荷人卵巢上皮癌裸鼠冻融卵巢组织移植的效果评价

目的:获取人卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤癌旁正常卵巢组织,经安全筛查并冻融后移植至去势裸鼠体内,探讨移植后效果,为临床应用提供依据。方法:将人卵巢上皮癌OVCAR3细胞种植于裸鼠皮下以获取瘤源,并进行卵巢原位移植,建立卵巢癌原位移植瘤模型,解剖裸鼠获取癌旁正常卵巢组织。癌旁组:取筛选后的癌旁卵巢组织进行玻璃化冷冻,复苏后分别进行皮下及原位移植,各20例;对照组:同龄正常裸鼠卵巢组织,皮下移植及原位移植各20例;去势裸鼠组:20只同龄去势裸鼠;正常卵巢组:20只同龄正常裸鼠。移植12周后,分析各组裸鼠卵巢组织内卵泡形态及激素分泌功能。结果:40只人卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤模型中共获取35份活检正常的癌旁卵巢组织,获取率87.5%(35/40)。玻璃化冷冻前后卵巢组织中卵泡形态及各级卵泡比例均无显著差异(P>0.05),癌旁冷冻组织和癌旁新鲜组织的异常卵泡比例差异无统计学意义(P>0.05),冷冻组织以初级卵泡及次级卵泡等窦前卵泡为主。癌旁组皮下移植组织存活率80%(16/20),对照组皮下移植组织存活率90%(18/20),癌旁组原位移植组织存活率90%(18/20),对照组原位移植组织存活率95%(19/20)。移植后组织内卵泡以次级卵泡及窦状卵泡为主,各级卵泡的形态及构成比和未移植的同龄正常裸鼠卵巢相似(P>0.05);癌旁组卵泡数明显低于对照组(P<0.05)及正常卵巢组(P<0.01);皮下移植和原位移植组织内的各级卵泡数差异无统计学意义(P>0.05)。癌旁组卵泡刺激素水平明显低于去势裸鼠组,而雌二醇水平明显高于去势裸鼠组(P<0.01);癌旁组卵泡刺激素水平明显高于对照组(P<0.05)及正常卵巢组(P<0.01),而雌二醇水平明显低于对照组(P<0.05)及正常卵巢组(P<0.01);皮下移植和原位移植的卵泡刺激素水平和雌二醇水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:癌旁卵巢组织冻融移植后有正常卵泡发育及激素分泌功能;皮下移植和原位移植均可取得较好的效果;癌旁卵巢组织冻融移植有望作为卵巢上皮癌患者治疗后恢复卵巢内分泌功能的有效手段。

卵巢上皮癌细胞株OVCAR-3培养相关影响因素分析

目的探讨卵巢上皮癌细胞OVCAR-3培养的影响因素,提高培养的成功率。方法按培养条件分为:未滤菌加抗菌素组、滤菌加抗菌素组、滤菌不加抗菌素组及改良复苏组,取对数生长期的细胞裸鼠皮下种植,观察成瘤率并行组织学检查。结果未滤菌加抗菌素组,复苏培养5次,全部失败;滤菌加抗菌素组,复苏培养10次,全部成功;滤菌不加抗菌素组,复苏培养10次,失败4次,成功率60%;改良复苏组:复苏培养10次,全部成功。种植后2周出现瘤体,各组成瘤率100%,各组肿瘤组织学检查未见明显差异。结论无菌操作是OVCAR-3最重要的影响因素,滤菌及加用抗菌素是关键步骤。

人卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤癌旁肿瘤相关基因表达及意义

目的通过对人卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤癌旁肿瘤相关基因表达的检测，探讨筛选癌旁正常卵巢组织的可行性。方法人卵巢上皮癌OVCAR3细胞皮下种植获取瘤源并卵巢原位移植后，取癌组织、癌旁近端组织、癌旁中段组织、癌旁远端组织及正常裸鼠卵巢组织，采用免疫组化法检测以上组织的CKG、CA125、P53、survivin、MMP-2、T1MP-2的表达量。结果40例人卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤模型中获取35份活检正常的癌旁残余卵巢组织，获取率87．5％（35／40）。癌组织中cK．7、CA125、P=53、suivin、MMP4及TIMP-2的表达率分别为95．O％（38／40）、95．0％（38／40）、75．0％（30／40）、85．0％（34／40）、77．5％（31／40）及77．5％（31／40）；癌旁近端组织的表达率分别为71．4％（25／35）、68．6％（24／35）、57．1％（20／35）、62．9％（22／35）、60．0％（21／35）及57．1％（20／35）；癌旁中段组织的表达率分别为34．3％（12／35）、31．4％（11／35）、31．4％（11／35）、31．4％（11／35）、34．3％（12／35）及31．4％（11／35）；癌旁远端组织的表达率分别为25．7％（9／35）、22．9％（8／35）、25．7％（9／35）、25．7％（9／35）、28．6％（10／35）及31．4％（11／35）；23份癌旁正常卵巢组织CK．7、CAl25、P53、suivin、MMP4及ⅡMP-2的表达均为阴性。免疫组化检测结果为癌旁近端组织中cK-7、CAl25、P=53、suivin、MMP-2及TIMP-2的表达低于癌组织（P〈0．05），高于癌旁中段组织及癌旁远端组织（P〈0．01）；癌旁中段组织及癌旁远端组织表达差异无统计学意义（P〉0．05）；cK-7、CAl25、suivin的强阳性表达率明显高于P53、MMP4、11MP-2（P〈0．01）；不同病变程度获取的癌旁正常卵巢组织中的表达量差异无统计学意义（P〉0．05）。20例正常裸鼠卵巢组织CK-7、CAl25、P53、suivin、MMP4、TIMP-2的表达均为阴性。结论CKG、CAl25、P53、suivin、MMP-2及11MP-2等分子指标的表达向无癌方向呈递减趋势，其肿瘤相关基因表达阴性可作为筛选癌旁残余正常卵巢组织的标准，卵巢上皮癌旁可以获取相对安全的正常卵巢组织。

腹腔镜引导下125I粒子植入治疗复发妇科恶性肿瘤的安全性评估

目的探讨腹腔镜下手术切除及125I粒子植入治疗复发妇科恶性肿瘤的安全性。方法5例复发妇科恶性肿瘤患者在腹腔镜下切除复发癌灶并植入125I粒子，记录全部并发症，用γ射线监测仪在距放射源不同距离及术后不同时间监测环境辐射剂量。结果5例手术全部成功，无严重的并发症发生，所有患者均有轻微的粒子植入部位疼痛和暂时外阴水肿，离放射源距离及术后时间增加，辐射剂量迅速减少，在距离体表50cm及术后6个月时测得的辐射剂量接近天然本底辐射剂量。结论腹腔镜下手术切除及125I粒子植入对患者及周围人群是安全的。

