小鼠模型中神经酰胺对血小板介导的输血相关急性肺损伤的作用

目的评价老化的血小板中的神经酰胺对输血相关急性肺损伤(transfusion-related acute lung injury,TRALI)的作用机制。方法通过脂多糖预刺激,随后输注10 m L/kg储存1~5 d的血小板,在BALB/c小鼠体内构建TRALI的二次打击模型。采用酸性鞘磷脂酶特异性抑制剂ARC39或输注来自酸性鞘磷脂酶缺乏小鼠的血小板对TRAIL模型小鼠进行干预,评价不同时间点小鼠血小板中鞘磷脂成分,以及TRAIL模型小鼠肺中性粒细胞积聚情况,内皮屏障功能,肺组织病理学损伤程度。结果存储1~5 d的血小板输注到脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)预刺激后的C57/B6小鼠体内能够引起肺组织的特征性损伤,且损伤严重程度随血小板储存时间的增加而加剧。血小板中的神经酰胺在储存过程中不断积累和释放。与对照组相比,输注ARC39预处理后的血小板或酸性鞘磷脂酶缺乏的血小板可明显缓解肺组织的损伤。结论老化的血小板会导致小鼠发生TRALI,但这种损伤可以通过酸性鞘磷脂酶抑制剂或特异性敲除酸性鞘磷脂酶基因来逆转和治疗,针对鞘脂形成的干预措施有望成为增加血制品存储安全性和寿命的有效策略。

微柱凝胶技术在新生儿溶血病抗体检测中的应用研究

目的探讨微柱凝胶技术在新生儿溶血病(HDN)抗体检测中的应用价值。方法收集2012-01-01—05-31在海口市人民医院住院的临床表现为高胆红素血症、诊断为HDN的患儿62例,采集其血标本,分别用微柱凝胶技术和传统试管法进行直接抗人球蛋白试验、抗体游离试验及抗体放散试验,并对检测结果进行比较分析。采用SPSS 13.0统计学软件进行统计处理,计数资料比较采用χ2检验。结果 62例患儿血标本,采用微柱凝胶技术检出直接抗人球蛋白试验阳性54例(87.1%),抗体游离试验阳性56例(90.3%),抗体放散试验阳性59例(95.2%);采用试管法检出直接抗人球蛋白试验阳性42例(67.7%),抗体游离试验阳性48例(77.4%),抗体放散试验阳性52例(83.9%);两种方法直接抗人球蛋白试验阳性率、抗体游离试验阳性率、抗体放散试验阳性率比较,差异均有统计学意义(χ2=6.64,P=0.01;χ2=3.86,P=0.04;χ2=4.21,P=0.04)。结论微柱凝胶技术的敏感性高于试管法,其操作简便、结果稳定、重复性好,值得在临床实验室推广应用。

血小板输注有效剂量的调查及分析

血小板是临床重要的血液制品，用量仅次于悬浮红细胞，在各种血液成分用量中列第2位。近年来临床血小板输注量逐年增加，作者通过对不同剂量血小板输注患者进行回顾性调查分析，为临床提供有效剂量输注血小板的依据，以降低血小板输注风险，提高血小板输注疗效。现将结果报告如下。

980例孕产妇不规则抗体检测结果分析

目的通过对孕产妇进行不规则抗体检测，深入探讨其与新生儿溶血病发生的关系。方法采用微柱凝胶技术对980孕妇进行不规则抗体检测，对阳性者用谱红细胞检测抗体特异性，免疫球蛋白类型用2-Me区分IgM和IgG，对阳性者孕产妇所生的新生儿做新生儿溶血病检测。结果980例孕妇不规则抗体检测阳性有6例，占0．61％，抗体特异性分别为抗-D3例、抗-E1例、抗-C1例、抗-M1例；其中2例新生儿红细胞被来自母体的不规则抗体所致敏。结论产前进行不规则抗体的检测，对早预防、早诊断非ABO新生儿溶血痛具有十分重要的意义。

