艾拉莫德对类风湿关节炎患者免疫功能及血清RF抗-CCP及Wnt-3α的影响

目的:观察艾拉莫德在类风湿关节炎(RA)中的应用效果及对患者免疫功能、血清指标、功能状态等影响。方法:选取2019年1月至2020年6月收治的156例RA活动期患者,按住院顺序奇偶数法分成观察组与对照组各78例,对照组入组后予以甲氨蝶呤口服(每次10mg,1次/周),观察组在对照组基础上,联合艾拉莫德口服(每次25mg,2次/d),连续治疗12周,比较两组28个关节疾病活动度(DAS28)变化、治疗反应情况,分析患者治疗前后免疫功能指标(辅助性T细胞Th1、Th17及调节性T细胞)、血清指标[C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸抗体(抗-CCP)、分泌型糖蛋白(Wnt)-3α]水平,采用健康评估问卷(HAQ)评价患者功能状态,并记录药物不良反应。结果:治疗后12周,两组DAS28值均较治疗前明显下降(P<0.05),且观察组降低幅度大于对照组(P<0.05);观察组总反应率97.44%,明显高于对照组(88.46%)(P<0.05)。两组Th1、Th17百分比均较治疗前明显下降(P<0.05),调节性T细胞百分比较治疗前明显升高(P<0.05),且观察组Th1、Th17百分比降低幅度大于对照组(P<0.05),调节性T细胞百分比升高幅度大于对照组(P<0.05)。两组血清CRP、RF、抗-CCP水平及Wnt-3α表达量均较治疗前明显下降(P<0.05),且观察组血清CRP、RF、抗-CCP水平及Wnt-3α表达量降低幅度均大于对照组(P<0.05)。两组HAQ评分均较治疗前明显下降(P<0.05),且观察组HAQ评分降低幅度大于对照组(P<0.05)。治疗组与对照组不良反应发生率比较差异无统计学意义(10.26%vs 6.41%,P>0.05)。结论:艾拉莫德用于RA治疗,可提高治疗反应率,有利于调节患者免疫功能、减轻炎症水平,促进功能状态恢复,且安全性较好。

可溶性程序性死亡受体-1和干扰素调节因子4在类风湿关节炎患者血清中的表达与疾病活动性、免疫炎症的关系

目的检测可溶性程序性死亡受体-1(sPD-1)、干扰素调节因子4(IRF4)在类风湿关节炎(RA)患者血清中的表达并探讨其临床意义。方法选取RA患者100例为研究对象(RA组),其中缓解期患者50例(RA缓解组),活动期患者50例(RA活动组)。另外,选取同期接受治疗的骨关节炎(OA)患者50例(OA组)和进行体检的健康者50例(对照组)。采集静脉血,分离血清,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测受试者血清sPD-1、IRF4、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-17(IL-17)、干扰素γ(IFN-γ)表达水平,采用Pearson法分析RA患者血清sPD-1、IRF4水平与血清IL-4、IL-17、IFN-γ水平的相关性。结果与对照组比较,OA组和RA组受试者血清sPD-1、IRF4、IL-4、IL-17、IFN-γ水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与OA组比较,RA组受试者血清sPD-1、IRF4、IL-4、IL-17、IFN-γ水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与RA缓解组比较,RA活动组血清sPD-1、IRF4水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);RA患者血清sPD-1水平与血清IL-4、IL-17、IFN-γ水平均呈正相关(P<0.05);RA患者血清IRF4水平与血清IL-4、IL-17、IFN-γ水平均呈正相关(P<0.05)。结论RA患者血清中sPD-1、IRF4表达水平均升高,且与疾病活动性及患者体内炎症因子水平异常有关,有潜力成为新的治疗靶点。

SPD-1、CYTL1在类风湿关节炎患者中的水平及其与免疫指标的相关性

目的 探讨可溶性PD-1(SPD-1)、细胞因子样蛋白1(CYTL1)在类风湿关节炎(RA)患者中的水平及其与免疫指标的相关性。方法 选取2019年10月至2020年10月该院收治的RA患者128例作为研究组,同期在该院体检的健康志愿者60例作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测两组SPD-1、CYTL1水平,采用多功能液相芯片分析平台检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-17(IL-17)、类风湿因子(RF)和C-反应蛋白(CRP)水平,采用流式细胞仪检测血清CD3+、CD4+、CD8+T细胞比例和B细胞比例。采用多元线性回归分析RA患者中SPD-1、CYTL1水平与部分免疫指标之间的相关性。结果 研究组SPD-1水平高于对照组(P<0.05),研究组CYTL1水平低于对照组(P<0.05);研究组TNF-α、RF、CRP水平及B细胞比例均高于对照组(P<0.05),研究组IFN-γ、IL-4、IL-17水平及CD3+、CD4+、CD8+T细胞比例均低于对照组(P<0.05);多元线性回归分析结果显示,IL-4水平对RA患者的SPD-1、CYTL1水平产生影响(P<0.05)。结论 RA患者的SPD-1、CYTL1水平高于健康人,同时RA患者机体的部分免疫指标发生了一系列的生理化学变化,SPD-1、CYTL1水平与免疫指标IL-4水平存在相关性。

