波纹唇鱼消化系统的形态解剖与肠道上皮的扫描电镜观察

对波纹唇鱼消化系统的解剖构造进行了研究,并利用扫描电镜对其肠道上皮组织进行观察,结果如下:波纹唇鱼为肉食性无胃鱼类,消化道全长极短,颌齿和咽齿都很发达,肠道极粗,比肠长为0.426;肝脏分三叶,呈枫叶状,胰脏弥散性分布在肝脏组织中,肉眼不易分辨;扫描电镜观察发现小肠前部细胞界限不明显,分泌孔较多,微绒毛密而长短不齐;小肠后部细胞界限也不明显,但分泌孔明显减少,微绒毛比小肠前部更密且很平整;直肠细胞为多角形,分泌孔比小肠少,微绒毛较稀疏,且长短不一。

长心卡帕藻外植体培养及不定芽诱导

研究探讨了长心卡帕藻外植体在PES、PESI、f/2三种液体培养基中的培养效果。在PES培养基中分别添加浓度为2mg/L的IAA、GA3、不同浓度梯度(0.5、2、5mg/L)的6-BA及0.5%椰子水,研究上述生长调节物质对外植体不定芽发生的影响。结果表明,培养后40 d,外植体在PES中生长最佳,死亡率为33.33%,出芽率为60%,延长培养3个月后相对生长率达到2.86%。观察发现外植体不定芽的发生具有明显的极性,3种植物激素中6-BA 2mg/L对外植体不定芽的发生有促进作用,该处理的出芽率和平均出芽数均最高,分别为90%和2.27个,IAA和GA3无明显效果。椰子水的加入则改变了培养基的物理性质,不利于外植体的生长和发芽。

琼胶酶高产细菌的分离及鉴定

从热带海洋中分离出能高效降解琼胶的菌株,并对其分类地位进行鉴定.在改良培养基上分离纯化出以琼胶作为碳源的能高效降解琼胶的细菌,以细菌基因组DNA为模板,设计合成细菌16SrDNA的通用引物,利用PCR技术对16SrDNA目的片段进行克隆,目的片段经过连接、转化和序列测定,测序结果与GenBank数据库收录的16SrDNAs序列进行BLAST比较分析,利用MEGA软件构建系统发育树,确定细菌的分类地位.分离鉴定的三株细菌,分别编号为FG1、FG2和FG3,均为革兰氏阴性菌,其16SrDNAs序列在GenBank中的收录号依次为JX073661、JX073662和JX073663.FG1菌株的16SrDNA与聚团拉布伦茨氏菌(Labrenzia aggregata)16SrDNA序列同源性达到99%;FG2与哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)序列同源性达到99%;FG3与星箭头菌(Sagittula stellata)序列同源性达到97%.初步鉴定FG1与FG3均属于红细菌科(Rhodobacteraceae),FG1为拉布伦茨氏菌属(Labrenziasp),FG2为弧菌属(Vibrio sp),FG3为箭头菌属(Sagittulasp).

循环水系统内马氏珠母贝与3种大型藻类的混养状况及水质分析

为探讨马氏珠母贝与大型海藻的最佳混养体系,分别设置马氏珠母贝稚贝与针叶蕨藻、麒麟菜、长茎葡萄球藻混养实验组及马氏珠母贝稚贝对照组,记录养殖过程中养殖水体NH_4^+-N,NO_3^--N的浓度变化及马氏珠母贝稚贝的存活率。结果表明,实验组在养殖过程中可保证较好的水质状况,稚贝存活率也高于对照组;长茎葡萄球藻混养实验组对养殖水体的NH_4^+-N,NO_3^--N处理效果最优,分别在第47天和第49天达最低值[(0.015±0.003)mg·L^(-1)和(0.266±0.002 mg·L^(-1)],该组的稚贝存活率和藻体日增体质量(0.86 g·d-1)均最高(93.33%);不同混养实验组的马氏珠母贝平均壳高日增长量均显著高于对照组。

产琼胶酶菌株Agarivorans sp.FG15的筛选鉴定与酶学性质

从中国南海热带海洋环境中分离纯化出产琼胶酶菌株FG15,并以16S rDNA进行分子鉴定,分析其酶学性质.FG15为革兰氏阴性球菌,对硫酸链霉素,氨苄青霉素,羧苄青霉素和氯霉素都不敏感.通过16S rDNA序列分析和BLAST同源性比对发现：FG15菌株的16S rDNA序列与船蛆杆菌（Teredinibacter turnerae）,噬琼胶菌属（Agarivorans sp.）对应序列同源性最高,为95％.利用MEGA 5.0软件构建系统发育树,FG15与噬琼胶菌属（Agarivorans sp.）亲缘关系最近,同源性高达99％.因此,可以初步鉴定FG15为噬琼胶菌属（Agarivorans sp.）.酶学性质的研究表明：FG15所产琼胶酶的最适温度为36℃,在20～45℃之间热稳定性较好;最适pH为7.5,在pH7.0～8.0之间酸碱稳定性较好;产酶主要为胞外酶;琼脂酶的动力学参数米氏常数Km为4.978mg/mL,最大反应速率Vmax为10.33μmol/（L· min）.