621份临床输血病案的质量调查

目的了解输血病历中存在的问题,规范临床输血病历。方法随机抽查621份我院自2010年1月至2012年12月归档的输血病案。检查病案首页、输血治疗知情同意书、输血前检验、输血适应证、输血护理记录、输血不良反应、输血评估及疗效评价7个项目,计算缺陷率和合格率。结果 188份输血病案存在不同程度的缺陷,缺陷病案比例为30.2%,其中43份病案存在2处以上的缺陷,缺陷病案比例为6.92%,共缺陷352次,进行各项不合格率统计。结论输血病案存在许多缺陷,医院必须加强对输血工作的管理,规范填写输血病历记录,提高输血病历记录质量,确保输血安全。

K562来源的外泌体对骨髓间充质干细胞造血和成骨基因表达的影响

目的探讨K562细胞来源的外泌体(EXO)对骨髓间充质干细胞(BMMSCs)支持造血和成骨分化相关因子表达的影响。方法利用超速离心法提取K562细胞培养上清中的EXO并进行鉴定。在体外,诱导BMMSCs的成骨分化,根据是否加入EXO分为3组:BMMSCs+PBS、BMMSCs+EXO(25μg/mL)、BMMSCs+EXO(50μg/mL)。qRT-PCR和Western blot检测BMMSCs中支持造血和成骨基因的表达,ELISA测定碱性磷酸酶(ALP)活性和细胞基质钙含量。多时间点间比较采用重复测量方差分析,多组间差异采用ANOVA分析,组间两两比较采用Tukey's test检验。结果三组各时间点CXC型趋化因子配体12(CXCL12)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-6(IL-6)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、碱性磷酸酶(ALP)和Ⅰ型胶原酶(ColⅠ)mRNA表达及ALP活性和细胞基质钙含量行重复测量方法分析发现,时间点间、组间、组间×时间点间差异均有统计学意义(P<0.05);与BMMSCs+PBS相比,BMMSCs+EXO(25、50μg/mL)组在第1、3、7天的CXCL12、GM-CSF、RUNX2、ALP和ColⅠmRNA水平下调,IL-6 mRNA水平上调,差异有统计学意义(P<0.05)。与BMMSCs+EXO(25μg/mL)组相比,BMMSCs+EXO(50μg/mL)组CXCL12(3 d:0.42±0.11比0.26±0.12,7 d:0.39±0.11比0.24±0.10)、RUNX2(3 d:0.24±0.10比0.10±0.03)和ColⅠmRNA水平(1 d:0.74±0.19比0.58±0.20,7 d:0.12±0.16比0.08±0.16)下调,IL-6 mRNA水平(1 d:1.36±0.54比2.14±0.42,3 d:2.46±0.47比3.30±0.42,7 d:3.62±0.49比4.30±0.48)上调,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot发现,与BMMSCs+PBS相比,BMMSCs+EXO(25、50μg/mL)组CXCL12(1.00比0.54±0.10、0.32±0.08)、GM-CSF(1.00比0.46±0.12、0.42±0.03)、RUNX2(1.00比0.57±0.12、0.45±0.23)、ALP(1.00比0.46±0.06、0.35±0.23)和ColⅠ表达(1.00比0.74±0.15、0.53±0.23)降低,IL-6表达(1.00比5.24±0.25、10.27±0.13)增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与BMMSCs+EXO(25μg/mL)组相比,BMMSCs+EXO(50μg/mL)组CXCL12表达(0.54±0.10比0.32±0.08)降低,IL-6表达(5.24±0.25比10.27±0.13)增加,差异有统计学意义(P均<0.05)。此外,与BMMSCs+PBS组相比,BMMSCs+EXO(25、50μg/mL)组ALP活性(7 d:1.75±0.58比0.72±0.18、0.58±0.16,14 d:2.78±0.75比1.50±0.32、0.83±0.30)和细胞基质钙含量(14 d:2.73±0.68比1.43±0.42、0.85±0.40)降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论K562细胞来源的EXO影响BMMSCs支持造血和成骨相关因子的表达,抑制了BMMSCs的成骨分化,并且有可能影响其支持造血功能。