LncRNA MIR22HG通过海绵吸附miR-22-5p对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、凋亡和炎性反应的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)MIR22HG对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLSs)增殖、凋亡和炎性反应的影响及其分子机制。方法收集在本院接受治疗的37例RA患者及30例关节创伤患者的滑膜组织样本,采用qRT-PCR检测滑膜组织中MIR22HG和miR-22-5p表达水平。体外分离、培养和鉴定人RA-FLSs,将MIR22HG siRNA干扰质粒(si-MIR22HG)及其阴性对照质粒(si-NC)和miR-22-5p inhibitor及其阴性对照(inhibitor-NC)分别或同时转染至RA-FLSs中,qRT-PCR检测细胞中MIR22HG和miR-22-5p表达水平;CCK-8检测各组细胞增殖活性;Annexin Ⅴ-FITC/PI检测各组细胞凋亡率;ELISA检测各组细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-6水平;Western blot检测各组细胞中Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证MIR22HG与miR-22-5p之间的靶向关系。结果与关节创伤患者比较,RA患者滑膜组织中MIR22HG表达水平升高(P<0.05),而miR-22-5p表达水平降低(P<0.05)。干扰MIR22HG可抑制RA-FLSs增殖活性,降低细胞上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6水平及细胞中Bcl-2蛋白表达水平(P<0.05),提高细胞凋亡率、miR-22-5p及Bax、Cleaved casepase-3等蛋白表达水平(P<0.05)。然而,抑制miR-22-5p表达可逆转MIR22HG基因沉默对RA-FLSs增殖、凋亡和炎症的影响(P<0.05)。双荧光素酶报告实验显示,miR-22-5p是MIR22HG潜在的下游靶miRNA。结论MIR22HG在RA患者关节滑膜组织中高表达,其可能通过靶向下调miR-22-5p表达促进RA-FLSs增殖及炎性反应,并抑制细胞凋亡。

miR-93-5p靶向下调ROCK2表达对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-93-5p对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLSs)增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的机制。方法:选择类风湿性关节炎(RA)患者(RA组,n=37)和接受关节置换手术的关节创伤患者(对照组,n=30)作为研究对象,从RA患者滑膜组织分离出RA-FLSs,采用免疫荧光法和流式细胞术鉴定细胞。将RA-FLSs分为空白组、mimics NC组(转染miR-93-5p mimics NC)、mimics组(转染miR-93-5p mimics)、OE-NC组(转染ROCK2过表达空载质粒)、OE-Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(ROCK)2组(转染ROCK2过表达质粒)、mimics+OE-NC组(共转染miR-93-5p mimics和ROCK2过表达空载质粒)和mimics+OE-ROCK2组(共转染miR-93-5p mimics和ROCK2过表达质粒)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组患者滑膜组织和各组细胞中miR-93-5p和ROCK2 mRNA表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,EdU染色检测各组细胞中EdU阳性细胞率,Transwell小室实验检测各组RA-FLSs迁移和侵袭数,Western blotting法检测各组细胞中ROCK2、Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-93-5p与ROCK2之间的靶向关系。结果:免疫荧光法检测,Vimentin蛋白表达呈阳性。流式细胞术检测,第3代RA-FLSs表面CD55呈阳性表达,CD14和CD68呈阴性表达,证实分离的细胞为RA-FLSs。RT-qPCR法检测,与对照组比较,RA组患者滑膜组织中miR-93-5p表达水平明显降低(P<0.01),ROCK2 mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。与空白组和mimics NC组比较,mimics组细胞中miR-93-5p表达水平明显升高(P<0.01),ROCK2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。CCK-8法和EdU染色检测,与mimics NC组比较,mimics组细胞增殖活性和EdU阳性细胞率明显降低(P<0.01),OE-ROCK2组细胞增殖活性和EdU阳性细胞率明显升高(P<0.01);与mimics组比较,mimics+OE-ROCK2组细胞增殖活性和EdU阳性细胞率明显升高(P<0.01)。Transwell小室实验检测,与mimics NC组比较,mimics组RA-FLSs的迁移和侵袭数明显减少(P<0.01),OE-ROCK2组RA-FLSs的迁移和侵袭数明显增加(P<0.01);与mimics组比较,mimics+OE-ROCK2组RA-FLSs的迁移和侵袭数明显增加(P<0.01)。Western blotting法检测,与mimics NC组比较,mimics组细胞中ROCK2、Ki-67、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显降低(P<0.01),OE-ROCK2组细胞中ROCK2、Ki-67、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与mimics组比较,mimics+OE-ROCK2组细胞中ROCK2、Ki-67、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。miR-93-5p与ROCK2-3’-UTR之间存在靶向结合位点。双荧光素酶报告实验验证转染miR-93-5p mimic可明显降低ROCK野生型(ROCK2-WT)组细胞中荧光素酶活性(P<0.01)。结论:过表达miR-93-5p通过靶向下调ROCK2表达抑制RA-FLSs的增殖、迁移和侵袭。

