的生成.由此得出结论：溶藻弧菌生物膜的形成依赖于环境条件,不同环境因子对溶藻弧菌生物膜的形成有不同的影响.

饲料组合投喂对白神仙幼鱼生长和体色的影响比较

投喂管理是鱼类育苗及养殖的关键技术之一,对种苗的存活、生长和后期发育有着重要影响。为提高白神仙鱼幼鱼阶段的投喂管理及体色变化认知,通过微颗粒饲料(M)、微颗粒饲料+卤虫无节幼体混合饲料(MA)、卤虫无节幼体+鱼粉混合饲料(AF)3种不同饲料组合进行投喂管理,对淡水白神仙幼鱼生长过程的存活率、生长性能和体色特征进行比较分析。结果表明:(1)3种不同饲料组合幼鱼存活率均高于82%,MA组显著高于M组和AF组(P <0.05)。(2)M组和MA组体质量、体长、增重率、特定生长率显著高于AF组(P <0.05)。(3)幼鱼体表不同部位的颜色特征值具有一定规律性:明度值(L^(*))方面,其大小顺序为腹部中央>鳃盖后缘>后背部;红度值(a^(*))方面,其大小顺序为鳃盖后缘>腹部中央>后背部;黄度值(b^(*))方面,其大小顺序为后背部>腹部中央>鳃盖后缘。(4)卤虫无节幼体的投喂会影响幼鱼体表的黄度特征值的变化。上述结果表明,在白神仙鱼幼鱼养殖的适当阶段使用卤虫无节幼体,可提高其生长性能和强化体色。

臭氧水处理技术在对虾养殖生产中的应用

随着我国对虾养殖规模的不断扩大和精养程度的逐年提升，对虾养殖的自我污染和病害的传播蔓延也日益加剧，严重危及对虾养殖业的健康发展。因此，探索和开发可操作性强、效果显著的养殖水质综合调控技术，通过优化和改善池塘养殖环境，减少对虾养殖废水的排放，提高对虾养殖生产的经济效益和生态效益，对推动我国对虾养殖业的可持续发展具有重要的意义。臭氧是一种强氧化剂，具有极强的氧化能力，能快速分解水中有机物，杀菌力较强。臭氧在水产养殖中的应用，可通过其氧化反应起到灭菌、分解有机物和提高水体溶解氧浓度的作用，

5种生物滤料挂膜期间氨氮去除效果的比较

采用自然挂膜法,研究了封闭循环水养殖系统中5种生物滤料挂膜期氨氮、亚硝酸盐氮和硝酸盐氮含量的变化趋势和相互关系,结果表明:在生物膜挂膜期间,5种不同生物滤料的氨氮质量浓度均随着系统运行时间的延长而逐渐下降,亚硝酸盐氮质量浓度先升后降,硝酸盐氮质量浓度则是逐渐上升.5种生物滤料中,珊瑚砂和红色呼吸环的效果最优,约23 d完成挂膜,氨氮去除率为93.0%和92.5%.

尖塘鳢Oxyeleotris养殖生物学研究进展

综述了尖塘鳢养殖生物学研究现状与进展,为尖塘鳢在我国的繁育、养殖及研究推广提供参考资料。

高蛋白酶活性的地衣芽孢杆菌热带菌种的筛选与鉴定

从海南省文昌市、海口市的海水养殖池和天然海域中采集的海水与底泥样品中分离和筛选出13株具有高蛋白酶活性的地衣芽孢杆菌菌株,经菌落形态观察、标准生理生化分析和16S rDNA测序,确定获得的菌株均为野生型热带种地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。

哈维氏弧菌vgrG基因的原核表达及多克隆抗体的制备

VI型分泌系统(T6SS)是革兰氏阴性菌特有的一种多功能分泌系统,它与致病菌的致病性密切相关;而vgrG则是T6SS系统的结构蛋白之一,它与T6SS的功能直接相关.为了获得哈维氏弧菌vgrG基因的外源重组蛋白及制备其多克隆抗体,本研究以哈维氏弧菌QT520菌株的DNA为模板,在扩增获得vgrG基因后,构建了原核表达载体pET32a-vgrG并将其转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达.结果显示,在16℃和1mmol·L^(-1)IPTG诱导20 h的条件下,可诱导重组蛋白rvgrG大量表达,条带大小与预期的分子量(88 kDa)一致;通过Ni^(2+)亲和层析柱对融合蛋白rvgrG进行纯化,获得了纯度较高的目的蛋白rvgrG;将rvgrG重组蛋白通过腹腔注入小鼠体内后观察其毒性,结果显示rvgrG对小鼠无毒害作用;进一步用纯化蛋白rvgrG制备多克隆抗体,经ELISA检测,vgrG多克隆抗体的效价高达1∶320000;蛋白免疫印迹(Western blot)检测表明,本实验所制备的vgrG多克隆抗体特异性强,可为后续进行vgrG蛋白的致病性及致病机制研究提供良好的实验材料.