琼胶降解菌产酶条件优化、酶学性质和糖代谢途径

为确定热带海洋环境中琼胶降解菌的最佳产酶条件和最适培养条件,提高其产酶能力,采用3,5-二硝基水杨酸（3,5-Dinitrosalicylic acid,DNS）比色法测酶活,研究其酶学性质并利用高通量测序获得其参加糖代谢的酶。单因素和多因素研究结果表明：FG12的最佳产酶条件为1%蛋白胨、0.8%琼脂、0.02%K2HPO4、pH 7.5、28℃;最适培养条件为0.8%琼脂粉、0.5%蛋白胨、pH 6.8。优化后的酶活达到739.58 U/mL,比优化前提高了273.49%。琼胶酶的最适温度为36℃,在36~55℃之间的热稳定性很好;最适pH值为7.5,在pH为6.5~7.5时,酸碱稳定性较好。高通量测序的代谢图中,FG12中含有多种不同数量的酶参与糖代谢,能通过基因改造提高酶产量。因此,FG12是一株高效琼胶降解菌,为潜在的工程菌。

海洋琼胶降解菌FG15基因组从头测序分析

为充分了解琼胶降解菌FG15的基因功能和代谢途径,本研究使用SOAP de novo 2.04对Illumina Hiseq2000平台测序产生的基因片段进行了拼接和组装,同时利用Glimmer 3.02来预测基因的开放性阅读框,并采用蛋白质直系同源基因簇(COG)、基因本体数据库(GO)以及京都基因和基因组百科全书(KEGG)的数据来预测其基因功能,获得了代谢途径.结果表明:FG15的基因组大小为5.10 Mb,G+C含量为44.58%,共有38条Scaffolds,4 922个开放性阅读框,82个tRNA,2个rRNA;通过COG分析可将菌株FG15注释到22种COG功能类型,主要包括细胞代谢、细胞信号转导等;利用GO注释可将FG15注释到3大类39个GO功能亚类上;KEGG分析能将其定位到154个代谢通路中,包括物质代谢、次生代谢产物的生物合成等.次生代谢产物的合成代谢途径精确显示,FG15能合成青霉素和头孢菌素,且其与抗生素抗性实验的结果一致.研究结果为FG15功能基因组学的研究和相关次级代谢产物的生物合成途径以及异源表达的研究提供了理论基础.

琼胶降解菌FG12的全基因组测序

为了获得琼胶寡糖的高产琼胶降解菌,本研究通过Illumina Hiseq2000平台测序,使用SOAPdenovo2.04软件(拼接组装),Glimmer 3.02预测基因的开放性阅读框,RNAmmer 1.2预测rRNA,tRNAscan-SE 1.23预测tRNA以及COG、CO和KEGG等来预测FG12的基因功能,并对其进行了全基因组测序,结果表明:FG12的基因组大小为4.11Mb,GC含量为37.76%;共有4 441个开放性阅读框,其平均长度为780 bp,有76个tRNA和5个rRNA;有与琼胶寡糖代谢相关的基因和抗生素的代谢途径,因此得出,琼胶降解菌FG12有改造成为高效工程菌的潜力.

温度对厚指海绵Pachychalina sp.体内真细菌的影响

温度是影响微生物多样性的重要因素之一。【方法】本研究采用16S rDNAs扩增产物酶切片段多态性(amplified rDNArestriction analysis,ARDRA)和16SrDNAs序列分析方法,对生长在16℃和30℃条件下厚指海绵Pachychalinasp.体内真细菌(eubacteria)的多样性进行了研究,【目的】探讨温度对海绵体内细菌的影响。【结果】根据ARDRA聚类分析,16℃条件下海绵体内100个真细菌的16SrDNAs克隆片断被分成34个类群,而30℃条件下,海绵体内100个细菌的16SrDNAs克隆片断则被分为32个类群,说明在不同温度条件下,海绵体内真细菌的组成与群落结构有所变化,但研究发现温度没有明显改变海绵体内真细菌总的群落结构。【结论】根据厚指海绵Pachychalinasp.体内真细菌的16SrDNAs序列分析结果发现:在16℃和30℃条件下,海绵体内的真细菌均属于α、γ、δ-变形菌、硫细菌、硫还原菌和烃类分解菌,此外还有少数放线菌。16℃条件下海绵体内的优势菌为γ-变形菌,而且体内的硫细菌和硫还原菌主要是耐寒细菌,而30℃条件下海绵体内的优势菌为α-变形菌。该研究还发现:同一ARDRA类型的克隆序列分析表明在同一ARDRA群内各组分间彼此关系比较密切。

产琼胶酶菌株发酵条件优化及酶学特性

为提高产琼胶酶菌株的产酶能力，优化其发酵条件，并研究其酶学特性。通过单因素试验和正交试验确定最佳发酵条件为：酵母粉浓度0．3％，琼脂浓度1．2％，培养基起始pH8，28℃，K2HPO4 0．02％，CaCl20．02％。优化后的酶活高达576．25U／mL，为优化前的2．05倍。酵母粉浓度，琼脂浓度和pH3个因子之中，pH对酶活的影响最大，酵母粉浓度的影响最小。酶学特性的研究表明：FG15的琼胶酶最适pH为7．5，在pH为6．5～8时酸碱稳定性较好；最适温度为36℃，在20℃-45℃热稳定性较好。该菌株产酶能力强，具有良好的稳定性，是生产琼胶寡糖潜在的优势菌。