正清风痛宁片联合塞来昔布对类风湿关节炎患者疾病活动指标、炎症因子及红细胞免疫功能的影响

目的:探讨正清风痛宁片联合塞来昔布对类风湿关节炎(RA)患者疾病活动指标、炎症因子及红细胞免疫功能的影响。方法:选取2016年8月~2019年10月我院接收的117例RA患者。根据随机数字表法分为研究组(n=59)、对照组(n=58)。对照组予以塞来昔布治疗,研究组在对照组的基础上联合正清风痛宁片治疗,两组均治疗1个月。统计两组治疗1个月后的临床疗效。比较两组治疗前、治疗1个月后的疾病活动指标[类风湿因子(RF)、C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)],红细胞免疫功能指标CR1、CD59以及炎症因子指标[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)以及白介素-6(IL-6)],记录两组治疗期间不良反应情况。结果:研究组治疗1个月后的总有效率为89.83%(53/59),高于对照组的72.41%(42/58)(P<0.05)。两组不良反应发生率对比无差异(P>0.05)。两组治疗1个月后RF、CRP、ESR、TNF-α、IL-1β以及IL-6水平均较治疗前下降,且研究组低于对照组(P<0.05)。两组治疗1个月后CR1、CD59均较治疗前升高,且研究组高于对照组(P<0.05)。结论:正清风痛宁片联合塞来昔布治疗RA患者,疗效显著,可有效降低患者疾病活动指标、炎症因子水平,提高红细胞免疫功能,且不增加不良反应发生率。

移植Toll样受体3处理脐带间充质干细胞对小鼠狼疮性肾炎的治疗效果及其机制

目的:探讨Toll样受体3 (TLR3)激活对人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)移植治疗狼疮性肾炎(LN)的效果,并初步阐明其作用机制。方法:培养hUC-MSCs并鉴定,10 mg·L^(-1)聚肌胞苷酸处理hUC-MSCs。45只MRL/Lpr雌性小鼠随机分为模型组、hUC-MSCs组和TLR3+hUC-MSCs组,另取15只C57BL/6C雌性小鼠作为对照组;小鼠尾静脉注射hUC-MSCs或聚肌胞苷酸处理的hUC-MSCs。给药后,每2周测定1次小鼠24 h尿蛋白水平;8周后采血并取肾组织,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组小鼠血清中抗双链DNA (dsDNA)抗体水平和肾组织中肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白细胞介素1β (IL-1β)、白细胞介素6 (IL-6)和白细胞介素17 (IL-17)水平。HE染色和PAS染色观察各组小鼠肾组织病理形态表现,免疫荧光染色检测各组小鼠肾组织中IgG和补体C3沉积。Western blotting法检测各组小鼠肾组织中蛋白激酶B (Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和自噬相关蛋白表达水平。结果:hUC-MSCs具有典型的间充质干细胞特征。与对照组比较,模型组小鼠血清中抗dsDNA抗体水平明显升高(P<0.05),肾组织中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17水平明显升高(P<0.05),肾组织中出现肾小球系膜细胞增生、肾小管萎缩坏死和炎症细胞浸润现象,肾组织中IgG和C3沉积明显(P<0.05),肾组织中Akt和mTOR蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)和酵母ATG6的同系物(Beclin1)蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,给药4周时TLR3+hUC-MSCs组小鼠24 h尿蛋白水平降低(P<0.05),6和8周时hUC-MSCs组和TLR3+hUC-MSCs组小鼠24 h尿蛋白水平均明显降低(P<0.05),血清中抗dsDNA抗体水平降低(P<0.05),肾组织中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17水平明显降低(P<0.05),肾组织病变有一定程度的改善,肾组织中IgG和C3沉积减少(P<0.05),且TLR3+hUC-MSCs组小鼠肾组织改善更为明显;hUC-MSCs组和TLR3+hUC-MSCs组小鼠肾组织中Akt和mTOR蛋白表达水平明显降低(P<0.05),LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与hUC-MSCs组比较,TLR3+hUC-MSCs组小鼠肾组织中LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:TLR3能够增强hUC-MSCs移植治疗小鼠LN的作用,可抑制肾组织炎症反应并调节细胞自噬水平。