流式细胞术检测肿瘤相关蛋白在人卵巢上皮性肿瘤裸鼠冻融卵巢组织移植中的意义

目的 通过对人卵巢上皮性肿瘤裸鼠原位移植瘤的癌旁组织相关蛋白的检测,探讨癌旁正常卵巢组织筛选的标准及冻融卵巢组织移植的可行性.方法 将人卵巢上皮性肿瘤OVCAR3细胞于裸小鼠颈背部近腋窝处皮下种植获取瘤源,行卵巢原位移植后,取癌组织、癌旁近端组织、癌旁中段组织、癌旁远端组织及正常裸鼠卵巢组织,采用流式细胞术检测各组织中的细胞角蛋白-7（CK-7）、CA125、p53、Survivin、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、金属蛋白酶组织抑制物-2（T1MP-2）的表达量;分别取全部指标阴性组、CK-7（-）CA125（-）Survivin（-）组、CK-7（＋）CA125（＋）Survivin（＋）组的组织、癌组织和冻融正常裸鼠卵巢组织进行移植,分析各组移植后的癌变率及CA125水平变化,同时检测原位移植后不同病变程度的裸鼠血清CA125水平.结果 从52份人卵巢上皮性肿瘤裸鼠原位移植瘤模型中获取46份（88.5％）活组织检查正常的癌旁残余卵巢组织;仅卵巢种植裸鼠血清CA125水平高于正常裸鼠（P＜0.01）,低于卵巢外种植裸鼠（P＜0.05）.原位移植瘤组织中CK-7、CA125、p53、Survivin、MMP-2及TIMP-2的表达率分别为93.3 ％（28/30）、93.3 ％（28/30）、86.7％（26/30）、86.7％（26/30）、83.3％（25/30）、83.3％（25/30）,癌旁近端组织的表达率分别为70.0％（21/30）、70.0％（21/30）、63.3％（19/30）、63.3％（19/30）、60.0％（18/30）、56.7％（17/30）,癌旁中段组织的表达率分别为33.3％（10/30）、30.0％（9/30）、30.0％（9/30）、30.0％（9/30）、26.7％（8/30）、23.3％（7/30）,癌旁远端组织的表达率分别为26.7％（8/30）、23.3％（7/30）、26.7％（8/30）、26.7 ％（8/30）、30.0％（9/30）、30.0％（9/30）;20份原位移植正常卵巢组织上述指标均为阴性.癌旁近端组织中CK-7、CA125、p53、Survivin、MMP-2及TIMP-2的表达率低于癌组织（P＜0.05）,高于癌旁中段组织及癌旁远端组织（P＜0.01）;癌旁中段组织及癌旁远端组织表达率差异无统计学意义（P＞0.05）.癌旁组织CK-7、CA125、Survivin的强阳性表达率明显高于p53、MMP-2、TIMP-2（P＜ 0.05）.全部指标表达阴性组或CK-7（-）CA125（-）Survivin（-）组的组织移植后,未发现癌变,其癌变率及CA125水平低于CK-7（＋）CA125（＋）Survivin（＋）组（P＜0.01,P＜0.05）.结论 CK-7、CA125、p53、Survivin、MMP-2及TIMP-2等分子指标的表达向无癌方向呈递减趋势,这些肿瘤相关基因表达全部阴性或主要指标CK-7、CA125、Survivin阴性均可作为筛选癌旁残余正常卵巢组织的标准,流式细胞术可作为筛查残留癌灶及隐匿转移的有效方法;人卵巢上皮性肿瘤裸鼠冻融卵巢组织移植安全、可行.

卵巢上皮癌裸鼠原位移植瘤及人卵巢上皮癌卵巢内肿瘤浸润类型分析

目的探讨人卵巢上皮癌实体瘤组织片和人卵巢上皮癌细胞株OVCAR-3来源的裸鼠原位移植瘤模型的卵巢内肿瘤浸润类型,以及人卵巢上皮癌卵巢内肿瘤浸润类型的特点。方法将人卵巢上皮癌实体瘤组织片和人卵巢上皮癌细胞株OVCAR-3皮下移植获取瘤源,再分别植入裸鼠单侧卵巢包膜内制备裸鼠原位移植瘤模型。观察两种方法制备的肿瘤模型卵巢内的浸润类型。同时通过病理检查分析了54例国际妇产科联盟(FIGO)Ⅰ~Ⅱ期人卵巢上皮性癌的肿瘤浸润类型。结果肿瘤在卵巢内浸润类型大致分为三类:假包膜型、假包膜浸润型和假包膜穿透型。实体瘤组假包膜型发生率(18.2%)低于细胞株组(42.3%,P<0.05),而实体瘤组假包膜穿透型发生率(50.0%)高于细胞株组(23.1%,P<0.05),两组间的假包膜浸润型差异无统计学意义(P>0.05)。肿瘤在卵巢内浸润类型随着种植时间而发生变化,种植初期假包膜型比例较高,随着种植时间的延长,假包膜穿透型比例增加。人卵巢上皮癌卵巢内浸润类型中,Ⅰ期假包膜型比例较高(P<0.05),而Ⅱ期包膜穿透型比例较高(P<0.05)。两种病理类型之间其肿瘤生长类型的比例差异无统计学意义(P>0.05)。结论人卵巢上皮癌实体瘤组织片和人卵巢上皮癌细胞株OVCAR-3制备裸鼠原位移植瘤模型有差别;相对于实体瘤组织片模型,细胞株模型更稳定,更适合后续研究。三种肿瘤卵巢内浸润类型在移植瘤种植8周时比例比较均衡,8周是后续实验最佳切入时机。