探讨抗核抗体在类风湿性关节炎患者诊疗中的作用

描述类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)中抗核抗体(Antinuclear antibody,ANA)阳性及阴性患者的临床资料差异。方法 选择2018年1月~2020年12月于海南省人民医院风湿免疫科住院的636例RA患者的临床资料及实验室检查结果,回顾性分析我科RA患者资料,统计RA患者ANA与临床表现之间的联系及差异性。结果 共纳入580例RA患者,其中女性471例(81.2%),男性109例(18.8%),发病年龄12~70岁,平均42±10岁,平均病程9(4,17)年。病程初期,检查ANA阳性患者404例(69.7%),抗体阴性患者176例(30.3%)。共292例患者在随诊期间有复查ANA,ANA阳性RA患者女性比例较ANA阴性患者(85.6%vs75.7%,P=0.002)更高,ANA阳性RA患者发病年龄更小(41.5±10vs43.9±9.8,P=0.003),病程更短[4(8,15)vs.10.5(5,20),P=0.04]。ANA核颗粒型及核均质颗粒型RA患者较核均质型患者合并间质性肺疾病(Interstitial lung disease,ILD)几率更高(54.4% 57.9%vs36.8%,P=0.007)。ANA滴度≥1:1000群体中15例(22.06%)患者在后续随诊过程中诊断合并其它自身免疫病(autoimmune disease,AID),其中干燥综合征4例(26.67%)、系统性硬化症(Systemic sclerosis,SSc)7例(46.67%)、系统性红斑狼疮4例(26.67%)。结论 RA患者中ANA阳性群体女性比例更高、发病年龄更小,ANA核均质型的RA患者合并ILD几率较其它核型以及ANA阴性的群体更低,高滴度ANA可能指向后续随诊期间出现其它AID。

育龄女性系统性红斑狼疮患者月经周期紊乱的影响因素研究

探讨育龄女性系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus, SLE)患者月经周期紊乱的影响因素,为SLE的临床治疗提供有价值的线索。方法:收集我院2019年1月1日~2021年7月31日诊治的SLE患者,根据月经周期状态为规律组和紊乱组,两组相关临床相关指标进行单因素、多因素分析。结果:①本研究中共计纳入237例SLE患者,月经周期规律者126例,月经周期紊乱者111例,月经周期紊乱发生率为46.84%;②两组患者在平均年龄、初潮年龄差异均无统计学意义(P>0.05);(3)单因素分析显示:两组患者免疫抑制剂的使用情况、总胆固醇、雌二醇、睾丸素比较差异有统计学意义(P<0.05);(4)多因素分析显示:免疫抑制剂的使用情况、总胆固醇、雌二醇是系统性红斑狼疮患者月经周期紊乱的独立危险因素(P<0.05)。结论:免疫抑制剂的使用情况、总胆固醇、雌二醇可能会引起系统性红斑狼疮患者月经周期紊乱,要关注育龄女性患者免疫抑制剂使用,以及总胆固醇和雌二醇的变化,更好地调整治疗方案。

超声心动图对系统性红斑狼疮心脏损害的价值讨论

系统性红斑狼疮(SLE)心脏损害患者采用超声心动图诊断并观察其效果。方法:观察患者为我科诊断的SLE心脏损害患者27例,起止时间为2020年1月--2021年7月,并且将患者分成SLE组,同时选取同期健康体检者27例作为正常体检组,对照两组人员采用超声心动图诊断情况。结果:(1)两组超声心动图心包积液对照中,SLE组心包积液发生率为14例,占比58.33%,正常体检组心包积液发生率为0例,占比0%,(P<0.001),结果有差异。(2)两组超声心动图瓣膜病变对照,SLE组瓣膜病变发生13例,占比48.14%,正常体检组瓣膜病变发生1例,占比3.70%,(P<0.001),结果有差异。(3)两组心腔血管内径室壁厚度比较,SLE组LA厚度、PA厚度、IVS厚度、LVPW厚度分别是28.30±3.09(mm)、23.47±2.56(mm)、9.83±1.02(mm)、9.54±1.01(mm),正常体检组LA厚度、PA厚度、IVS厚度、LVPW厚度分别是25.11±2.78(mm)、18.22±1.87(mm)、7.98±0.85(mm)、7.82±0.84(mm),(P<0.001),结果有差异。结论:SLE心脏损害患者采用超声心动图能够准确了解其心脏损害变情况,以便为后期治疗提供依据。